成品检验操作规程：万氏牛黄清心丸.doc

1. 目的 建立万氏牛黄清心丸检验操作规程2．范围 本规程适用于万氏牛黄清心丸的全项检验3．责任 QC检验员、QC主管、QA主管4．标准 《万氏牛黄清心丸质量标准》5．内容5.1 性状 本品为红棕色至棕褐色的大蜜丸；气特异，味甜，微涩、苦5.2 鉴别5.2.1 取本品，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块几乎无色（郁金）种皮石细胞黄色或淡棕色，多破碎，完整者长多角形、长方形或形状不规则，壁厚有大的圆孔纹孔，胞腔棕红色（栀子）韧皮纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细（黄连）纤维束鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显（黄连）不规则细小颗粒状物暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色（朱砂） 5.2.2 取本品3g，加水适量，研匀，反复洗去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取沉淀，加入盐酸1ml 及少量铜片，加热煮沸，铜片由黄色变为银白色 5.2.3 取本品3g，剪碎，加硅藻土0.6g，研匀，加三氯甲烷10ml、冰醋酸0.5ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇 2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲醇－醋酸（6: 32:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在110℃ 加热约10分钟。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点5.2.4 取该品3g，剪碎，加硅藻土0.5g，混匀，加甲醇 20ml ，加热回流 1小时，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以含4% 醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水（5:3:1:1） 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2% 三氯化铁乙醇溶液供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点 5.2.5 取该品3g，加乙醚15ml，研磨，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加乙酸乙酯30ml，加热回流1 小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml 使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液另取栀子苷对照品，加甲醇制成每 1ml含 1mg的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－丙酮－甲酸－（10:7:2:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热约10分钟。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点　　（5） 取该品3g，加乙醚15ml，研磨，弃去乙醚残渣挥干乙醚，加醋酸乙酯30ml，加热回流提取1 小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml 使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液另取栀子苷对照品，加甲醇制成每 1ml含 1mg的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－丙酮－甲酸－水（10:7:2:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热约10分钟供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点 5.2.6 取黄连对照药材50mg，加甲醇10ml，加热回流15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1ml使溶解，作为对照药材溶液另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每 1ml含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取黄连含量测定项下的备用溶液及上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯－乙酸乙酯－异丙醇－甲醇－浓氨试液（12:6:3:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm) 下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点 5.3 含量测定5.3.1 朱砂 取重量差异项下的该品，剪碎，混匀，取约5g，精密称定，置 250ml凯氏烧瓶中，加硫酸30ml与硝酸钾8g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml 锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加 1%高锰酸钾溶液至显粉红色且两分钟内不消失，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定每1ml 的硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）相当于11.63mg的硫化汞（Hgs） 本品每丸含朱砂以硫化汞（HgS）计，（1）应为69～ 90mg；（2）应为138～ 180mg5.3.2 黄连 取重量差异项下的该品，剪碎，混匀，取约0.8g，精密称定，加入等量硅藻土，研匀，置索氏提取器中，加盐酸－甲醇（1:100）混合溶液 适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至100ml量瓶中，加少量盐酸－甲醇（1:100）混合溶液洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加混合溶液至刻度，摇匀，精密量取10ml（剩余溶液备用）置50ml量瓶 中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

另精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，精密吸取供试品溶液4μl对照品溶液2μl与6μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯－乙酸乙酯－异丙醇－甲醇－水（4：2：1：1：0.2）为展开剂，在另槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15分钟后展开，取出，晾干，照薄层色谱法（附录Ⅵ B薄层色谱扫描法）进行荧光扫描，激发波长：λ＝365nm，测量供试品荧光强度的积分值与对照品荧光强度的积分值，计算，即得 本品每丸含黄连以盐酸小檗碱（C20H17NO4HCl）计，小丸不得少于7.5mg；大丸不得少于15mg5.4 检查 应符合丸剂项下有关的各项规定（附录Ⅰ A ）5.4.1重量差异：操作方法见重量差异检查法5.4.2水分：操作方法见水分测定法5.4.3微生物限度：操作方法见微生物限度检查法5.5 检验依据：中国药典2010年版462页。