灭菌制剂与无菌制剂.ppt

第四章第四章 灭菌制剂和无菌制剂灭菌制剂和无菌制剂  第一节 概述一、基本概念 灭菌制剂（Sterilized Preparation ） ：采用某一物理或化学方法杀灭或除去所有活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂 无菌制剂（Sterile Preparation ） ：在无菌环境中采用无菌操作方法或技术制备的不含任何活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂灭菌和无灭菌和无菌制剂菌制剂注射用制剂注射用制剂眼用制剂眼用制剂植入型制剂植入型制剂创伤用制剂创伤用制剂手术用制剂手术用制剂注射剂、输液、注射粉针注射剂、输液、注射粉针滴眼剂、眼用膜剂、软膏滴眼剂、眼用膜剂、软膏剂、凝胶剂剂、凝胶剂植入片植入片溃疡、烧伤及外伤用溶溃疡、烧伤及外伤用溶剂、软膏、气雾剂等剂、软膏、气雾剂等止血海棉、骨蜡止血海棉、骨蜡二、灭菌和无菌制剂的类型v直接注入体内或直接接触创伤面、粘膜直接注入体内或直接接触创伤面、粘膜等的一类制剂等的一类制剂三、灭菌和无菌制剂的质量要求除应符合制剂的一般要求外，还必须符合：无菌 成品中不应含有任何活的微生物；无热原 制剂内不应含热原，特别是用大体积的，供静脉或脊椎腔注射以及一次用量超过5ml的注射剂；可见异物及不溶性微粒 应符合药典的要求；安全性 应具良好生物相容性，对组织基本无刺激性，一些非水溶剂和附加剂必须经动物实验证实无刺激性和毒性，以确保安全；渗透压 注射剂渗透压要求与血浆的渗透压相等或接近；大容量还有等张要求。

pH 一般控制在pH 4-9稳定性 物理稳定性和化学稳定性，确保产品在贮存期间安全有效；其他 降压物质,蛋白质,鞣质1.制药用水的制备2.热原的去除3.液体过滤4.空气净化5.灭菌与无菌操作第二节、灭菌制剂和无菌制剂的相关技术饮用水饮用水饮用水饮用水1纯化水纯化水纯化水纯化水2灭菌注射用水灭菌注射用水灭菌注射用水灭菌注射用水4注射用水注射用水注射用水注射用水3 一般应根据各生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水一般应根据各生产工序或使用目的与要求选用适宜的制药用水药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求药品生产企业应确保制药用水的质量符合预期用途的要求一、一、制药用水的制备制药用水的制备（一）概述（一）概述制药用水的种类饮用水（tap water)-- 为天然水经净化处理所得的水，其质量必须符合现行中华人民共和国国家标准《生活饮用水卫生标准》（用于药材的漂洗、制药用具粗洗及药材的提取溶剂） 纯化水（purified water)--为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法等制得的供药用的水，不含任何附加剂(配制普通药剂的溶剂或试验用) 注射用水(water for injection)--为纯化水经蒸馏所得的蒸馏水(无热原水；配制注射剂、滴眼剂等)； 灭菌注射用水(sterile water for injection)—注射用水按注射剂生产工艺制备，不含任何添加剂(注射用无菌粉末的溶剂或注射剂的稀释剂)； ( (二二) )各种水的来源及质量要求各种水的来源及质量要求制药用水质量要求（符合Ch.P2010二部各自项下的规定)纯化水：检查项目包括酸碱度，硝酸盐与亚硝酸盐，氨，电导率、总有机碳或易氧化物、不挥发物及重金属。

注射用水：规定pH为5.0~7.0，氨浓度不大于0.00002%，内毒素小于0.25EU/ml，其他检查项目与纯化水相同灭菌注射用水：应符合注射用水项下各项检查的规定，并应符合注射剂项下有关规定 渗透现象渗透现象反渗透现象反渗透现象盐水盐水半渗透膜半渗透膜纯纯水水反渗透法：20世纪60年代发展起来的，国内目前主要用于原水 的 处 理 ， 美 国 药 典 将 其 用 于 制 备 注 射 用 水  反渗透法（图示） 半透膜：膜材为醋酸纤维素膜和聚酰胺膜半透膜：膜材为醋酸纤维素膜和聚酰胺膜 浓度差：两侧分别为盐溶液和纯水浓度差：两侧分别为盐溶液和纯水 外压力：大于渗透压，达到盐、水分离外压力：大于渗透压，达到盐、水分离1.醋酸纤维素膜2.聚酰胺膜纯水盐溶液施加的外压力  反渗透法制备高纯水的工艺流程反渗透法制备高纯水的工艺流程原水原水 多介质过滤活性碳吸附 精滤 高压泵一级反渗透二级反渗透 高纯水 高压泵v反渗透法优点：耗能低、水质好、设备使用与保养方便等；离子交换法:采用离子交换树脂,除去水中存在的阴阳离子的方法（比电阻大于100万Ωcm，对细菌和热源也有一定的去除作用特点：化学纯度高、设备简单、耗能小，成本低常用交换树脂 阳离子树脂床、阴离子树脂床、 混合树脂床串联阳离子交换树脂：阳离子交换树脂：氢型：氢型：RSO3- H+钠型（稳定）钠型（稳定）Na+ 阴离子交换树脂：阴离子交换树脂：氢氧型：氢氧型：RN +(CH3)3OH-氯型（稳定）：氯型（稳定）： Cl-处理原水的流程：处理原水的流程：阳阳床床 脱气塔（脱气塔（CO2））阴床阴床混合床混合床新树脂：处理、转型新树脂：处理、转型旧树脂（老化）：再生旧树脂（老化）：再生---强酸、碱强酸、碱　　用途：用途：可作普通制剂的溶剂，还可作蒸馏法制备注射用水　　可作普通制剂的溶剂，还可作蒸馏法制备注射用水　　的水源。

的水源当原水含盐高达当原水含盐高达3000mg/L时时,不宜采用离子交换法制备纯化水不宜采用离子交换法制备纯化水.（（1 1））蒸馏法蒸馏法制备注射用水制备注射用水　　制备注射有水最经典的方法种类：塔式和亭式蒸馏水器、多效蒸馏水器和气压式蒸馏水器构成：蒸发锅（塔）、隔沫装置和冷凝器 　②②多效蒸馏水机多效蒸馏水机　特点：　特点：热效率高、耗能低、热效率高、耗能低、出水快出水快、、纯度高、水质稳定纯度高、水质稳定、、并有自动控制系统并有自动控制系统　　③③汽压式蒸馏水器汽压式蒸馏水器利用离心泵将蒸汽加压利用离心泵将蒸汽加压,以提以提高蒸汽利用高蒸汽利用.特点：特点：无需冷却水无需冷却水、、耗能大耗能大.用于蒸汽压力较低用于蒸汽压力较低,工业用水工业用水比较短缺的厂家用比较短缺的厂家用.多效蒸馏水机多效蒸馏水机蒸馏塔蒸馏塔设备固定架设备固定架控制面板控制面板 冷凝器冷凝器 附录ⅩⅥ 制药用水规定1.制药用水的制备从系统设计、材质选择、制备过程、贮存、分配和使用均应符合药品生产质量管理规范的要求2.制药用水系统应定期进行清洗与消毒，消毒可以采用热处理或化学处理等方法采用的消毒方法以及化学处理后消毒剂的去除应经过验证。

为保证注射用水的质量，应减少原水中的细菌内毒素，监控蒸馏法制备注射用水的各生产环节，并防止微生物的污染应定期清洗与消毒注射用水系统注射用水的储存方式和静态储存期限应经过验证确保水质符合质量要求，例如可以在80℃以上保温或70℃以上保温循环或4℃以下的状态下存放 （一）概述过过滤滤的的概概念念: :利利用用过过滤滤介介质质载载留留液液体体中中混混悬悬的的固固体体颗颗粒粒的的分离的作用分离的作用滤材、滤浆、滤饼或滤渣、滤液滤材、滤浆、滤饼或滤渣、滤液滤器滤器: a.: a.垂熔玻璃器垂熔玻璃器 b. b.砂滤棒砂滤棒 c. c.微孔滤膜滤器微孔滤膜滤器 d. d.板框压滤机板框压滤机 e. e.钛滤器钛滤器二、液体的过滤1 1、过滤机制：、过滤机制：（（1 1）介质过滤：）介质过滤：介质的拦截作用进行固－液分离介质的拦截作用进行固－液分离 表面滤过：表面滤过：颗粒颗粒> >孔径孔径 如微孔滤膜、超滤膜和反渗透膜等如微孔滤膜、超滤膜和反渗透膜等 深层截流：深层截流：颗粒颗粒< <孔径孔径 如砂滤棒、垂熔玻璃漏斗、多孔陶瓷、如砂滤棒、垂熔玻璃漏斗、多孔陶瓷、 石棉滤过板等石棉滤过板等 （（2 2）滤饼过滤：）滤饼过滤： 固体粒子聚集在滤过介质表面逐渐增厚形成滤饼层固体粒子聚集在滤过介质表面逐渐增厚形成滤饼层起拦截颗粒的作用。

起拦截颗粒的作用二）过滤机制与影响因素（二）过滤机制与影响因素 液体的流动遵循液体的流动遵循PoiseuilePoiseuile公式：公式：V V－－过过滤滤容容量量；；P P－－操操作作压压力力；；r r－－流流过过层层中中毛毛细细管管半半径径；；t t－－过过滤滤时间；时间； －液体粘度；－液体粘度；L L－毛细管长度；－毛细管长度；V/tV/t－过滤速度－过滤速度   P P加压或减压滤过法加压或减压滤过法    趁热滤过趁热滤过  r r助滤剂  l l预滤预滤2、影响滤过的因素、影响滤过的因素 ltrPVhp84=常用的助滤剂：常用的助滤剂： ①①硅藻土硅藻土( (主要成分二氧化硅主要成分二氧化硅) )；； ②②活活性性碳碳( (有有较较强强的的吸吸附附热热原原和和微微生生物物的的能能力力，，能能吸吸附附生生物物碱碱类类药物药物) )；； ③③滑滑石石粉粉( (吸吸附附性性小小，，能能吸吸附附溶溶液液中中过过量量不不溶溶性性的的挥挥发发油油和和色色素素，，适用于含粘液、树胶较多的液体适用于含粘液、树胶较多的液体) )；； ④④纸浆纸浆( (有助滤和脱色作用，中药注射剂中应用较多有助滤和脱色作用，中药注射剂中应用较多) )。

1.常用滤器(1)砂滤棒 硅藻土滤棒, 多孔素瓷滤棒特点：砂滤棒价廉，滤速快，易于脱砂，对药液吸附性强，吸留药液多，难于清洗，可能改变药液pH值,注射剂生产中一般作粗滤之用三）过滤器与过滤装置（三）过滤器与过滤装置(2)钛滤器 粉末冶金加工制成，钛滤棒与钛滤片特点：抗热震性能好、强度大、重量轻不易破碎，过滤阻力小，滤速快注射剂生产中一般作粗滤之用(3)垂熔玻璃滤器1～6号特点：化学稳定性强，对药液的pH值无影响;滤过无渣脱落，对药物无吸附作用；易于清洗，可以热压灭菌等;价格较贵，脆而易破常作精滤或膜滤前预滤. 3号多用于常压过滤， 4号多用于减压或加压过滤， 6号用于除菌过滤(4)(4)微孔滤膜滤器：微孔滤膜滤器：高分子孔径0.25～14 m特点：孔径小、均匀、截留能力强；孔隙率高，滤速快；无介质脱落也不影响药液的pH值；滤膜吸附性少，不滞留药液；药液之间无产生交叉污染测定孔径大小:泡点法膜：醋酸纤维膜、硝酸纤维膜、醋酸纤维与硝酸纤维混合酯膜、聚酰胺膜、聚偏氟乙烯膜等(4)(4)微孔滤膜滤器微孔滤膜滤器 理化性质：热稳定性；化学性能稳定。

尼龙膜或聚四氟乙烯膜化学稳定性好 主要用于注射剂精滤和除菌过滤 缺点：缺点： 易堵塞； 有些滤膜化学性质不理想如纤维酯膜不适于酮类、酯类、乙醚-乙醇混合溶液以及强酸强碱；(5)(5)超滤膜滤器：超滤膜滤器：有机高分子聚合物制成有机高分子聚合物制成 能能截截流流溶溶液液中中的的高高分分子子及及胶胶体体微微粒粒，，截截留留的的粒粒径径范范围围为为1 1～～10 10 nmnm，，超滤膜可除热原超滤膜可除热原 超滤膜的孔径以截留的分子量表示超滤膜的孔径以截留的分子量表示(6)(6)(6)(6)其它其它其它其它: : : :如普通漏斗如普通漏斗如普通漏斗如普通漏斗( ( ( (玻璃和布玻璃和布玻璃和布玻璃和布氏氏氏氏) ) ) )、板框式压滤机等、板框式压滤机等、板框式压滤机等、板框式压滤机等粗滤滤器：砂滤棒 板框式压滤器 钛滤器精滤滤器：垂熔玻璃滤器 微孔膜滤器 超滤膜滤器4滤器选择在注射液生产中，一般采用二级过滤：在注射液生产中，一般采用二级过滤：在注射液生产中，一般采用二级过滤：在注射液生产中，一般采用二级过滤： 高位静压过滤减压过滤加压过滤5常见过滤方式加压滤过装置减压滤过装置1 1定义及组成定义及组成定义：热原（pyrogen）是注射后能引起人体特殊致热反应的物质总称。

是微生物的代谢产物大多数细菌都能产生热原，但革兰氏阴性杆菌产生的热原致热能力最强组成：热原是由磷脂、脂多糖及蛋白质组成的有机高分子复合物 ， 也 称 内 毒 素 (endotoxin),其 中 脂 多 糖(lipolysaccharide, LPS)是内毒素的主要成分，具有极强的热原活性 热原=内毒素=脂多糖三、 热原的去除2.热原的性质 ①耐热性：180 ~200 C 2 h、250C 45 min、650C 1 min可彻底破坏 ②水溶性： ③不挥发性： ④过滤性：分子量约10106，大小约1~5 nm ⑤吸附性：可被多孔性活性碳吸附 ⑥被化学试剂破坏：浓硫酸-重铬酸钾溶液、氢氧化钠、高锰酸钾及过氧化氢均能破坏热原 3.热原污染途径① 经溶剂（注射用水）带入：②经原料带入： ③经使用的容器、用具、管道及装置等带入：④经制备过程与生产环境带入：⑤ 经灭菌后带入：⑥ 经输液器带入：4 4、热原的去除方法、热原的去除方法(1)(1)高温法；高温法；250℃250℃，，30min30min以上 (2)(2)酸碱法；酸碱法；重铬酸钾硫酸清洗液或稀氢氧化钠液。

重铬酸钾硫酸清洗液或稀氢氧化钠液 (3)(3)吸附法：吸附法：活性碳用量活性碳用量0.05-0.5%(w/v)0.05-0.5%(w/v) (4)(4)蒸馏法：蒸馏法：多效蒸馏水机制备蒸馏水多效蒸馏水机制备蒸馏水(5)(5)离离子子交交换换；；10%10%的的#301#301弱弱碱碱性性阴阴离离子子交交换换树树脂脂和和8% 8% #122#122弱弱酸酸性阳离子交换树脂，除去丙球注射液中热原性阳离子交换树脂，除去丙球注射液中热原 (6)(6)凝胶过滤法；凝胶过滤法；二乙氨基乙基葡聚糖凝胶二乙氨基乙基葡聚糖凝胶( (分子筛分子筛) ) (7)(7)反渗透法反渗透法；通过三醋酸纤维膜除去热原通过三醋酸纤维膜除去热原 (8)(8)超滤法；超滤法；3.0~15nm3.0~15nm超滤膜 (9)(9)其其他他方方法法如如二二次次以以上上湿湿热热灭灭菌菌，，或或适适当当提提高高灭灭菌菌温温度度和和时时间间，，以及微波等以及微波等 5. 热原去除方法的应用① 容器上热原：可用高温法及酸碱法②水中热原：蒸馏法及反渗透法③溶液中热原：吸附法及超滤法。

活性炭对热原有较强的吸附作用，此外还有助滤脱色作用，注射剂中广泛采用超滤膜近年已逐步用于注射剂用于截留大分子杂质以提高澄明度及除去热原 概念 灭菌(sterilization)：应用物理或化学等方法将物体上或介质中所有微生物、繁殖体及其芽孢全部杀灭或除去的手段 灭灭菌菌法法( (the the technique technique of of sterilizationsterilization) )：：杀杀灭灭或或除除去去所所有有微微生生物物、、繁殖体和芽孢的方法或技术繁殖体和芽孢的方法或技术四、灭菌与无菌技术40 概念 无无菌菌( (sterilitysterility) )：：在在任任一一指指定定的的物物体体、、介介质质或或环环境境中中无无任何任何活的微生物活的微生物 无无菌菌操操作作( (aseptic aseptic techniquetechnique) )：：在在整整个个操操作作中中利利用用或或控控制制一一定定的的条条件件，，使使产产品品避避免免被被微微生生物物污污染染的的一一项项操操作作方方法法和和技术技术 灭菌和无菌的灭菌和无菌的联系区别？联系区别？四、灭菌与无菌技术41 消毒(disinfection)：以物理或化学等方法杀灭物体上或介质中的除芽胞以外的病原微生物的手段。

消毒剂：对病原微生物具有杀灭或除去作用的物质 防腐(antisepsis)：用物理或化学等方法抑制微生物的生长与繁殖的手段，亦称抑菌 防腐剂：对微生物的生长与繁殖具有抑制作用的物质，亦称抑菌剂防腐和消毒防腐和消毒的联系区别？的联系区别？四四、灭菌与无菌技术、灭菌与无菌技术 药剂学中灭菌法可分为三大类：即物理灭菌、化学灭菌、无菌操作法 　　　　　　　　　　　　干热灭菌法　　　　　物理灭菌法　　湿热灭菌法　　　　　　　　　　　　射线灭菌法　　　　　　　　　　　　滤过灭菌法　　灭菌法　　　　　　　　　 气体灭菌法　　　　　化学灭菌法　　　　　　　　　　　　　　化学药剂杀菌法　　　　　 无菌操作法（一）物理灭菌技术（一）物理灭菌技术利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过滤方法，杀灭或除去微生物的技术称为物理灭菌法，亦称物理灭菌技术1. 1. 干热灭菌法干热灭菌法2. 2. 湿热灭菌法湿热灭菌法3. 3. 过滤灭菌法过滤灭菌法4. 4. 射线灭菌法射线灭菌法灭菌原理：特点： 方法： 火焰灭菌法： 干热空气灭菌法： 应用范围： 破坏蛋白质与核酸氢破坏蛋白质与核酸氢键，导致蛋白质变性键，导致蛋白质变性或凝固、核酸破坏，或凝固、核酸破坏，酶失活，微生物死亡酶失活，微生物死亡本法热空气穿透率弱、本法热空气穿透率弱、比热小，温度不够均匀，比热小，温度不够均匀，灭菌温度高、时间长。

灭菌温度高、时间长 火焰灭菌法及干热空气灭火焰灭菌法及干热空气灭菌法 •直接在火焰中灼烧的方直接在火焰中灼烧的方法将灭菌物品通过火法将灭菌物品通过火焰焰3~4次，次，20秒秒/次•迅速、可靠、简便迅速、可靠、简便•适于玻璃、瓷器或金属适于玻璃、瓷器或金属等用具，不适于药品灭等用具，不适于药品灭菌菌•用高温干热空气灭菌的用高温干热空气灭菌的方法•160~170 C，，>2h•170~180 C，，> 1 h•250 C > 45min 玻璃、金属、纤维制品玻璃、金属、纤维制品耐高温固体药品或试剂耐高温固体药品或试剂湿热不易穿透的油性物质湿热不易穿透的油性物质如液状石蜡、凡士林及注如液状石蜡、凡士林及注射用油等的灭菌射用油等的灭菌不适于橡胶、塑料及大部不适于橡胶、塑料及大部分药品1.干热灭菌 GMH系列对开门干热灭菌烘箱系列对开门干热灭菌烘箱 电能为热源（干热），电能为热源（干热），电能为热源（干热），电能为热源（干热），250250℃℃温度温度温度温度下灭菌 采用采用采用采用PLCPLC电脑控制，对内部温度电脑控制，对内部温度电脑控制，对内部温度电脑控制，对内部温度可自动记录。

可自动记录可自动记录可自动记录 出风口装有高效空气过滤器，出风口装有高效空气过滤器，出风口装有高效空气过滤器，出风口装有高效空气过滤器，防止了外界对内部的污染防止了外界对内部的污染防止了外界对内部的污染防止了外界对内部的污染 内部装有高温高效过滤器，内内部装有高温高效过滤器，内内部装有高温高效过滤器，内内部装有高温高效过滤器，内部循环热风经高温高效空气过滤器部循环热风经高温高效空气过滤器部循环热风经高温高效空气过滤器部循环热风经高温高效空气过滤器过滤，保证了进入有效空间的热风过滤，保证了进入有效空间的热风过滤，保证了进入有效空间的热风过滤，保证了进入有效空间的热风达到达到达到达到100100级洁净要求级洁净要求级洁净要求级洁净要求2. 湿热灭菌法:系指用饱和蒸气 、沸水或流通蒸气（高温高湿环境）进行灭菌的方法特点：蒸气潜热大、穿透力强，灭菌效率高、灭菌温度低、时间短作用可靠，操作简便等包括：热压灭菌法热压灭菌法＊＊＊＊＊＊流通蒸气灭菌法流通蒸气灭菌法煮沸灭菌法煮沸灭菌法低温间歇灭菌法低温间歇灭菌法（（1 1））热热压压灭灭菌菌：：采采用用大大于于常常压压饱饱和和水水蒸蒸气气加加热热法法杀杀灭灭微微生生物物的的方方法法。

为为热热力力灭灭菌菌中中最最有有效效，，灭灭菌菌可可靠靠，，能能杀杀灭灭所所有有细细菌菌繁繁殖体和芽胞殖体和芽胞，用途最广的方法用途最广的方法灭菌条件：灭菌条件： 适用范围：适用范围： 115.5 C（（67 kPa），），30` 121.5 C（（97 kPa），），20 `126.5 C（（139 kPa），），15 ` 湿热灭菌一般要求湿热灭菌一般要求F0 ＝＝1～～12分钟药物制剂、玻璃器皿、金属药物制剂、玻璃器皿、金属容器、瓷器、橡胶塞、无菌容器、瓷器、橡胶塞、无菌衣、敷料及其它遇高温及湿衣、敷料及其它遇高温及湿热不发生变化或破坏物质热不发生变化或破坏物质 2.湿热灭菌（2）流通蒸气灭菌和煮沸灭菌流通蒸气灭菌是用100℃的流通蒸气加热灭菌的方法煮沸灭菌是把待灭菌物品放入沸水中加热灭菌的方法流通蒸气灭菌与煮沸灭菌条件为100℃ 30~60 min缺点：不能保证杀灭所有的芽孢，如破伤风等芽孢，不是可靠的灭菌法.制备过程中要尽可能避免污染，这点必须充分注意 本法一般用于消毒或不耐高热制剂的灭菌目前我国药厂生产注射剂，特别是1-2 ml注射剂及不耐高热的品种，可考虑采用这种灭菌法。

2.湿热灭菌(3)低温间歇灭菌法系指将待灭菌物置60~80℃的水或流通蒸气中加热60min，杀灭微生物繁殖体后，在室温条件下放置24h，让待灭菌物中的芽孢发育成繁殖体，再次加热灭菌、放置，反复多次，直至杀灭所有芽孢该法适用于不耐高温、热敏感物料和制剂的灭菌缺点是费时、工效低、灭菌效果差，加入适量抑菌剂可提高灭菌效率影响湿热灭菌因素：①微生物的种类、发育阶段和数量 耐热、压次序： 芽孢＞繁殖体＞衰老体 微生物数量 灭菌时间 影响湿热灭菌因素②蒸气性质蒸气蒸气饱和蒸气饱和蒸气湿饱和蒸气湿饱和蒸气过热蒸气过热蒸气热含量热含量热穿透力热穿透力灭菌效率灭菌效率影响湿热灭菌因素③灭菌时间和药物性质 灭菌温度愈高，灭菌时间愈长药品被破坏的可能性愈大原则：在达到有效灭菌的前提下，尽原则：在达到有效灭菌的前提下，尽可能降低灭菌温度和缩短灭菌时间可能降低灭菌温度和缩短灭菌时间 液体制剂的介质性质：pH值、营养成分等影响湿热灭菌因素④灭菌物品体积及排布 柜内物品放置不能太拥挤，确保蒸气流通；并用摆放要整齐、均匀，以何证温度的均匀性。

3. 3. 过滤灭菌法过滤灭菌法系系指指采采用用过过滤滤法法除除去去微微生生物物的的方方法法该该法法属属于于机机械械除除菌菌方方法法，，该机械称为除菌过滤器该机械称为除菌过滤器该法适用于该法适用于对热非常不稳定的药液、气体、水等对热非常不稳定的药液、气体、水等物品的灭菌物品的灭菌对对灭灭菌菌用用过过滤滤器器应应有有较较高高要要求求繁繁殖殖体体>1 >1  m m者者，，芽芽孢孢 0.5 0.5  m m））常常用用的的除除菌菌过过滤滤器器：：0.220.22µ µm m的的微微孔孔滤滤膜膜器器( (过过筛筛作作用用的的滤滤器器) )和和0.3 0.3 µ µmGmG6 6垂垂熔熔玻玻璃璃滤滤器器 (阻阻留留作作用用滤滤器器这这类类滤滤器器如如压压力力过过大大或或波动，细菌可能被挤过，影响灭菌效果波动，细菌可能被挤过，影响灭菌效果) )4. 4. 射线灭菌法射线灭菌法系指采用辐射、微波和紫外线杀灭微生物和芽孢的方法包括：包括：（（1）紫外线灭菌法）紫外线灭菌法（（2）微波灭菌法）微波灭菌法（（3）辐射灭菌法）辐射灭菌法（1）紫外线灭菌法系指用用紫外线（能量）照射杀灭微生物和芽孢的方法。

紫外灭菌的波长:200~300nm， 254nm最具强灭菌力灭菌机理：核酸蛋白变性、空气中氧气产生微量臭氧（1）紫外线灭菌法紫外线穿穿透透能能力力弱弱，并能被普通玻璃吸收，装于容器中的药物不能用紫外线灭菌紫外线对人体有一一定定的的伤伤害害，照射过久易引起结膜炎、红斑及皮肤烧灼注意事项：仅作空气、表面，蒸馏水灭菌，6~15 m3空间30瓦灯一只 严禁在紫外灯下操作 使用时限（2）微波灭菌法采用微波（频率为300MHz~300kMHz)照射产生的热能杀灭微生物和芽孢的方法微波杀菌微波杀菌机理机理热效应—使微生物中蛋白质变性而失活非热效应—干扰了微生物正常的新陈代谢，破坏微生物的生长环境低温（低温（70~80℃℃）即可杀灭微生物，不影）即可杀灭微生物，不影响药物的稳定性响药物的稳定性（（2 2）微波灭菌法）微波灭菌法特点：热在加热的物质内产生，具有低温（70~80C）、迅速（2~3 min）、加热均匀，节约能源，不污染环境，操作简单，易维护等特点适用范围：热敏感药物（如VC、阿司匹林）（（3 3）辐射灭菌法）辐射灭菌法系指采用放射线同位素（60Co和137Cs）放射的 γ 射线杀灭微生物和芽孢的方法。

辐射灭菌剂量一般为2.5×104Gy原理：射线可使微生物的分子直接发生电离，产生破坏正常代谢的自由基，最终使微生物遭到破坏优点： 不升高产品温度，穿透力强，灭菌效率高适应范围：不耐热产品灭菌，适于已密封物品灭菌缺点： 设备费用较高，对操作人员存在潜在的危险性，对某些药物（特别是溶液型）可能产生药效降低或产生毒性物质和发热物质等 不适用于蛋白、多肽、核酸等生物大分子药物灭菌γ射线适用于较厚样品的灭菌，维生素类、抗菌素、射线适用于较厚样品的灭菌，维生素类、抗菌素、激素、肝素、羊肠线、医疗器械等物质的灭菌激素、肝素、羊肠线、医疗器械等物质的灭菌（二）化学灭菌法（二）化学灭菌法系指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法杀菌剂是指对微生物具有触杀作用的化学药品分为气体杀菌剂和液体杀菌剂杀菌剂只对微生物繁殖体有效，不能杀灭芽孢杀菌效能决定于微生物的种类与数量、物体表面光洁度或多孔性以及杀菌剂的性质等 气气体体消消毒毒: :该该法法适适用用于于环环境境消消毒毒和和不不耐耐热热的的医医用用器器具具、、设设备备和和设施设施等的消毒，亦用于等的消毒，亦用于粉末注射剂粉末注射剂的消毒。

的消毒环氧乙烷：环氧乙烷：杀菌机理：烷化作用，对细菌的代谢产生不可逆损害杀菌机理：烷化作用，对细菌的代谢产生不可逆损害适适用用范范围围：：塑塑料料容容器器、、对对热热敏敏感感的的固固体体药药物物、、纸纸或或塑塑料料包包装装的的药药物、橡胶制品、注射筒及注射针头、衣着敷料及器械等的灭菌物、橡胶制品、注射筒及注射针头、衣着敷料及器械等的灭菌甲甲醛醛蒸蒸气气：：室室内内的的灭灭菌菌，，每每立立方方米米空空间间用用4040％％甲甲醛醛溶溶液液30 30 m1m1，，室内空气灭菌还可用室内空气灭菌还可用丙二醇及乳酸丙二醇及乳酸二）化学灭菌 药液消毒： 0.1％~0.2％新洁而灭溶液； 2％苯酚或甲酚皂溶液； 75％酒精等； 1%聚维酮碘 该法常作为其他灭菌法的辅助措施，该法常作为其他灭菌法的辅助措施，适用范围：物体表面，包括无菌设备，无菌室的地面、墙面、台面等二）化学灭菌n n在制剂工业上应用化学杀菌剂，其目的在于减少微生物的数目，在制剂工业上应用化学杀菌剂，其目的在于减少微生物的数目，在制剂工业上应用化学杀菌剂，其目的在于减少微生物的数目，在制剂工业上应用化学杀菌剂，其目的在于减少微生物的数目，以控制无菌状况至一定水平。

以控制无菌状况至一定水平以控制无菌状况至一定水平以控制无菌状况至一定水平（三）无菌操作法（三）无菌操作法系指系指整个过程整个过程控制在控制在无菌无菌条件下进行的一种操作方法条件下进行的一种操作方法无菌分装及无菌冻干是最常见的无菌艺无菌分装及无菌冻干是最常见的无菌艺. .该该法法适适用用于于一一些些不不耐耐热热药药物物的的注注射射液液、、眼眼用用制制剂剂、、皮皮试试液液、、海绵剂和创伤制剂的海绵剂和创伤制剂的制备制备. .无菌操作法包括无菌操作法包括无菌操作室的灭菌无菌操作室的灭菌和和无菌操作无菌操作两个环节两个环节1.1.无菌操作室灭菌无菌操作室灭菌1) 甲醛溶液加热熏蒸甲醛溶液加热熏蒸2) 2) 紫紫外外线线灭灭菌菌：：每每天天工工作作前前开开启启紫紫外外线线一一小小时时，，中中午午休休息时间也要开息时间也要开0.5-10.5-1小时 3) 3) 液液体体灭灭菌菌：：用用3%3%酚酚溶溶液液、、2%2%煤煤酚酚皂皂溶溶液液、、0.20.2％％新新洁洁尔尔灭灭溶溶液液或或7575％％酒酒精精等等对对室室内内空空间间、、用用具具、、地地面面、、墙墙壁壁等等喷喷洒或擦试洒或擦试甲醛溶液加热熏蒸法甲醛溶液加热熏蒸法气体发生装置气体发生装置气体发生装置气体发生装置（蒸气加热夹层锅）（蒸气加热夹层锅）（蒸气加热夹层锅）（蒸气加热夹层锅）液态甲醛液态甲醛液态甲醛液态甲醛甲醛蒸气甲醛蒸气甲醛蒸气甲醛蒸气鼓鼓鼓鼓风风风风机机机机无菌室关闭无菌室关闭无菌室关闭无菌室关闭熏蒸熏蒸熏蒸熏蒸12~24h12~24h湿度湿度湿度湿度﹥﹥60%60%温度温度温度温度﹥﹥2525℃℃℃℃25%25%氨水氨水氨水氨水除除除除气气气气3h3h2. 2. 无菌操作无菌操作无菌操作的场所 无菌操作室、层流洁净工作台、无菌操作柜。

无菌操作的所用物品、器具、环境操作人员无菌操作无菌操作操操作作人人员员进进入入操操作作之之前前要要洗洗澡澡并并换换上上已已经经灭灭菌菌的的工工作作服服和和清清洁洁的的鞋鞋子子，，不不使使头头发发、、内内衣衣等等露露出出来来，，以以免免造造成成污污染染机机会安安瓿瓿要要150-180℃150-180℃，，2-3h2-3h干干热热灭灭菌菌；；橡橡皮皮塞塞要要以以121℃121℃，，1h1h热压灭菌；有关器具、机器都要灭菌热压灭菌；有关器具、机器都要灭菌用无菌操作法制备的注射剂，要加入用无菌操作法制备的注射剂，要加入抑菌剂小量无菌制剂的制备，可在无菌操作柜中进行小量无菌制剂的制备，可在无菌操作柜中进行无无菌菌操操作作场场所所：： ：：① ① 无无菌菌操操作作室室；；② ② 层层流流洁洁净净工工作作台台；；③ ③ 无菌操作柜无菌操作柜 v无菌检查：整个工艺过程保证SAL≦10－6灭菌参数（灭菌参数（F F值和值和F F0 0值）值） D D值值为为降降低低被被灭灭菌菌物物品品中中微微生生物物数数至至原原来来1/101/10或或降降低低一一个个对数单位（对数单位（lg100lg100降至降至lg10lg10）所需的时间。

所需的时间1.D1.D值值 在在在在一定温度下一定温度下一定温度下一定温度下，杀灭，杀灭，杀灭，杀灭90%90%90%90%微生物微生物微生物微生物 （或残存率为（或残存率为（或残存率为（或残存率为10%10%10%10%）所需的）所需的）所需的）所需的灭菌时间灭菌时间灭菌时间灭菌时间lgN0-lgNt=kt/2.303微生物死亡的速度微生物死亡的速度微生物死亡的速度微生物死亡的速度:D = t = 2.303/k(lg100-lg10)（（四）灭菌效力的检查方法与四）灭菌效力的检查方法与F F0 0值值D值因微生物的种类、环境、灭菌温度不同而各异 不同灭菌法不同微生物的D值Z Z＝＝T T2 2－－T T1 1／／logDlogD2 2－－logDlogD1 12.Z值 降低一个lgD值所需升高的温度,即灭菌时间减少到原来的1/10所需升高的温度或在相同灭菌时间内,杀灭99%的微生物所需提高的温度.D2/D1=10(T2-T1)/Z；如Z＝10℃，灭菌时间减少到原来的时间的10%，而具有相同灭菌效果，所需升高的灭菌温度为10 ℃.F值：在在一一定定灭灭菌菌温温度度（（T T））下下给给定定的的Z Z值值所所产产生生的的灭灭菌菌效效果果与与在在参参比比温温度度（（ T To o））下下给给定定的的Z Z值值所所产产生生的的灭灭菌菌效效果果相相同同时时，，其其灭灭菌菌效效果果所所相相当当在在参参比比温温度度下下灭灭菌菌了了多多长长时时间间。

常常用用于于干干热灭菌热灭菌，单位：，单位：minmin F = △t ∑10 3.F与F0值T－T0ZvF(或F0)值可作用验证灭菌可靠性的参数t是测量被灭菌物温度的时间间隔，一般为0.5-1.0或更小，T是每个t测量被灭菌的温度，T0是参比温度 在在一一定定灭灭菌菌温温度度（（T T））、、Z Z值值为为10℃10℃时时t时时间间所所产产生生的的灭灭菌菌效效果果与与121 121 ℃℃、、 Z Z值值为为10℃10℃所所产产生生的的灭灭菌菌效效果果相相同同时时，，其其灭灭菌菌效效果果所所相相当当于于温温度度在在121 121 ℃℃下下灭灭菌菌F0时时间间(min)(min)的的效效果果 F F0 0值值 F0 = △t ∑10 T-121Z物理物理F0值值数学表达式：数学表达式：生物生物生物生物F F0 0值值值值数学表达式：数学表达式：数学表达式：数学表达式：F0=D121℃×(lgN0-lgNt)为灭菌后预计达到的为灭菌后预计达到的微生物残存数，即染微生物残存数，即染菌度概率菌度概率。

也就是说也就是说F0是将各种灭菌温度使微是将各种灭菌温度使微生物的致死力转换为灭菌物品完生物的致死力转换为灭菌物品完全暴露于全暴露于121℃℃使微生物致死效力；使微生物致死效力； 即即F0为标准灭菌时间为标准灭菌时间时时 间间/min/min0 01 12 23 34 45 56 67 78-8-3838温温 度度/℃/℃100100102102104104106106108108110110112112114114115115时时 间间/min/min39394040414142424343 444445454646  温温 度度/℃/℃114114112112110110108108106106104104102102100100   灭菌过程中不同时间的温度灭菌过程中不同时间的温度灭菌过程中不同时间的温度灭菌过程中不同时间的温度 77 F0值的计算对于验证灭菌效果极为有用，当产品以121℃湿热灭菌时，灭菌器内的温度虽能迅速升到 121℃，而被灭菌物品内部则不然，由于包装材料性能及其他因素影响而使升温度各异，而F0将随着产品温度(T)变化而呈指数的变化，故温度即使很小的差别(如0.1-1)将对F0 值产生显著的影响。

同时要求测定灭菌物品内的实际温度，故用F0 来监测灭菌效果有重要的意义由于F0 是将不同灭菌温度折算到相当于 121℃湿热灭菌时的效力，故F0 值可作为灭菌过程的比较参数 影响F0值测定的因素：温度 由于温度的微小差别将使F0值发生显著的变化，因此首先应保证温度测量的准确性 灭菌物品的数量与排布使各处温度分布均匀，测得F0值更可靠 灭菌产品溶液粘度及容器充填量 灭菌产品微生物污染数 F0＝D121×（lgNo－lgNt）计算F0时，应适当考虑增加安全因素，一般增加50％ 尽可能减少各工序中微生物对药品污染,分装好的药品应尽快灭菌,以使初始微生物数在最低水平.最好每个容器含菌量控制在10以下.五、 空气净化（一）（一） 概述概述 空气净化空气净化 以创造以创造洁净空气洁净空气为目的的为目的的空气调节措施空气调节措施 工业净化工业净化 除去尘埃除去尘埃 生物净化生物净化 除去尘埃、微生物除去尘埃、微生物--------制药工业制药工业 （二）（二） 空气净化标准空气净化标准 一般净化：一般净化： 温度湿度，初效过滤器温度湿度，初效过滤器 中等净化：中等净化： 温度湿度，含尘量，初中效二级过滤器温度湿度，含尘量，初中效二级过滤器 超净净化：超净净化： 温度湿度，含尘量温度湿度，含尘量( (严格严格) )，初中高，初中高2009年GMP规定 无菌药品生产所需的洁净区可分为以下无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4 4个级别个级别洁净区微生物监测的动态标准(a)A级 高高风风险险操操作作区区，，如如：：灌灌装装区区、、放放置置胶胶塞塞桶桶、、敞敞口口安安瓿瓿瓶瓶、、敞敞口口西西林林瓶瓶的的区区域域及及无无菌菌装装配配或或连连接接操操作作的的区区域域。

通通常常用用层层流流操操作作台台（（罩罩））来来维维持持该该区区的的环环境境状状态态层层流流系系统统在在其其工工作作区区域域必必须须均均匀匀送送风风，，风风速速为为0.36-0.54m/s0.36-0.54m/s（（指指导导值值））应应有有数数据据证证明明层层流流的的状态并须验证状态并须验证 在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用单向流或较低的风速在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用单向流或较低的风速B B级级 指指无菌配制无菌配制和和灌装灌装等高风险操作等高风险操作A A级区所处的级区所处的背景区域背景区域C C级和级和D D级级 指生产无菌药品过程中重要程度较指生产无菌药品过程中重要程度较低的洁净操作区低的洁净操作区无菌药品生产环境的空气洁净度级别要求 (新)（三） 空气净化技术 一一般般采采用用空空气气过过滤滤法法多多孔孔过过滤滤介介质质，，尘尘埃埃和和微微生生物物被被截截留留、、吸吸附 a)a)过滤方式过滤方式 表面过滤表面过滤 拦截作用拦截作用 深层过滤深层过滤 吸附作用吸附作用（扩散、静电、分子间范德华力）（扩散、静电、分子间范德华力） b)b)影响因素影响因素 粒径、过滤风速、介质直径和密实性、附尘粒径、过滤风速、介质直径和密实性、附尘 C)C)空气过滤器空气过滤器 粒子大小大于过滤介质微孔而截留在介质表面。

常用介质为硝酸纤维素、醋酸纤维素微孔滤膜主要用于要求高的无尘无菌洁净室的末端过滤粒子大小小于过滤介质微孔而吸附在介质内部常用介质为天然或合成纤维、活性炭、滤纸等v粒径：存在过滤效率最低的中间粒径v过滤风速：风速应适宜v介质纤维直径和密实性：应适宜v附尘：应定期清洗空气过滤器空气过滤器的种类 板式过滤器、契式过滤器、袋式过滤器、 折叠式过滤器空气过滤器的特性 1）过滤效率 2）穿透率和净化系数 3）容尘量空气滤过器空气滤过器：空气滤过器：板式（初效空气滤过器）：新风滤过，去除>5 m的悬浮尘粒具阻力小，过滤效率高等特点契式、袋式（中效空气滤过器）：用于滤除>1 m 的尘粒，具阻力小，过滤效率高，大风量，容尘量大，质量轻等特点折叠式（亚高效空气滤过器）：用于滤除<1 m 的尘粒，滤过效率在95% －99.9%之间，用于高效过滤器之前高效空气滤过器：滤除<1 m 的尘粒，对粒径为0.3 m的尘粒的滤过效率在99.97%以上其特点是效率高、阻力大、不能再生89 v过滤器的组合过滤器的组合：三级过滤装置：初效过滤－中效过滤－高效过滤 (1)设计要求 是一门综合的建筑物设计，需对房间布局、管道、下水道、通风、照明，空气净化及设备安装等作系统考虑。

位置选择房间布局内部结构 选择空气洁净的地方，远离马选择空气洁净的地方，远离马路烟囱周围环境应安静、开路烟囱周围环境应安静、开阔、光线充足，无泥土外露，阔、光线充足，无泥土外露，可种植草坪，但不能种花可种植草坪，但不能种花按照生产工艺流程合理布局人按照生产工艺流程合理布局人流、物流应严格分开流、物流应严格分开根据各工序对洁净度的要求将根据各工序对洁净度的要求将注射剂车间按洁净度划分为一注射剂车间按洁净度划分为一般生产区、控制区及洁净区般生产区、控制区及洁净区室内电气线路、抽气管道应全室内电气线路、抽气管道应全部嵌入墙内，内表面应平整光部嵌入墙内，内表面应平整光滑、无缝隙、接口严密无颗粒滑、无缝隙、接口严密无颗粒脱落，并能耐受清洗与消毒脱落，并能耐受清洗与消毒墙壁与天棚及地板连接处应成墙壁与天棚及地板连接处应成弧形减少灰尘积聚和便于清洗弧形减少灰尘积聚和便于清洗三）洁净室的设计房间布局。