冻干人凝血酶原复合物.doc

KKME---专业医学搜索引擎 dònggānrénníngxuèméiyuánfùhéwù冻干人凝血酶原复合物制造及检定规程[1]本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清，经低温乙醇法或卫生部批准的其他适宜方法提制而得的冻干制剂，并经病毒灭活处理内含凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ，主要治疗Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子缺乏症及对肝病或各种原因所致的凝血酶原时间延长而拟作外科手术等患者制造 1.1制造要求 1.1.1 血浆应无凝块，无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血新鲜分离的液体血浆或冰冻血浆、去除冷沉淀以及凝血固子Ⅷ以后的血浆均可用于生产血浆蛋白分离的组分Ⅲ沉淀存放时间最长不得超过半年所用之血浆来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》 1.1.2 对制造工作室、设备及原材料的要求与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中 1.1.3～1.1.4 项要求相同1.2　制造工艺 1.2.1　可采用自血浆中直接凝胶吸附法或低温乙醇和聚乙二醇（PEG，MW4000 或 6000）分离蛋白并经 DEAE 葡萄糖凝胶 A-50 吸附法，亦可用经卫生部批准的其他适宜方法制备，并经卫生部批准的适宜方法进行病毒灭活处理。

1.2.2　稳定剂制品内可加稳定剂，若加肝素，按总效价即血浆当量单位（PE）数加入等单位的肝素注射液1.2.3　除菌过滤及分装本品宜采用薄膜过滤，直接分装入无菌的成品瓶内，每瓶装量根据效价及成品规格确定1.2.4　冻干除菌过滤分装的制品经外观检查后立即旋冻，并按《人血白蛋KKME---专业医学搜索引擎 项的规定进行冻干，但制品温度不得超过 35℃1.2.5　分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批，不同滤品和不同机柜冻干的制品分为亚批1.3　半成品检定每批半成品应进行效价测定及热原质试验，并按亚批做无菌试验1.4　成品规格每瓶凝血酶原复合物的效价可有100、200、300、400、1000PE 分钟成品检定 2.1 抽样每批成品应抽样作全面质量检定不同机柜冻干制品应分别抽样作无菌试验及水分测定2.2　物理检查 2.2.1　外观应为白色或灰绿色疏松体，无融化亦象，溶解后应为淡黄色或黄绿色澄明溶液，不应有异物或沉淀2.2.2　真空度以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光2.2.3 溶解时间从冰箱取出制品，温度应先平衡至 20～25℃，按瓶签标示量加入适量 20～25℃灭菌注射用水，使每 ml 含 10PE。

制品应于 15 分钟内溶解2.3　化学检定按《生物制品化学检定规程》进行2.3.1　水分水分含量应≤3%（g/g） 2.3.2pH 值取 2.2.3项下溶液在 20±2℃测定，pH 值应为 6.8～7.62.3.3PEG 含量测定取 2.2.3 项下溶液测定，PEG 含量应≤0.05%（g/ml） 2.3.4　钠离子含量测定钠离子含量≤160mmol/L2.4　凝血酶活性测定取 2.2.3 项下的溶液按附录 1 进行测定不得有凝块或纤维蛋白析出2.5 效价测定取 2.2.3 项下的溶液按附录 2 进行测定每瓶效价应不低于标示量的 80%2.6HBsAg 检测用敏感性为 1ng/ml 以下的试剂盒检测，应为阴性2.7 抗 HCV 检测用敏感的方法检测，应为阴性 2.8　抗HIV-1 及 2 检测用敏感的方法检测，应为阴性 2.9　无菌试验按KKME---专业医学搜索引擎 　安全试验 2.10.1 豚鼠试验用体重 300～400g 健康豚鼠 2 只，每只腹腔注射检品 5ml（每 ml 含10PE） ，注射后半小时内动物不应有明显的异常反应，观察 7 天，动物均健存，每只体重增加者判为合格如不符合上述要求，用 4只豚鼠复试一次，判定标准同前。

2.10.2 小白鼠试验用体重 18～20g小白鼠 5 只，每只腹腔注射检品 0.5ml(每 ml 含 10PE)，半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察 7 天，动物均健存，每只体重增加者判为合格如不符合上述要求，用 10 只小白鼠复试一次，判定标准同前2.11　热原质试验按《生物制品热原质试验规程》进行，注射剂量按家兔体重注射 30PE/kg判定标准按该规程 4.2 项要求进行2.12　鉴别试验用免疫双扩散法，仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛血清不产生沉淀线2.13 根据病毒灭活方法，必要时应增加相应检定项目保存与效期应严格保存于 10℃以下避光干燥处效期自效价检定合格之日起为 2 年凝血酶活性测定法取人凝血酶原复合物溶液 0.2ml，加 0.5%（ g/ml）纤维蛋白原溶液0.2ml，在 37℃放置 24 小时，不得有任何凝块或纤维蛋白出现测定时应同时做阴性及阳性对照阴性对照：0.2ml 生理盐水加入0.5%(g/ml)纤维蛋白原溶液 0.2ml，在 37℃ 放置 4 小时，不得有任何凝块纤维蛋白出现阳性对照：取 0.2ml0.5IU/ml 凝血酶，加入0.5%(g/ml)纤维蛋白原溶液 0.2ml，在 37℃ 放置 24 小时，应有凝块或纤维蛋白出现。

注：含肝素的样品应根据肝素含量，用适量的硫酸鱼精蛋白中和样品内的肝素后再取样检查冻干人凝血酶原复合KKME---专业医学搜索引擎 1.1 标准血浆用 3.8%枸橼酸三钠作抗凝剂，按1∶10 比例采集全血（1 份抗凝剂+9 份全血） 4℃2000r/min 离心 20分钟，分离血浆取 30 份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小塑料管内（0.5ml/支） 置-30 ℃冰箱保存备用从采血到血浆冻结完毕不超过 4 小时用时在 37℃水浴中融化，然后置冰浴中备用，亦可制成冻干品1.2　基质血浆用 1.34%草酸钠人和抗凝剂，按 1∶10比例采集健康人血（1 份草酸钠+9 份全血）10℃以下 2000r/min 离心 20 分钟，分离血浆，然后按 10%（W/V）加入 BaSO4，在 37℃水浴内搅拦吸附 15 分钟，10℃以下 2000r/min 离心 30 分钟，取上清分装（3ml/支） 30℃保存备用从采血到血浆冻结不超过 6 小时使用时在 37℃水浴中融化，然后置冰浴中备用1.3　凝血活酶溶液取干兔脑粉 120mg，加 2ml 生理盐水，加 0.1ml1.34%草酸钠溶液，放入 45～50℃水浴中搅拌 15 分钟，2000r/min 离心 5 分钟，取上清液置冰浴中备用。

当日配制当日使用，或存放于-30℃1 个月内使用1.40.025mol/LCaCl2 溶液称 2.775g 无水氯化钙（分子量110.98，AR） ，加水溶解至 1000ml1.5　稀释液生理盐水调pH7.4，再加白蛋白使最终浓度为 0.2%测定 2.1 空白取 10×75mm试管 2 支，每管加 0.1ml 稀释液，0.1ml 基质血浆， 0.1ml 凝血活酶，然后置 37℃水浴中保温 1 分钟，再加 0.1ml37℃预热的 0.025mol　/LCaCl2 溶液，记录 CaCl2 加入至纤维蛋白形成的时间，应大于 3分钟2.2 标准曲线的准备用稀释液将标准血浆作 1∶2 至 1∶32 的2 倍系列稀释，然后取不同稀释度的标准血浆 0.1ml 代替空白稀释液，KKME---专业医学搜索引擎 2.3　样品测定用稀释液将样品作适当的 2 个稀释度（使凝固时间落于标准曲线内） ，然后取不同稀释度的样品 0.1ml，代替空白稀释液，其他按空白测定过程和要求进行2.4 结果计算用回归方程计算：将不同稀释度的标准血浆凝固时间（秒）和稀释度的对数值输入到科计算器，得到一条标准曲线，r 值应大于 0.97。

然后将稀释样品的凝固时间的对数分别输入到计算器内，得到相应的标准血浆的稀释倍数，用样品的稀释倍数除以相应的标准血浆的稀释倍数即为凝血酶原复合物的效价单位/ml（每一单位相当于 1ml 正常人血浆血液凝固因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的活性） 取样品两个稀释度的效价单位的均值为本样品效价单位/ml冻干人凝血酶原复合物使用说明书本系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆，经低温乙醇法或经卫生部批准的其他适宜方法提制，再经病毒灭活处理的冻干制剂，为白色或灰绿色疏松体每 200 血浆当量单位（PE）约相当于 200ml 新鲜人血浆中的Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ凝血固子含量，成品中尚含有 200 单位肝素及适量枸橼酸钠和氯化钠本品对凝血固子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ缺乏血症、抗凝剂过量、维生素 K 缺乏症、因肝病导致的凝血机制紊乱，以及凝血酶原时间延长而拟作外科手术等患者，均有显着的效果用法本品专供静脉输注，应在临床医师的严格监督下使用用前应先以 20～25℃的灭菌注射用水或 5%葡萄糖注射液按瓶签标示容量注入瓶内（制品刚从冰箱取出或在冬季温度较低时应特别注意使制品温度升高至 20～25℃，然后进行溶解，否则易析出沉淀） ，KKME---专业医学搜索引擎 ，亦可用氯化钠注射液或 5%葡萄糖注射液稀释成 50～100ml，然后用带有滤网的输血器进行静脉滴注，滴注速度开始要缓慢，15 分钟后稍加快滴注速度，一般每瓶 200 血浆当量单位在 30～60 分钟左右滴完。

滴注时，医师要随时注意使用情况，若发现 DIC 的临床症状，要立即终止使用并用肝素拮抗使用剂量随所缺乏的因子而异，一般每 kg 体重输 10～20 血浆当量单位（以后因子Ⅶ缺乏者，每隔 6～8 小时，因子Ⅸ缺乏者每隔 24 小时，因子Ⅱ和因子Ⅹ缺乏者每隔 24～48 小时，减少或酌情减少用量，一般历时 2～3 天） 在出血量较大或大手术时可根据病情适当增加剂量在凝血酶原时间延长如拟作脾切除者要先于手术前用药，术中和术后根据病情决定注意事项 1.除肝病出血患者外，一般在用药前应确认患者是缺乏Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子，方能对症下药2.本品不得用于静脉外的注射途径保存应严格保存于 10℃以下避光干燥处参考资料^."《中国生物制品规程》".大头医生 。