【最新word论文】11例急性巨核系白血病患者巨核细胞的超微结构分析【临床医学专业论文】.doc

111 例急性巨核系白血病患者巨核细胞的超微结构分析作者：茹永新， 赵轼轩， 刘津华， 秘营昌， 竺晓凡， 王慧君， 王建祥【摘要】 为了研究急性巨核细胞白血病患者骨髓中幼稚巨核细胞的超微结构特点，根据电子显微镜观察结果，回顾性分析 11 例急性巨核白血病患者骨髓巨核细胞的形态结构和血小板过氧化物酶（PPO）表达情况结果表明： 11 例中 7 例例巨核细胞直径在 20 μm 以内，其中 2 例细胞直径 10-15 μm， PPO 阳性率 50%以上，大部分细胞外形规则，大小均匀，表面突起少，核不规则，核质比大，胞浆颗粒细小，分界膜发育不完全，管道排列无规律；5 例巨核细胞直径20 μm 左右，PPO 阳性率在 8%-22%之间，核呈圆形或马蹄形，异染色质不等，其中 3 例无幼稚分界膜和致密颗粒，2 例偶见11 例中 5 例细胞直径在 20-40 μm 之间，PPO 阳性率 16%-80%，大细胞表面有不规则突起，核质比不等，核不规则，异染色质多，核仁不明显，胞质有成熟分界膜结构、管道系统和成熟α 颗粒结论：大部分患者巨核细胞以Ⅰ期分化阶段为主，少数病例伴有少量Ⅱ、Ⅲ期细胞；相同或不同患者骨髓中未成熟巨核细胞的发育程度存在差异。

【关键词】 急性巨核细胞白血病Ultrastructural Characteristics of Megakaryocytes in 11 Patients with Acute Megakaryocytic LeukemiaAbstract The purpose of study was to investigate the ultrastructural features of leukemic megakarocyte (LMK) in patients with acute megakaryocytic leukemia (M7). Analyzing the ultrastructure characteristics of LMK and positive ratio of platelet peroxides (PPO) in 11 patients with M7 were analyzed on basis of transmission electron microscopic observation retrospectively. The results showed that the diameter of LMK in 7 out of 11 cases was less than 20 μm, in 2 cases of them, the LMK diameter was from 10 to 15 μm and their PPO positive ratio was more than 50%, most LMK displayed regular shape, less protrusions, irregular nucleus, high nuclear/cytoplasm ratio, tiny granules, undeveloped demarcation membrane system (DMS) and irregular tubules in cytoplasm; in 5 out of those 7 cases the diameter of LMK was about 20 μm, PPO positive cell count was from 8% to 22%, most showing round or horseshoe nuclei, more or less heterochromatin, no DMS and granules were found in LMK in 3 cases and 2 cases occasionally. In other 5 out of 11 cases, the diameter of LMK was from 20 to 40 μm and PPO positive ratio was from 16% to 80%, in which smaller LMKs were similar to those in former cases in shape, and the larger LMK had irregular protrusions, varied nuclear/cytoplasm ratio, more 2heterochromatin, prominent nucleolus, some of them contained developed DMS, tubules and αgranules. It is concluded that most patients with M7 are predominant of LMK in stageI and minority contained LMK in II or III stage simultaneously. The differentiation degrees of LMK are different in individual and various cases.Key words ultrastructure; acute megakaryocytic leukemia; differentiationJ Exp Hematol 2007; 15(4):720-723急性巨核细胞白血病 1985 年被列入 FAB 分类（AMLM7 ） ，占 AML 发病率的5%-10%［1］ 。

国内临床和科研人员用光学显微镜对白血病巨核细胞的形态进行了仔细观察,发现在白血病过程中巨核细胞形态变异很大并且把细胞多形性作为临床诊断 M7 的标准之一［2］ 事实上光学显微镜只能识别高分化幼稚巨核细胞，难以全面反映恶性细胞的超微结构和分化程度本研究对 2000 至 2005 年之间本院的 11 例 AMLM7 住院患者的骨髓未成熟巨核细胞进行回顾性电子显微镜观察，结果报告如下病人一般情况男 5 例，女 6 例，年龄在 1-53 岁之间，平均年龄 30 岁9 例为初诊患者，2 例继发于慢性粒细胞白血病临床表现发热、乏力、出血、腹痛和腹胀，外周血检查以全血细胞减少和贫血为主；病理检查显示 5 例患者继发骨髓纤维化所有患者经形态、病理、细胞组织化学、染色体、细胞流式仪或免疫组织化学检查，确诊为 M7（表 1） 电子显微镜标本制备常规透射电子显微镜和 PPO 组织化学标本制备按文献［3］完成部分骨髓有核细胞加入血小板过氧化物酶孵育液（0.05 mol／L Tris 缓冲液，pH 7.6； 1 ml 加 3,3 二氨基联苯胺 2 mg、3％ H2O2 20 μm） ，37℃避光振荡孵育 90 分钟；其它细胞用 2.5％戊二醛 4℃固定 2 小时，用于透射电镜观察。

包埋、超薄切片按常规进行，常规用铅铀染色，PPO 组织化学标本不染色电子显微镜观察先观察 PPO 标本，计数 PPO 阳性细胞占有核细胞的百分比，测定阳性细胞直径细胞大小用一个网眼内细胞最大和最小直径表示，最大和最小直径大于 5 μm 为大小不均根据组织化学对比观察常规标本中巨核细胞结构，表面无或偶见伪足和突起用"－"表示，"+"为 1/3 细胞以下有伪足，"++"为 1/3 到半数以内可见突起，"+++"表示半数以上细胞有伪足核质比用同一网眼中巨核细胞核与胞体直径比表示同网眼中半数以上细胞核为圆形，刻痕和切迹深度小于最长直径 1/8，为核轻度不规则，用"+"表示；折叠或切迹深度大于最长直径 1/8 而小3于 1/4，为中度不规则，用"++"表示；细胞核扭曲、多极，大于最大直径 1/4，或长短直径比大于 2，为极度不规则，用"+++"表示细胞不含分界膜或管道结构为"－"，1/3 以下细胞有为"＋"，1/3 到 2/3 之间为"++"，2/3 以上为"+++"，致密颗粒多少评定方法相同结 果超微结构观察显示不仅不同患者幼稚巨核细胞数量和细胞器结构分化发育差别显著，而且同一患者骨髓内巨核细胞 PPO 阳性率和阳性强度也存在差别，部分细胞阳性明显，部分为阴性或弱阳性（表 2） 。

所有病例骨髓内可见分化程度不同幼稚巨核细胞，成熟巨核细胞少见，幼稚细胞形态不一，管道系统幼稚简单，无明显分布规律，分界膜内无血小板，α 颗粒少或电子密度低，11 例中 7 例患者巨核细胞体积小，直径在 20 μm 以内，外形规则，大小均匀，表面突起少，7 例中 2 例（病例 1、4）细胞 PPO 阳性率在 50%以上，外观似淋巴细胞，直径在 10-15 μm 之间，核轻度不规则，核质比大，异染色质多，核仁小，多数细胞有细小颗粒，大部分无 α 颗粒，其它细胞器少；少数细胞含典型 α 颗粒，分界膜细小、狭窄，或呈囊腔样结构，散在分布，有时难以与未成熟高尔基体鉴别，胞浆含粗细一致的管道结构，排列无规律（图 1A，B，C） 另外 5 例患者（病例 5、6、7、8、10）PPO 阳性率在8%-22%之间，巨核细胞直径 20 μm 左右，外观似原始或幼稚单核细胞，核为圆形、马蹄形或胎儿形，核质比例比前 2 例低，异染色质多少不等，核仁明显，这5 例中 3 例（病例 6、7、10）无分界膜和致密颗粒，2 例（病例 5、8）偶见不成熟分界膜和小致蜜颗粒（图 2A，B） 11 例中 4 例患者（病例 2、3、9、11）骨髓巨核细胞大小不等，胞浆量与细胞大小相关，核质比高低不一，PPO 阳性率在16%-80%之间，小细胞阳性多，大细胞阳性少。

直径 20 μm 以内细胞形态结构和上述 7 例相似；直径 20 μm 以上细胞表面有大量不规则突起或伪足，核极度不规则，呈马蹄形、胎儿形、多极、多个或多叶，异染色质丰富，核仁明显，胞浆丰富，部分细胞可见局灶性迷路样折叠的分界膜，间隙宽大，结构较成熟，表面有时可见管道结构，除质地均匀的致密颗粒外，部分颗粒有明显高密度和低密度区，为成熟的牛眼样 α 颗粒2 例（病例 9，11）部分骨髓巨核细胞直径达 40 μm，发育程度不等（图 2C） 讨 论白血病性巨核细胞的形态变化最大,光学显微镜下描述为"异常细胞"、"不明细胞"、"单核样细胞"、"淋巴样巨核细胞"及"小巨核细胞"电子显微镜观察根据分界膜、管道结构、α 颗粒、核内有丝分裂，以及细胞大小、染色质、血小板形成情况把正常巨核细胞分为 4 个发育阶段Ⅰ期巨核细胞直径在 6-24 μm 之间，核质比大，核规则，异染色质较少，有核仁，无核内有丝分裂，核糖体丰富，α 颗粒，Golgi 体少，分界膜开始发育，所占空间小，这个阶段属于原始阶段；Ⅱ期细胞直径在 14-30 μm 之间，核内有丝分裂开始，核为分叶状，胞浆增多，有未成熟 α 颗粒和局灶性分界膜，4属于幼稚阶段细胞；Ⅲ、Ⅳ期细胞核内有丝分裂加强，直径在 40-60 μm 之间，胞浆高度发育，核质比小，出现成熟 α 颗粒和大面积分界膜结构，Ⅳ期细胞周边出现微管和微丝环状结构，可见细胞器较少的周边空白区，分界膜系统进一步成熟脱落，形成血小板［4］ 。

本组 11 例患者的巨核细胞大都属于Ⅰ期，多数细胞直径在 20 μm 以内，有微管、膜性囊腔及微小致密颗粒，缺乏成熟阶段应有的 α 颗粒、分界膜系统、胞膜下环状微丝微管以及无结构胞浆区，显示 M7 以幼稚和低分化细胞为主的特点这些小细胞又分两种类型，一种直径在 10-15 μm 之间，外形规则，异染色质多，胞浆稀少，光学显微镜下属于淋巴样巨核细胞［5］ ，但电子显微镜下可以看到清晰的管道和膜性囊腔及致密小颗粒，核膜 PPO 阳性率高；另一类体积稍大，直径在 15-20 μm 之间，表面突起稍多，胞浆丰富，异染色质较少，核仁。