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精选文档常见血液肿瘤 FISH 检测小册1/32精选文档一 .FISH 是什么FISH 即荧光原位杂交技术（ Fluorescence in situhybridization ），是在细胞遗传学水平上检测染色体及基因数目和结构异常的一种分子病理检测技术其基本原理是利用标记了荧光素的核酸作为探针，按照碱基互补原则，与待检样本中与之互补的核酸经过变性 -退火而形成杂交双链核酸，然后通过荧光显微镜进行检测和分析FISH 技术具有直观、快速、敏感性高和方便灵活等特点，目前已经广泛应用于临床的肿瘤遗传学及各种基因相关疾病的分型与个体化治疗等多个领域2/32精选文档二 .血液肿瘤的诊断分型MICM ：血液肿瘤诊断的精确分型是临床选择正确治疗方案的前提，目前国际上通用的是结合细胞形态学（ Morphology ）、免疫学（ Immunology ）、细胞遗传学（ Cytogenetics）和分子生物学（ Molecular ）的 MICM 分型形态学诊断 (Morphology)细胞学：外周血、骨髓涂片，淋巴结穿刺组织学：骨髓、淋巴结活检3/32精选文档免疫学检查 (Immunology)免疫组化（ IHC ），流式细胞（ FCM ）细胞遗传学检查 (Cytogenetics)核型分析，荧光原位杂交（ FISH ）分子生物学检查 (Molecular)PCR，DNA 测序三 .FISH 技术的作用及优势FISH 作为一项很重要的分子遗传学检测技术， 在血液肿瘤的诊断中有很大的作用， 得到了 NCCN 等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。

目前与血液肿瘤相关的 FISH 探针有接近 100 种，常用的就有 60 种左右，包括急慢性白血病、 骨髓增生异常综合症（ MDS ）、多发性骨髓瘤（ MM ）、淋巴瘤等多种血液4/32精选文档肿瘤FISH 技术的相对优势：FISH 技术更敏感，可检测出核型分析检测不出的细微缺失或易位，如 MDS 中的 5q 缺失综合征；FISH 技术不需要中期分裂相细胞，而核型分析需要培养时间较长且需要较高的操作要求；FISH 技术是在细胞形态的基础上进行结果判读，可有效地降低假阴性或假阳性的风险，而 PCR 技术经过倍增扩增， 不能在形态的基础上判读， 对实验要求高，易产生假阴性或假阳性四 .常用的血液 FISH 检测探针1 急性粒细胞白血病（ AML）：样本建议骨髓□ AML1/ETO融合基因（ M2b 分型）□ PML/RARA融合基因（ M3 分型）□ CBFB基因断裂（ M4 分型）5/32精选文档□ KMT2A（MLL）基因断裂（预后差，治疗失败风险高）□ 其他：□ 8 号染色体、□ CBFB/MYH11基因融合、□ RARA 基因断裂、□ 5q 缺失、□ 7q 缺失、□ EVI 基因断裂2 慢性粒细胞白血病（ CML）：样本优先骨髓□ BCR/ABL（DF）融合基因检测（指导格列卫用药）□ 嗜酸性粒细胞增多症（格列卫作用靶标） ：□ PDGFRA基因断裂、□ PDGFRB基因断裂、□ FGFR1基因断裂□ 其他：□ BCR/ABL（ ES）、□BCR/ABL（SF）、□ i（ 17q）、□ ASS基因缺失3 急性淋巴细胞白血病（ ALL）：样本建议骨髓□ ETV6（ TEL） /AML1 融合基因（预后较好，但易复发）□ TCF3（ E2A）基因断裂（标准化疗后易早期复发）□ BCR/ABL融合基因（易迅速复发，对挽救性化疗反应不佳）□ 儿童急性淋巴细胞白血病染色体及基因异常（ 4、 10、 17、TEL/AML1、KMT2A 基因断裂、 BCR/ABL（DF），预后评估及治疗方案的选择）□ 其他：□ TCF3（ E2A） /PBX1、□ 4、 10、17；□ MYC 基因断裂、□ IGH 基因断裂、□ KMT2A 基因断裂、□ CDKN2A（P16）6/32精选文档基因缺失4 慢性淋巴细胞白血病（ CLL）：样本优先外周血或骨髓□ 慢性淋巴细胞白血病染色体及基因异常（ P53、RB1（13q14）、ATM（ 11q22）、D13S25（13q14）、 12，预后评估及治疗方案的选择）□ 其他：□ DLEU1（13q14）、□ P53、□ATM（11q22）、□ MYC基因扩增、□ 6q、□ TERC、□ GLI、□ 12、□ BCL2/IGH、□CCND3/IGH5 骨髓增生异常综合症（ MDS）：样本建议骨髓□ 骨髓增生异常综合症染色体及基因异常（ 5q、7q、 20q、8、X/Y，预后评估及治疗方案的选择）□ 其他： □5q、□7q、□20q、□EGR1、□ EVI1基因断裂、 □X/Y6 多发性骨髓瘤（ MM ）：样本建议骨髓□ 多发性骨髓瘤染色体及基因异常（ P53、1q21、RB1（13q14）、D13S319（13q14 ）、IGH，预后评估及治疗方案的选择）□ 其他：□ CCND1（BCL1） /IGH、□ MAF/IGH、□ FGFR3/IGH、□ MAFB/IGH、□ CCND3/IGH、□ 11q23 及 DLEU1、□ P53、□15q22 及 6q21、□ 1q21 及 1p36、□ IGH 基因断裂7/32精选文档7 淋巴瘤：样本建议骨髓或淋巴结穿刺□ MYC/IGH 融合基因（辅助诊断伯基特淋巴瘤、高分级 B 细胞淋巴瘤的治疗）□ BCL2/IGH融合基因（辅助诊断滤泡性淋巴瘤）□ ALK基因断裂（辅助诊断间变性大细胞淋巴瘤， 指导克唑替尼用药）□ CCND1（ BCL1）/IGH 融合基因（辅助诊断套细胞淋巴瘤，鉴别诊断 MCL 和 CLL）□ IGH 基因断裂（发生于多种类型的淋巴瘤中，与超过50 种基因融合）□ MALT1 基因断裂（辅助诊断粘膜相关淋巴组织淋巴瘤，指导 HP 化疗方案）□ BCL6基因断裂（ DLBCL中预后较佳，指导治疗方案）8 骨髓移植后嵌合状态监测（ X、 Y）□ X 和 Y 染色体检测8/32精选文档五.常见血液肿瘤 FISH 探针介绍血液肿瘤中常见 FISH 探针有四种类型， 应用于基因融合、断裂、扩增和缺失检测。

检测类型基因融合基因断裂基因扩增基因缺失探针举例BCR/ABL （DF ）融合基因检测探针IGH 基因断裂检测探针MYC 基因扩增检测探针P53 基因缺失检测探针所含靶标 正常信号 典型异常信号GSP BCR1GSP ABLGSP IGHGSP MYCCSP 8GSP P53CSP 17注：* 红色标记表示该基因探针标记红色荧光素（ R），荧光显9/32精选文档微镜相应滤块下观察为红色信号点（某些参数滤块下显示为橙色信号）；* 绿色标记表示该基因探针标记了绿色荧光素（ G），荧光显微镜相应滤块下观察为绿点信号点；* 黄色标记表示该基因探针包含一组分别标记了红、 绿两种荧光素的探针组合，荧光显微镜单通道滤块下可观察到相应颜色信号点 （绿色或红色信号点） ，双通道滤块下可观察到红绿相邻或重叠信号（融合， F）10/32精选文档1.急性粒细胞白血病（ AML ）常用 FISH 检测靶标： AML1/ETO 基因融合、 PML/RARA 基因融合、 CBFB 基因断裂、 MLL 基因断裂AML1 /ETO 融合基因检测 — M2b 分型的标志1）辅助诊断： AML1/ETO 融合基因在 M2 患者中的发生率20%-40% ，在 M2b 亚型中发生率高达 90%，是 M2b 分型的标志，在 M1 和 M4 中少见。

2）判断预后： AML1/ETO 融合基因阳性是预后好的标志，患者对治疗反应佳，完全缓解率可达 90%， 5 年无病生存可达 50%-70% PML /RARA 融合基因检测 —M3 分型的标志1）辅助诊断：PML/RARA 融合基因可见于 95%以上的 APL中，成为 M3 的一个特异标志，预后好，约占全部 AML11/32精选文档的 9%2）指导用药：全反式维甲酸（ ATRA ）和三氧化二砷能靶向降解 PML/RARA 融合蛋白，恢复野生型 PML 和 RARA 基因功能，解除其对基因转录的抑制，诱导细胞发生分化和凋亡，使 APL 得到有效治疗 ATRA 与化疗联合使用可使 APL 的完全缓解率达 90%-95% ，并可使 70%以上的患者得到长期生存CBFB 基因断裂 —M4E0 特征性的遗传学改变1）辅助诊断： CBFB 基因断裂重组是 AML 的特征性染色体异常，占总 AML 患者的 5%-10%和 23%的 M4 患者，通常见于 AML-M4E0 亚型，在 M2 ，M5 及 M4（无嗜酸性粒细胞增多）中较少现在认为 CBFB 基因断裂重组是 M4E0特征性的遗传学改变。

2）判断预后：大多数 CBFB 基因断裂重组的 AML 患者对化疗敏感、预后较好MLL 基因断裂1）辅助诊断：在成人急性髓细胞白血病 (AML) 中，则主要见于 M4/M5 亚型2）判断预后：除 t(9 ；11)，t(10； 11)以外，大部分 MLL12/32精选文档重排白血病缓解率低，并且第一次缓解后极易复发，生存期短，预后很差在 AML 中单纯 MLL 断裂提示预后中等2.慢性粒细胞白血病（ CM。