Waters e2695型高效液相色谱仪操作规程.doc

Waters e2695型高效液相色谱仪操作规程仪器组成及开机1．1 仪器组成 本仪器由waters2695分离单无、2489紫外可见光检测器、2424蒸发光散射检测器、Empower色谱工作站和打印机组成2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器1．2 开机 先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源（注：在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应）接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态 溶剂管理系统的准备2．1 流动相的脱气 确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status（1）”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”2．2 启动溶剂管理系统2．2．1干启动 当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status（1）”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间（一般为5分钟），按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。

2．2．2 湿启动 在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间（5ml/min和5min）按[OK]待限定时间结束后，对每种流动相重复操作3 样品管理系统的准备3．1 A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为问冲洗进样器用，所用溶剂均为甲醇：水（1：1） 将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open”屏幕，装入样品盘，按[Next]，直至所有样品盘装毕，关仓门编辑分析方法及执行样品分析表4.1 创建项目 双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定在菜单栏“管理”→创建新项目→选择父项目→下一步→输入表空间值→按“下一步”逐步设置→完成→管理→改变/项目，在该窗口切换项4.2 编辑方法组 调用方法组编辑向导→新建→设置检测器参数｛2489检测器设置波长模式、波长、灯开启、采样速率；2424检测器[通用]里设置：检测器设置增益（0～1000）、数据率、灯开启，喷雾器设置模式（加热、关、冷却），漂移管设置温度（5～100℃之间，常用50或60℃），气体压力设置好（通常设置为25psi～60psi）。

[数据通道]依据需要可勾选信号、信号-MBF、气体压力、喷雾器温度、漂移管温度）｝→2695主机参数（通用、流量、柱温、通道）→保存仪器方法→选择同使用该方法组的数据有关的仪器方法→选择处理方法、报告方法→下一步→完成4.3 监视基线和单次进样 点击 平衡系统/监视基线图标→输入仪器方法→平衡监视器，开始按设置方法平衡基线待基线平衡、压力平稳后→单次进样，当要对分析方法做修改时，通过中断运行样→方法组仪器随时改变方法→另存覆盖→平衡监视→执行新方法，可重复至最佳分析方法确定4.4 运行样品组 使用样品组向导逐步建立样品组表，可在编辑好的样品组表最后一行添加关机方法（功能为：平衡色谱柱）设置自动关机→保存样品组方法→运行当前样品组方法5 处理数据并打印报告浏览项目→通道→双击打开图谱→文件→新建处理方法→逐步点击“下一步”选中所需参数→输入方法名→完成→处理参数→适应性→选中计算适应性结果、空体积时间（分）处输入1.0、所需药典选择“全部”→保存处理方法→浏览项目→选中需处理的图谱→右击鼠标→选中使用指定的处理方法→确定→浏览项目→结果→更新选中图谱→预览→采用所需报告模板打印。

6 关机 使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路，填写使用记录附一、清洗流路系统：1、如果流动相有无机盐或缓冲液，在开机后，排空前预先设置好低流速的纯水为流动相的分析方法，待排空气完成后，即可执行冲柱20分钟后,再换上并更改为应用的流动相平衡柱2、如果使用缓冲液，先用水更换缓冲液，清洗1小时，然后更换甲醇清洗40分钟3、如果使用有机溶剂，直接更换甲醇清洗50分钟即可二、2424检测器注意事项：1、关闭2424检测器：（1） 从色谱柱和检测器中排除所有缓冲剂2） 让未经缓冲剂处理的流动相通过系统3） 关闭泵4） 让雾化气体通过检测器10分钟，以排干蒸发管和检测室5） 停止气体流动6） 关闭检测器的电源2、要执行定期维护：提示：为防止损坏色谱柱，在从液体通路中排除流动相之前，应移开色谱柱1） 将漂移管温度设置为适当的退溶温度提示：对于大多数溶剂来说，50 °C (122 °F) 就是适当的退溶温度2） 用 100% HPLC 级水替换缓冲流动相，然后以 3 mL/min 的流量将系统冲洗10分钟3、清洗漂移管开启气体供应，设置漂移管温度100°C，用100% HPLC 级水整夜冲洗。

三、根据我们工作的情况，可固定泵如下：A为甲醇、B为分析用流动相，C为乙腈、D为水、R为50%甲醇当分析样品时可把B瓶换上流动相，D换上新过滤并脱过气的水，适当的流动相比例可随时调整，当分析结束后，B瓶和D换上甲醇并排气四、二个洗柱LC时间程序供参考（1）甲醇洗机方法LC时间程序时间 流速 A B C D 1.0 100% 0 0 050分钟 0.0 100% 0 0 0(2)水-甲醇洗机LC时间程序（D管为纯水）时间 流速 A B C D 1.0 0 0 0 100%60分钟 1.0 0 0 0 100%65分钟 1.0 100% 0 0 0105分钟 0.0 100% 0 0 0 起草人： 审核人： 2011年 月 日。