四种常用化学消毒剂对猪2型圆环病毒杀灭效果研究.docx

    四种常用化学消毒剂对猪2型圆环病毒杀灭效果研究    储玉双 李红英 黄小红摘要：试验应用复合碘制剂、2%戊二醛消毒液、优氯净消毒粉（二氯异氰尿酸钠）、苯扎溴铵四种常用的化学消毒剂对猪2型圆环病毒杀灭效果进行研究，采用病毒滴定、中和剂鉴定及病毒灭活试验进行检测结果表明，二氯异氰尿酸钠的杀灭效果最好，其次是戊二醛，复合碘制剂也有一定的杀毒作用，苯扎溴铵消毒液的杀灭效果最差，建议将二氯异氰尿酸钠和戊二醛作为控制猪2型圆环病毒的消毒剂，可有效防止猪2型圆环病毒的传播关键词：化学消毒剂;猪2型圆环病毒;杀灭效果：S858.28        ：A        ：1007-273X（2018）12-0005-02猪圆环病毒（PCV）按照致病性的有无分为1型和2型，PCV1被认为不具备致病性，具有致病性的PCV2被认为同猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）等疫病有关[1]猪圆环病毒是无囊膜病毒，也称裸病毒，是目前发现的动物疾病中最小的病毒，通常裸病毒很难消灭，所以一定要使用有效消毒剂才能杀灭裸病毒对该类病毒，许多消毒剂如酚制剂、阳离子表面活性剂、季铵盐类等的使用效果不理想或没有效果目前市场上真正称得上是广谱高效消毒剂的有碘制剂、甲醛、戊二醛及二氯异氰尿酸钠（DCCNa）等，能够杀灭各种细菌、芽孢、真菌、囊膜病毒和非囊膜病毒等，试验选择复合碘制剂、2%戊二醛消毒液、优氯净消毒粉（二氯异氰尿酸钠，DCCNa）、苯扎溴铵四种消毒剂来杀灭猪2型圆环病毒，比较其消毒效果，旨在为猪2型圆环病毒的预防提供参考。

1  材料与方法1.1  毒株与细胞猪圆环病毒2型（PCV2）由江西农业大学实验室分离鉴定、保存和提供不含PCV1和PCV2的猪肾细胞PK（15）由本实验室培养传代保存1.2  主要试剂复合碘制剂、戊二醛消毒液、优氯净消毒粉（5%二氯异氰尿酸钠）、苯扎溴铵四种消毒剂购买自江西汇康实业有限公司甘氨酸为河南特康生物科技有限公司，吐温80为Sigma产品，细胞培养试剂中DMEM培养基购自Sigma公司无菌胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司复合碘制剂和优氯净消毒粉（5%二氯异氰尿酸钠）的中和剂为0.1 mol/L硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲溶液（PBS）;戊二醛消毒液的中和剂为0.3%吐温80+0.1%甘氨酸的PBS;苯扎溴铵为季铵盐类消毒剂，它的中和剂为卵磷脂+吐温80+组氨酸[2]1.3  主要仪器电热恒温水浴锅，芬兰百得实验室仪器（中国）有限公司;超净工作台，苏净集团安泰公司;振荡培养箱，广东医疗器械厂;培养箱，广东医疗器械厂;电子天平，YP202N型，上海精密科学仪器有限公司;96孔培养板1.4  方法1.4.1  病毒滴定的方法  将PCV2病毒株用细胞维持液（1%血清的DMEM培养基）进行10倍系列稀释（101～106），分别接种于PK（15）细胞（96孔培养板）中，每个稀释度接种8孔，置于37 ℃、50% CO2培养箱中培养，每日观察细胞病变的结果，连续观察3 d，按Reed-Muench法计算该病毒的半数细胞感染剂量（TCID50）[3]，每次试验重复3次，计算标准差。

1.4.2  中和剂鉴定试验  试验共分为6组，第1-3组为中和剂，后3组为阴性对照，分别为细胞维持液、标准硬水、PBS，混匀接种3～4 h后观察细胞生长情况1.4.3  病毒灭活试验  用标准硬水将消毒剂按待测浓度的1.5倍稀释成试验用的消毒剂，将0.5 mL待测消毒剂置（20±1） ℃水浴30 min，再吸加0.5 mL各病毒悬液，混匀待作用至试验规定的灭活病毒时间（5、10、20 min），立即取出0.1 mL，加入含0.9 mL中和剂混匀，作用10 min，作系列稀释后，吸取样液，接种于单层细胞培养板上，每个滴度接种4孔;阳性对照组，用0.6 mL无菌去离子水代替消毒剂，将细胞培养板置37 ℃二氧化碳培养箱中，吸附1～2 h后，将细胞培养板内液体弃去，在板内加入细胞维持液，37 ℃二氧化碳孵箱培养5 d，分别测定不同浓度消毒剂、不同作用时间对PCV2的杀灭效果，试验重复3次1.4.4  猪圆环病毒耐药性试验  将400 mg/L复合碘溶液、250 mg/L戊二醛消毒液、150 mg/L有效氯的复方二氯异氰尿酸钠及 40 g/L的苯扎溴铵溶液间隔30、90、120 d使用，分组别长期作用猪圆环病毒，对兔进行静脉注射，判断各组别的猪圆环病毒耐药性产生的时间及变化情况。

2  結果与分析2.1  中和剂对PK（15）细胞生长状况的影响中和剂对PK（15）细胞生长状况的影响见图1由图1可知，各中和剂没有影响细胞的生长，与对照组相当，表明选用的中和剂及形成的中和产物对PK（15）细胞无毒害作用2.2  四种消毒剂对PCV2的杀灭效果结果表明，以含400 mg/L复合碘溶液对猪圆环病毒作用5 min，灭活率为100%;以200 mg/L复合碘溶液作用10 min，灭活率为99.99%（表1）250 mg/L戊二醛消毒液、150 mg/L DCCNa及40 g/L的苯扎溴铵溶液与猪圆环病毒作用5 min，灭活率均可达到100%（表2、表3、表4）2.3  PCV2耐药性猪圆环病毒耐药性研究结果表明，250 mg/L戊二醛和150 mg/L DCCNa抗毒性强，体温无变化，120 d未产生耐药性;400 mg/L复合碘有一定的抗毒性，120 d使用较易产生耐药性;40 g/L的苯扎溴铵抗毒差，120 d使用更易产生耐药性（表5）3  小结四种常用消毒剂在相同的浓度和试验条件下（温度、相对湿度、酸碱度等）杀灭猪圆环病毒，以DCCNa的杀灭效果最好，其次是戊二醛，复合碘制剂也有一定的杀灭作用，苯扎溴铵消毒液的杀灭效果最差。

四种消毒剂的消毒效果与文献报道相一致[4]，建议将DCCNa和戊二醛作为控制猪圆环病毒的消毒剂该方法与秦涛等[5]的研究方法近似，結果满意中和剂鉴定试验表明，四种中和剂安全可靠，无毒副作用，中和剂对PCV2在PK（15）细胞中的增殖无显著抑制作用文献研究表明决定中和剂选择结果好坏的关键不在于试验病毒 ，而在其宿主培养细胞， 即能否选出对试验细胞无毒或毒性较小的中和剂和中和产物[6]PCV2耐药性研究结果表明，戊二醛和DCCNa抗毒性强，复合碘有一定的抗毒性，苯扎溴铵抗毒性差该结果与秦秀慧等[7]的戊二醛复合消毒剂对猪病病毒杀灭效果的研究结果相一致经查询文献资料，关于消毒剂对猪圆环病毒消毒效果及耐药性的研究较少，本研究可为养猪场预防疾病及消毒剂选择提供参考参考文献：[1] 司兴奎，郭  鑫，杨汉春.猪圆环病毒2型感染后血清抗体及组织中病毒含量的动态变化[J].中国兽医杂志，2009，45（7）：24-26.[2] 韩  杰，魏秋华.化学消毒剂的中和剂的研究现状[J].中国消毒杂志，2013，30（12）：1165-1168.[3] REED L J，MUENCH H.A simple method of estimating fifty percent endpoints[J].American Journal of Hygiene，1938，27：493-497.[4] 杨满军.9种商业消毒剂对猪2型圆环病毒的杀灭效能测试[J].今日养猪业，2009（3）：13-16.[5] 秦  涛，汪川韦，石宝兰，等.四种常用消毒剂对H5N6亚型禽流感病毒灭活效果的研究[J].中国兽医科学，2018，48（9）：1139-1145.[6] 薄玉霞，SYED A S .评价化学消毒剂对病毒灭活效果的中和剂选择试验[J].中国消毒学杂志，2007，24（6）：523-524.[7] 秦秀慧，张  冰，李  军，等.戊二醛复合消毒剂对猪病病毒杀灭效果的研究[J].中国实验动物学报，2002，10（2）：117-119.湖北畜牧兽医2018年12期湖北畜牧兽医的其它文章山西加强生猪屠宰监管 高压严打私屠滥宰违法行为昆明启动生猪“点对点”调运保市场稳定非洲猪瘟研究进展河南省全面实施生猪运输车辆备案监管四川“1+N”联动促肉牛产业发展Ａ型流感病毒及其Ｍ１蛋白概述  -全文完-。