实验三显微镜油镜的使用及细菌形态观察ppt课件.ppt

实验三 油镜运用和细菌形状察看1、显微镜油镜的运用2、细菌形状的察看〔示教〕3、革兰氏染色4、芽胞染色Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.一、实验目的一、实验目的n学学习并掌握普通光学并掌握普通光学显微微镜的构造和油的构造和油镜的运用技的运用技术及及维护的根本知的根本知识〔一〕显微镜油镜的运用〔一〕显微镜油镜的运用Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.二、显微镜及油镜运用原理二、显微镜及油镜运用原理n显微微镜的构造的构造 1.光学部分目光学部分目镜 、、 物物镜 、、 照明安装照明安装(聚光聚光镜、、 虹彩光虹彩光圈、圈、 反光反光镜等等)它使检视物放大物放大,生成物象。

生成物象Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.2.2.机械部分机械部分: :镜座、座、镜臂、臂、镜筒、物筒、物镜转换器、器、载物台、物台、载物台物台转移器、粗移器、粗调理器、理器、细调理器等部件理器等部件. .它它起着支持、起着支持、调理、理、 固定等作用固定等作用. .Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.图图1-1-2 光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理倒立的虚像倒立的虚像Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n显微微镜的放大倍数和分辨率的放大倍数和分辨率 1.1.放大倍数：物放大倍数：物镜放大倍数放大倍数××目目镜放大倍数放大倍数 2. 2. 显微微镜的分辨率的分辨率: :是表示是表示显微微镜辨析两点之辨析两点之间间隔的才干。

可用公隔的才干可用公式表示式表示为：：n D=λ/2n·sin(α/2 ) D=λ/2n·sin(α/2 ) n 式中式中D D：物：物镜分辨出物体两点分辨出物体两点间的的最短最短间隔  ：可：可见光的波光的波长〔平均〔平均0.550.55m) m) n: n: 物物镜和被和被检标本本间介介质的折射的折射率。

率 ：：镜口角〔即入射角〕口角〔即入射角〕D值越小，分辨率越高，看到的物象越明晰越小，分辨率越高，看到的物象越明晰Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n油油镜运用的原理运用的原理 油油镜，即油浸接物，即油浸接物镜当光线由反光由反光镜经过玻片与玻片与镜头之之间的空气的空气时，由于空气与，由于空气与玻片的密度不同，使光玻片的密度不同，使光线遭遭到曲折，到曲折，发生散射，降低了生散射，降低了视野的照明度假野的照明度假设中中间的的介介质是一是一层油〔其折射率与油〔其折射率与玻片的相近〕，那么几乎不玻片的相近〕，那么几乎不发生折射，添加了生折射，添加了视野的野的进光量，从而使物象更加明晰光量，从而使物象更加明晰u根据公式根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得，增大分母，使得D D值减小，分辨率增大。

减小，分辨率增大Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.1.1.不准擅自装配不准擅自装配显微微镜的任何部件的任何部件, ,以免以免损坏2.2.镜面只能用擦面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保擦，不能用手指或粗布，以保证光光洁度度3.3.察看察看标本本时，必需依次用低、中、高倍，必需依次用低、中、高倍镜，最后用油，最后用油镜当目视接目接目镜时，特，特别在运用油在运用油镜时，切不可运用粗，切不可运用粗调理器，以免理器，以免压碎玻片或碎玻片或损伤镜面4.4.拿拿显微微镜时，一定要右手拿，一定要右手拿镜臂，左手托臂，左手托镜座，不可座，不可单手拿，更手拿，更不可不可倾斜拿5.5.油油镜运用运用终了后，物了后，物镜用擦用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的香柏擦三遍：第一遍擦去多余的香柏油；第二遍擦油；第二遍擦镜纸蘸上二甲苯再擦蘸上二甲苯再擦镜头；第三遍再用干；第三遍再用干净的擦的擦镜纸擦去多余的二甲苯擦去多余的二甲苯。

6.6.显微微镜应存放在阴凉用擦存放在阴凉用擦镜纸擦枯燥擦枯燥处，以免，以免镜片繁殖霉菌而腐片繁殖霉菌而腐蚀镜片显微镜保养和运用中的本卷须知显微镜保养和运用中的本卷须知Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.三三. .显微镜油镜察看操作方法显微镜油镜察看操作方法 在高倍镜或低倍镜下找到要察看的样在高倍镜或低倍镜下找到要察看的样品区域后，然后将油镜转到任务位置品区域后，然后将油镜转到任务位置在待察看的样品区域滴加香柏油，从侧在待察看的样品区域滴加香柏油，从侧面凝视，用粗调理器使油镜浸在镜油中面凝视，用粗调理器使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接然后用细调理器调并几乎与标本相接然后用细调理器调理，在目镜下找到最适宜的察看点理，在目镜下找到最适宜的察看点 Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.p油镜运用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭油镜运用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯〔香柏去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯〔香柏油溶于二甲苯〕擦去镜头上残留的油迹，最后用干净油溶于二甲苯〕擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。

的擦镜纸擦去残留的二甲苯Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n本实验室按学号运用固定编号的显微镜，显微镜的保本实验室按学号运用固定编号的显微镜，显微镜的保养由对应学号的同窗担任实验过程中假设所用显微养由对应学号的同窗担任实验过程中假设所用显微镜不能运用，自行与其他同窗调理但显微镜假设出镜不能运用，自行与其他同窗调理但显微镜假设出现问题，由对应学号的同窗承当责任现问题，由对应学号的同窗承当责任Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.一、实验目的一、实验目的 进一步熟习运用油镜察看微生物的方法，初进一步熟习运用油镜察看微生物的方法，初步认识细菌的根本形状和特殊构造特征步认识细菌的根本形状和特殊构造特征〔二〕细菌形状的察看〔二〕细菌形状的察看Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.二、察看内容二、察看内容根本形状：杆菌，球菌〔留意大小、染色性、根本形状：杆菌，球菌〔留意大小、染色性、陈列〕陈列〕特殊构造：鞭毛，芽胞，荚膜〔先找到菌体，特殊构造：鞭毛，芽胞，荚膜〔先找到菌体，再仔细察看特殊构造〕再仔细察看特殊构造〕以画图的方式完成该实验的报告以画图的方式完成该实验的报告Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.杆菌〔大肠杆菌，杆菌〔大肠杆菌，G-G-〕〕画图本卷须知：画图本卷须知：1 1、以圆圈表示视野、以圆圈表示视野 2 2、留意菌体大小比例适宜、留意菌体大小比例适宜 3 3、标出菌体颜色，显示典型陈列方式、标出菌体颜色，显示典型陈列方式 4 4、特殊构造标出菌体和特殊构造所在位置、特殊构造标出菌体和特殊构造所在位置Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.〔三〕革兰氏染色〔三〕革兰氏染色一、实验目的一、实验目的学习微生物涂片、革兰氏染色的根本技术学习微生物涂片、革兰氏染色的根本技术Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.二、二、 革兰氏染色的任务原理革兰氏染色的任务原理革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法。

有芽孢革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法有芽孢的杆菌和绝大多数球菌以及一切的放线菌和真菌都的杆菌和绝大多数球菌以及一切的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反响；弧菌，螺旋体和大多数致病性呈革兰氏阳性反响；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈现阴性反响的无芽孢杆菌都呈现阴性反响Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n根据革根据革兰氏阴性菌和革氏阴性菌和革兰氏阳性菌之氏阳性菌之间细胞壁的构胞壁的构造差造差别来到达染色的目的的来到达染色的目的的n先用先用结晶紫初染，一切的晶紫初染，一切的细菌都被染成初染料的菌都被染成初染料的蓝紫色；紫色；n然后用碘媒染，它与然后用碘媒染，它与结晶紫晶紫结合成合成结晶紫晶紫—碘复合碘复合物，从而加物，从而加强了染料与了染料与细菌的菌的结合力n然后再用乙醇脱色然后再用乙醇脱色处置置Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖构成网状构造、壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘不易被洗脱而保管在细胞内，复染时仍坚持蓝紫色。

n而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处置时类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫—碘复合物被洗脱，复染时细胞被染上复染剂的颜色〔红色〕Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.大肠杆菌大肠杆菌葡萄球菌葡萄球菌Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.三、革兰氏染色的操作方法三、革兰氏染色的操作方法无菌操作无菌操作涂片涂片 枯燥枯燥 固定固定 染色染色 水洗水洗 枯燥枯燥 镜检镜检Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n〔1〕涂片：先在载玻片上滴一滴生理盐水，再在菌平板上取一小环培育24小时的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体于生理盐水中涂片〔，分别于斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜〕，把菌液充分涂开，使其分布均匀。

n留意：载玻片要干净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可过于浓重Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.载玻片水滴菌体涂片Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.染色前必需固定细菌，其目的是：染色前必需固定细菌，其目的是：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上二是添加其对染料的亲和力常用的有加热和二是添加其对染料的亲和力常用的有加热和化学固定两种方法固定时尽量维持细胞原化学固定两种方法固定时尽量维持细胞原有的形状有的形状 Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.⑵ ⑵ 枯燥：把上面涂好的片于室温下自然枯燥。

枯燥：把上面涂好的片于室温下自然枯燥⑶ ⑶ 涂面朝上，在火焰上方涂面朝上，在火焰上方过几次以几次以热固定菌体〔此操固定菌体〔此操作的目的是使得作的目的是使得细胞胞质凝固，以固定凝固，以固定细胞形状，并使胞形状，并使之之结实附着在附着在载玻片上〕固定玻片上〕固定时经过火焰火焰1—21—2次即次即可留意：不可留意：不可过热，以，以载玻片不玻片不烫手手为宜，温度宜，温度过高会改高会改动甚至破坏甚至破坏细胞形状⑷ ⑷ 初染：滴数滴初染：滴数滴结晶紫于菌膜上〔以晶紫于菌膜上〔以刚好完全覆盖菌好完全覆盖菌膜膜为宜〕初染宜〕初染1--21--2分分钟minmin，水洗⑸ ⑸ 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min1min，水洗Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.⑹ ⑹ 脱色：用脱色：用滤纸吸去吸去载玻片上面的残水，将玻片玻片上面的残水，将玻片倾斜，斜，用用9595％酒精滴洗至流出酒精％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出不出现紫色紫色时为止，止，约20—30s20—30s，立刻用水冲，立刻用水冲净酒精。

酒精 留意：革留意：革兰氏染色氏染色结果能否正确，乙醇脱色是整个操果能否正确，乙醇脱色是整个操作的关作的关键环节，脱色缺乏，阴性菌被，脱色缺乏，阴性菌被误染成阳性菌，染成阳性菌，脱色脱色过度，阳性菌被度，阳性菌被误染成阴性菌染成阴性菌Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.⑺⑺复染：用番复染：用番红液染液染1—2min,1—2min,水洗⑻⑻镜检：枯燥后〔室温下晾干〕，置油：枯燥后〔室温下晾干〕，置油镜察看〔先在察看〔先在低倍低倍镜，然后在油，然后在油镜下察看菌体下察看菌体细胞的形状〕革胞的形状〕革兰氏阴性菌呈氏阴性菌呈红色，革色，革兰氏阳性菌呈紫色氏阳性菌呈紫色留意：以分散开的留意：以分散开的细菌的革菌的革兰氏染色反响氏染色反响为准，准，过于于密集的密集的细菌，菌，经常呈假阳性常呈假阳性〔〔9 9〕同法在一〕同法在一载玻片上以大玻片上以大肠杆菌与金黄色葡萄球菌杆菌与金黄色葡萄球菌混合制片，作革混合制片，作革兰氏染色氏染色对比。

比 Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.(10). (10). 实验结果的记录：实验结果的记录： 要求在用显微镜察看〔要求在用显微镜察看〔左眼察看〕的同时在实验记录本上画下他所察看左眼察看〕的同时在实验记录本上画下他所察看到的细菌的形状到的细菌的形状Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n本实验每人做一张本实验每人做一张n实验报告中要画图表示结果实验报告中要画图表示结果Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.思索题思索题1.1.涂片涂片为何要固定？固定加何要固定？固定加热时间过长会怎会怎样2.2.分析影响革分析影响革兰氏染色氏染色结果的要素。

果的要素Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.一、实验目的一、实验目的熟习芽胞染色的方法熟习芽胞染色的方法〔四〕芽胞染色〔四〕芽胞染色Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.二、芽胞染色的原理二、芽胞染色的原理 细细菌菌的的芽芽胞胞具具有有厚厚而而致致密密的的壁壁，，透透性性低低，，不不易易着着色色，，假假设设用用普普通通染染色色法法只只能能使使菌菌体体着着色色而而芽芽胞胞不不着着色色( (芽芽胞胞呈呈无无色色透透明明状状) )芽芽胞胞染染色色法法就就是是根根据据芽芽胞胞既既难难以以染染色色而而一一旦旦染染上上色色后后又又难难以以脱脱色色这这一一特特点点而而设设计计的的一一切切的的芽芽胞胞染染色色法法都都基基于于同同一一个个原原那那么么：：除除了了用用着着色色力力强强的的染染料料外外，，还还需需求求加加热热，，以以促促进进芽芽胞胞着着色色。

当当染染芽芽胞胞时时，，菌菌体体也也会会着着色色，，然然后后水水洗洗，，芽芽胞胞染染上上的的颜颜色色难难以以渗渗出出，，而而菌菌领领会会脱脱色色然然后后用用对对比比度度强强的的染染料料对对菌菌体体复复染染，，使使菌菌体体和和芽芽胞胞呈呈现现出出不不同同的的颜颜色色，，因因此此能能更更明明显显地地烘烘托托出出芽芽胞胞，，便便于察看Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.三、芽三、芽孢染色法步染色法步骤(1)(1)取取37℃37℃培培育育24h 24h ～～36h36h的的枯枯草草芽芽孢杆杆菌菌作作涂涂片片，，并并枯枯燥，固定燥，固定2)(2)于于载片上滴入片上滴入3 3～～5 5滴滴5 5％孔雀％孔雀绿水溶液3)(3)用用试管管夹夹住住载玻玻片片在在火火焰焰上上用用微微火火加加热，，自自载玻玻片片上上出出现蒸蒸汽汽时，，开开场计算算时间约4 4～～5min5min加加热过程程中中切勿使染料蒸干，必要切勿使染料蒸干，必要时可添加少可添加少许染料。

染料4)(4)倾去去染染液液，，待待玻玻片片冷冷却却后后，，用用自自来来水水冲冲洗洗至至孔孔雀雀绿不不再褪色再褪色为止5)(5)用用0.50.5％％沙沙黄黄水水溶溶液液( (或或0.050.05％％碱碱性性复复红) )复复染染1min1min，，水水洗6)(6)制片枯燥后用油制片枯燥后用油镜察看芽孢呈呈绿色，菌体色，菌体红色Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保管在菌体上为宜分芽孢仍保管在菌体上为宜Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.n本实验每人做一张本实验每人做一张n实验报告中画图表示结果实验报告中画图表示结果Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.。