维生素B12的定性定量检测.docx

实验七维生素B12的定性定量检测实验目的和要求1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2. 掌握吸收曲线的绘制；3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法 实验原理维生素 B12 的水溶液在 278 土 1nm、3611 土 1nm、550 土 1nm 三个波长处 有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素 B12 进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计 算样品中维生素B12的含量实验仪器与试剂1.V-1100D 型分光光度计2.维生素B12注射液3.10ml 容量瓶 1 个4.500ul 加样器5.1cm玻璃比色皿2个6.500ul 加样器吸头实验步骤1、 溶液配制用加样器移取维生素B12注射液500ul,转移至10ml容量瓶中，用蒸馏水稀 释至刻度，摇匀2、 吸光度、透射比及吸收曲线的绘制用1cm比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B12溶液在下 列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为 横坐标制图，绘制吸收曲线，并根据吸收曲线确定定性、定量分析波长355nm356nm357nm358nm359nm360nm361nm362nm363nm吸光度0.5130.5160.5180.5140.4980.4770.4490.4390.413波长542nm544nm546nm547nm548nm549nm550nm551nm552nm吸光度0.1610.1620.1600.1580.1590.1570.1550.1520.148四、实验数据处理1、定性鉴别根据中国药典规定，维生素B12的水溶液在3611 土 1nm、550 土 1nm波长 的吸光的比值在3.15〜3.45之间，表明样品为维生素B12，即为合格药品。

E1% A 0.518J cm(357nm) = _人(357 nm) = =3 20Ei% A 0.162 •1cm(544nm) (544nm)因此该药为合格药品2、定量检测根据浓度25ug/ml维生素B12的注射液在3611 土 1nm、550 土 1nm波长的吸 光的比值，按照下列计算的维生素B12注射液含量，结果在90.0%〜110.0%之间， 表明维生素B12注射液含量合格；其中207维生素B12为在波长的吸收系数， 20 为稀释因子(稀释倍数)A357 nm X 20207也x 20207维生素 B12 含量= 207 x100% = 207 x100%标示量（g/ml）xl00 0.5xl0 -3（g/ml）x 100=100.1%因此，该瓶维生素B12注射液含量合格3. 吸收曲线的绘制：（1） 360nm附近的吸收曲线：吸收曲线波札＜nm）实验讨论1.实验得到的吸收峰值的波长均比理论数据偏小，可能是的原因是：（1）实 验过程中存在着误差误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色 皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中2）分光光度计调节的波长可 能不够准确。

2•使用分光光度计之前，需要预热30分钟左右，而未放入比色皿时，必须将样 品室仓盖打开，以免影响分光光度计的使用期限和灵敏度3•稀释因子是怎样得到的：稀释因子就是稀释倍数，0.5mg/ml =20得到的 25ug/ml。