如何实现高效、准确、快捷地测定大批量溶出度样品.doc

1如何实现高效、准确、快捷地测定大批量溶出度样品谢 沐 风上 海 市 食 品 药 品 检 验 所 上 海 市 浦 东 新 区 张 衡 路 1500 号邮 编 ：201203 邮 箱 ：xiemufeng@摘要：固体制剂的多条溶出曲线测定愈发受到关注如何实现高效、准确、快捷地测定大批量溶出度样品开始困扰分析人员，尤其是在保证测定数据介于允许误差范围的前提下，如何实现事半功倍、而非事倍功半的测定技巧上，本文提出了许多建设性意见，供试验者参考关键词： 溶出度；高效准确；大批量样品目前，测定固体制剂的多条溶出曲线愈发受到关注 [1,2,3]，其在制剂工艺研发、 处方筛选、仿制药生物等效性试验的预评价，以及同一品种不同来源产品间内在品质的差异评估等方面，已逐渐发挥出举足轻重的作用 [4,5]；由此引发的如何高效、准确、快捷地 测定大批量溶出度样品开始困扰分析人员；尤其是在保证测定数据介于允许误差范围的前提下，如何实现事半功倍、而非事倍功半的测定技巧上，本人基于多年工作经验进行了梳理与归纳， 撷取以下思路与观点供试验者参考1. 对于片剂/桨板法的测定采用错时投样对于片剂/桨板法、为使手 动取样时不至“手忙脚乱 ”，采取间隔固定时间（如 30 秒）的投样方式， 这样便可做到平行操作、从容不迫了。

2. 手动抽取样品建议采用“1 个 滤头/1 个取样针筒方式”进行多样品抽取在规定的第一取样时间点前 1 分钟，抽取第 1 杯中 样品 10~20ml 后， 过滤使滤膜吸附饱和，并将滤液沿溶出杯壁缓 慢注回，待设定时间到、再抽取所需体 积（如 HPLC 法、1~2ml 即可）过滤，取 滤液即可，其后所有样品无需再弃去初 滤液，直接收集至于 对样品间污染的担忧，由于针筒内残余量很少，故 误差完全可忽略此处强烈建议：不要采用“分别滤头/分别针筒方式” ，既浪费人力和物力，又会给试验带来2较大误差3. 尽可能采用 HPLC 测定法现今，由于国产辅料质量参差不齐，在紫外 处有吸收的品种较多，尤薄膜衣 /肠溶衣/糖衣/胶囊壳更甚，导致紫外法测 定时、 经常会出现溶出度均值高出含量 10%~50%的情况同 时，由于原研参比制剂辅料一般无法获得，故辅料对测定结 果的干扰更将无法评价 [6]综上所述、强烈建议采用 HPLC 测定法因为绝大部分辅料皆属惰性、在反相色谱柱上不会出峰，即便出峰保留时间 也较短，故皆不会干扰 主成分 测定再者、由于 HPLC 法线性范 围宽， 样品均可直接进样测定，且随着自动进样设备的普及，省略掉紫外测定吸收度值需在 0.20~0.80、样品必 须经 稀释的繁琐步骤，大大提高了工作效率。

现今，某些厂商的自动溶出仪收集器已可直接接收于液相小瓶内，且由于附带了加垫片的盖儿，可防止采集过程中瓶内液体的 挥发，方便易行、快捷便利如采用紫外法测定，为尽可能排除干扰， 强烈建议采用双波长相减法（最大吸收波长与远端无吸收波长）但如样品是手 动操作测定， 这将极其繁琐 现今的市售光纤溶出仪，采用了“予以校正的紫外法”；该法在可保证排除辅料干扰的前提下，还是非常值得肯定与推荐的；毕竟快速、便捷地测得一条完整曲 线对于指示药品内在品 质具有更加深远的意义和实用价值4. 如何提高 HPLC 法测定效能4.1 样品处理由于 HPLC 法测定需样品量少，每一 时间点的取样量 1~2ml 即可，因此、 对于小规格制剂（不超过 10mg），建 议样品溶液经手动取出后无需 过滤，直接置于液相小瓶中、放置 0.5 小时即可进样测定因 为在取 样点位置处，吸取 这么小体积携带出辅料的可能性极小，即便有少量存在，静置后使其沉淀，也不会影响到测定，更不会堵塞色 谱柱（5-10μm 粒径的色谱柱完3全没问题）这样，还可省略去溶出量累积计算的繁琐以及过滤时滤膜吸附的担忧，起到 “一举多得、事半功倍”之效！该法尤适用于采用自动取样装置时、管路与滤膜有吸附样品；此类多为小规格/难溶制剂，主成分皆进行了微粉化处理，比表面能 较大，故易出 现该 情形。

4.2 采用短分析柱现今，市售有 2~5cm 长、粒径 5~10μm的短分析柱、可大大缩短分析时间，还极大地节约了试剂用量、降低检测成本4.3 调节流动相、缩短保留时间为加快测定，完全可将已验证、并确定的流 动相中有机相比例提高如此，虽然有杂质与主成分未能分离的担忧，但考虑到样品已被稀释 900~1000 倍（溶出介质体积通常为该体积），在此条件下，存在的微量杂质 响应值已微乎其微，即便该杂质峰与主峰重叠，其 对于溶出结果的影响亦在误差范围内，可忽略不 计4.4 升高柱温、缩短保留时间升高柱温至 40℃~50℃一般的反相色谱柱最高承受温度可达 60℃4.5 加大流速、缩短保留时间流速可根据柱压的限制提高至 1.5~2.0ml/min、以加快测定进程4.6 调整进样量对于小规格制剂，进样量可根据对照品溶液的精密度予以灵活调节，只要仪器功能许可，100μl~500μl是完全可以的需强调的是：建议采用溶出量为标示量 10%浓度的对照品溶液进行精密度验证，以确保测 定低浓度样品时的准确性对于大规格制剂，可采用减少进样量至 5μl的方法，以省去稀释繁琐步骤、直接进样测定4.7 改变测定波长对于小规格制剂，当采用最大吸收波长仍无法满足测定精密度，则可改用吸收更强的末4端吸收波长，以增大灵敏度。

对于大规格制剂，在几近全部溶出时，由于 浓度过大，会出现色谱柱超载或检测器超载而导致峰形不佳之情形，此时 可通过改变波长（采用非最大吸收峰）使峰面积变小、从而令色谱峰精密度满足要求4.8 使用超高速液相如采用超高速液相测定，效果自然更高！但由于色谱柱粒径较小，样品液若不过滤，恐堵塞色谱柱，建 议试验时验证 后予以酌情考虑4.9 液相软件编程对于大批量样品的数据处理，一定要充分利用仪器自带的软件功能，绝不建议将每一个峰面积输入 Excel 软件计 算这种费时费力的方式现今市场上的主流品牌色谱仪皆已具有数据批量处理功能和打印功能（多张图谱结果打印在一张纸上），将这些功能开 发掌握后一次性编辑好模板，便可大大提高工作效率本人曾在 5 分钟内完成 50 个样品的数据处理（得到溶出量），每一溶出量数据直接从软件中拷贝出、粘贴至 Excel 软件中、画出溶出曲线图的全部过程古语道：“工欲善其事、必先利其器”，所以充分掌握软件功能至关重要！5．讨论5.1 溶出度的测定，仅是针对一个或两个主成分峰，故以上多项举措，皆是为提高测定效率所设5.2 HPLC 法检测某一物质的出发点源于有关物质，含量测定色谱条件 [7]虽源于有关物质、但完全可根据实际情况，另行设定为更科学易行的条件，大批量溶出度样品的测定更是如此，更不必囿于含量测定色谱条件，只要经过方法学验证，便可灵活变通。

如此可大大提高 测定效能，减轻工作者负担与时间参 考 文 献51 谢沐风. 改善溶出度评价方法，提高固体 药物制剂水平 . 中国医药工业杂志 2005,7(36),447~4512 谢沐风. 溶出度研究系列（一）. 中国药品标准， 2005,6(6):42~46.3 谢沐风. 溶出度研究系列（二）. 中国药品标准，2006,1(7):48~51.4 谢沐风、张启明等. 国外药 政部门采用溶出曲线评价口服固体制 剂内在品质的情况简介. 中国药事，2008,3(22):257-261.5 张启明、谢沐风等. 采用多条溶出曲 线评价口服固体制 剂的内在质量 中国医药工业杂志，2009,12(40):946-9506 谢沐风. 溶出度测定中应注意的若干问题. 中国医药工业杂志，2006,12(37):859-8627 谢沐风. 高效液相色谱法测定含量时关于确立色谱条件与溶液 浓度的讨论 中国药品标准杂志 2008 年 第 4 期。