液相色谱法地榆中金丝桃苷含量测定.docx

Word文档液相色谱法地榆中金丝桃苷含量测定 一、试验背景 1、目的：建立地榆中金丝桃苷的高效液相色谱含量测定方法 2、方法：采纳RP-HPLC测定，C18柱，流淌相为甲醇-0.2%磷酸溶液(46∶54)，用三乙胺调pH至3.0，流速1.0mlmin-1，检测波长370nm；供试品溶液的制备采纳甲醇超声提取 3、结果：测定了不同产地不同批次的地榆药材，金丝桃苷质量分数在0.052%～0.291%结论该方法灵敏快速，精确牢靠，可用于地榆的质量掌握 4、意义：地榆为蔷薇科植物地榆或长叶地榆的干燥根其味苦、酸、涩，微寒，具有凉血止血、解毒敛疮之功效现代药理讨论表明其具有显著的镇痛作用，主要有效成分为黄酮类化合物，但药典记载质量标准的定量检测方法仅为紫外-可见分光光度法测定其鞣质含量，该法操作繁琐金丝桃苷为地榆药材中提取得到的黄酮类化合物讨论表明，地榆中的金丝桃苷是其止痛作用的有效成分之一本试验采纳RP-HPLC法对不同产地中药材市场商品地榆的金丝桃苷成分进行了定量分析，考察了流通商品地榆的质量状况，为进一步提高地榆药材的质量掌握供应了科学依据 二、仪器与试药 1、高效液相色谱仪，含脱气机、四元梯度泵、自动进样器、智能柱温箱、紫外可见光检测器(VWD)、化学工作站。

超声波清洗器 2、地榆的干燥根或饮片试验中将样品粉碎后过100目筛，置干燥器中备用 3、金丝桃苷(111521-202103，国药品生物制品检定所,供含量测定用)甲醇为色谱纯，试验用水为Milli-Q超纯水其他试剂均为分析纯 三、方法与结果 1、对比品溶液的制备 精密称取金丝桃苷13.25mg，置量瓶中，加甲醇定容至25ml，其金丝桃苷含量为0.53mgml-1再精密吸取金丝桃苷对比品溶液2.0ml，加甲醇定容至50ml量瓶中，其金丝桃苷含量为0.0212mgml-1 2、供试品溶液的制备 取地榆干燥药材或饮片的粉末(过100目)1g，分别精密称定，至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，超声提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45m微孔滤膜滤过，用续滤液作为供试品溶液 3、色谱条件 HypersilODS2分析柱(4.6mm250mm，5m)；流淌相甲醇-0.2%磷酸溶液(46：54)，用三乙胺调pH至3.0；流速1.0mlmin-1；检测波长370nm；柱温25℃；进样量10l；在选定的色谱条件下，色谱柱的分别效率(简称柱效)理论塔板数以金丝桃苷峰计算不低于3000。

分别度大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05 4、检测波长的选择 取金丝桃苷对比品适量，用甲醇溶解后作紫外全波长扫描，286，370nm,因286nm下非黄酮物质也有汲取，为避开干扰，选择检测波长为370nm 5、线性关系的考察 分别精密吸取0.0212mgml-1的金丝桃苷对比品溶液2，4，6，8，10，12，16l注入液相色谱仪，测定基线构成之面积称峰面积A＝h＝2.507h＝1.064Wh/2h峰面积，以金丝桃苷含量(X)为横坐标，其峰面积汲取度积分值(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=2263.9X 2.9635，r=0.9998(n=7)，表明金丝桃苷在0.04～0.34g线性关系良好 6、精密度试验 精密吸取0.0212mgml-1金丝桃苷对比品溶液10l，连续进样5次，测得峰面积积分值RSD为0.86%，表明精密度良好 7、重复性试验 精密称取同一样品粉末1g(5份)，按供试品溶液的制备方法制备，进样10l，测得金丝桃苷含量的RSD为0.99%，表明该方法的重复性好 8、稳定性试验同一供试品溶液，从制备完毕开头放置，分别于0，2，4，6，8，10h进样检测，其峰面积积分值RSD为1.9%。

表明供试品溶液在10h内比较稳定 9、加样回收率试验 取已知含量的药材(6号含量1.60mgg-1)样品6份，每份0.50g，精密称定，计算样品中金丝桃苷量，分别加入适量的金丝桃苷对比品，按样品制备方法和测试条件进行测定，计算加样回收率 10、样品测定 分别精密吸取各样品10l进样测定，计算含量 四、试验结果争论 1、提取条件的选择 依据金丝桃苷的溶解性能，选择乙醇、甲醇、醋酸乙酯作为提取溶剂，比较了3种提取溶剂提取方法(超声、回流及索氏提取)和不同提取时间(0.5，1.0，1.5h)对提取效果的影响结果显示采纳超声提取方法的提取率最高，甲醇提取效果最好，含量结果表明超声提取1.0h可使待测成分提取完全试验证明，含量并未随着提取时间延长而有所增加，超过1h时含量甚至有下降的趋势 2、流淌相的选择 由于金丝桃苷为黄酮类化合物，本试验采纳甲醇和0.2%磷酸溶液的二元流淌相体系，但试验中发觉拖尾峰(tailingpeak)前者少见色谱峰有拖尾现象经反复试验发觉，在1000ml的0.2%磷酸溶液中加入1.8ml三乙胺时的分别效果最佳，经多次，多批样品测试，系统具有良好的重复性和稳定性，三乙胺能与ODS柱中键合相的残余硅醇基相互作用，提高分别度，有助于改善峰形。

因此以甲醇-0.2%磷酸溶液(46∶54)用三乙胺调pH至3.0为优，分别效果较好，保留时间适中，且无干扰［3］本方法操作简便、快速、重复性好，适用于地榆中金丝桃苷含量的测定 3、样品分析 对不同产地地榆中的金丝桃苷含量进行了测定，结果表明，不同产地金丝桃苷的含量存在着肯定的差异，有必要对其进行质量掌握 6。