热毒宁注射液对il-1、il-6、et-1、pge2炎性介质的影响.doc

1热毒宁注射液对 IL-1、IL-6、ET-1 、PGE2 炎性介质的影响* 王开富 1#，萧伟 2、3△ 王振中 2、3 ，徐丽君 1，毕宇安 2、3 ，, 孙兰 2、3 ，邹欣 1，龚菂 1，黄光英 ,1△1 华中科技大学同济医学院附属同济医院，武汉，4300302 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港， 2220013 中药制药过程新技术国家重点实验室, 江苏 连云港， 222001摘要：目的：探讨热毒宁注射液抗炎、清热解毒的作用及其机制，方法：分别以二甲苯致小鼠耳肿、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀、冰醋酸致小鼠毛细血管通透性增加等炎症模型；以内毒素感染家兔致内毒素性发热模型，观测小鼠耳肿胀及大鼠足趾关节肿胀度，检测 IL-1、IL-6 、内皮素（ET-1 ） 、前列腺素 E2 (PGE2) 等炎症介质，结果： 热毒宁注射液 10.15g/kg、5.08g/kg剂量组对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀均有抑制作用，1 小时开始显效，持续至 4 小时；2.54g/kg剂量组在 2 小时方显效，抑制作用可持续至 4 小时；10.15g/kg 剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，并能降低小鼠毛细血管通透性；注射内毒素 2h，模型组家兔肛温值居高不下，但热毒宁 2.54 g/kg、 5.08g/kg 两剂量组具有明显清热、降体温的作用，对家兔血清 IL-1、IL-6 、ET-1、PGE2；大鼠血清 IL-1、IL-6 等炎症介质均有不同程度的抑制作用。

结论：热毒宁注射液对内毒素引起的家兔发热具有解热降温作用；对角叉菜胶致大鼠炎症有明显抑制作用、能显著降低大鼠 IL-1、IL-6 水平；并能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，提示热毒宁注射液具有较强的抗炎解热作用，其机理可能与抑制 IL-1、ET-1、 IL-6、PGE2 等炎症介质有关 关键词：热毒宁注射液；解热；抗炎；炎性介质————————# 王开富，男，医学硕士，副研究员，E-mail:wkf58@△ 共同通讯作者一：萧伟，男，研究员，高级工程师，E-mail：wzhzh-nj@△ 共同通讯作者二：黄光英，女，教授、主任医师， E-mail: gyhuang@；* 国家 973 项目，项目编号：2010CB7356042The influence of Reduning injection on the inflammatory mediums of IL-1, IL-6, ET-1 and PGE2 * Wang KaiFu 1 #, XiaoWei 2, 3△ , WangZhenZhong 2, 3, XuLiJun 1, BiYuAn 2, 3, SunLan 2, 3, zou xin 1, Gong di 1, Huang GuangYing 1△ 1Tongji medical college affiliated tongji hospital, huazhong university of science and technology, wuhan, 430030 2 Jiangsu kang Yuan pharmaceutical co., LTD., lianyungang jiangsu, 222001 3National key laboratory for advanced technology in pharmaceutical process of Traditional Chinese medicine, lianyungang, jiangsu, 222001 Abstract: objective: to study the effect of Reduning injection in anti-inflammation and clearing heat and detoxicating and its mechanism. methods: Inflammation models were established by xylene-induced mouse ear swelling, carrageenin-induced rat toe swelling and glacial acetic acid-induced increase of blood capillary permeability in mice, respectively. Endotoxin heating model was induced by infecting the rabbit with toxin. The swelling degree of mice ear and rat digits joint was observed. The inflammatory mediums of IL-1, IL-6, endothelin (ET-1), prostaglandin E2 (PGE2) were detected. Results: Reduning injection with doses of both 10.15 g/kg and 5.08 g/kg inhibited the rat toe swelling caused by carrageenin, with the effect appearing 1 hour and continuing up to 4 hours after receiving the injection. The inhibitory effect of Reduning injection with a dose of 2.54 g/kg dose appeared powerfully in 2 hours and sustained to 4 hours. Reduning injection with a dose of 10.15g/kg had an obvious inhibitory effect on mouse ear swelling induced by xylene, and could reduce capillary permeability of mice. The anal temperature of the rabbit was continuingly high after receiving injection of endotoxin for two hours. Reduning injection with doses of both 5.08 g/kg and 2.54 g/kg could relieve heat, lower body temperature obviously and inhibit rabbit serum inflammatory mediators of IL-1, IL-6, endothelin (ET-1), prostaglandin E2 (PGE2) with different degrees. Conclusion: Reduning injection has antipyretic and hypothermia 3effect on fever of rabbit caused by endotoxin, inhibited rat inflammation induced by carrageenin obviously, reduced the levels of IL-1 and IL-6 in rat significantly and inhibited mouse auricular swelling induced by xylene. The results indicated that Reduning injection has strong anti-inflammatory and antipyretic effect, its mechanism might correlated with the inhibition of inflammation medium such as IL-1, ET-1, IL-6 and PGE2. Key words: Reduning injection; Antipyretic effect; Anti-inflammation; Inflammatory medium 热毒宁注射液是由青蒿、金银花、栀子等中药合理配伍而成的纯中药注射液，临床观察表明热毒宁注射液治疗上呼吸道感染总有效率达到 98.08%【1】 ，并未见明显毒副作用和不良反应，为了对热毒宁注射液抗炎、解热作用及其机制进行全面的评价，进一步推广临床应用，本实验对其进行了系统研究。

一．材料与方法1．实验动物日本大耳白兔，60 只，雌雄各半，体重 1.8-2.5kg，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供（SCXK(鄂)2008-0006） ；Wistar 大鼠，60 只，雌雄各半，体重 150-160g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供（SCXK(鄂)2008-0005） ；昆明小鼠，雌雄各半，100 只，体重 25-30g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供（SCXK(鄂)2004-0007） ；2. 药物与试剂热毒宁注射液，由江苏康缘药业公司提供 (批号：20100728)；双黄连粉针剂，由哈药集团中药二厂提供（批号：1004202） ；赖氨酸阿斯匹林（也称来比林）粉针剂，由蚌埠丰原涂山制药有限公司提供（批号：091117） ；无热源水（细菌内毒素检测用水）购置湛江安度斯生物有限公司（批号：0512310） ；无菌生理盐水，购置武汉双鹤药业公司（批号：100825911） ；无菌注射用水，购置天津药业集团新郑股份有限公司（批号：100326） ；细菌内毒素工作标准品（冻干粉剂）购置中国药品生物制品检定所（批号：150601） ； IL-1、IL-6 、ET-1 试剂盒由北方生物所提供；PGE2 由北京华英生物技术研究所检测。

3. 统计学方法采用 sas 软件进行成组设计资料的 t 检验4. 实验方法与步骤44.1 热毒宁清热解毒的功效及机理研究4.1.1 试剂及药物配制：大肠杆菌内毒素（家兔发热模型用药品） ，冻干品 160Eu/每支,用无菌注射用水溶解并稀释至 5.3ml 则为 30.1Eu/ml 放置混悬器上振荡 15 分钟，家兔造模用剂量 15Eu/Kg；热毒宁注射液稀释：将盛装药液的玻璃瓶放置 180℃烤箱中干烤 2 小时冷却后备用，在无菌环境下，按上述低、中、高三个剂量将热毒宁注射液分装于干烤后的玻璃瓶中备用；双黄连注射液配制：将冻干粉针剂（600mg /支）的双黄连用无热源注射用水溶解并稀释至 6.85ml 则为 87.6mg/ml，家兔按 2ml/Kg 注射4.1.2 实验步骤与方法健康合格家兔 60 只，适应性饲养三天后动物分组：将动物随机分为 6 组：正常对照组、模型组、双黄连治疗组、热毒宁注射液（5.08g/kg 、2.54 g/kg、1.27g/kg ）三个剂量治疗组，每组 10 只热毒宁注射液、双黄连注射液治疗组均按设计剂量于兔耳静脉注射给药，正常对照组、模型组均用生理盐水注射，连续三天。

用细菌内毒素制作家兔发热模型，于药物治疗的第三天，按 15Eu/Kg 于家兔耳静脉注射细菌内毒素，制作模型 【2】 ，且同时给药治疗（即第三天给药治疗） 在注射内毒素前测量家兔基础肛温值，于注射内毒素后 1h、2h、4h 三次测量家兔肛温值；以温差值计算并比较用药前后肛温值的变化；于注射内毒素后 4h 处死家兔分离血清及血浆分别检测 IL-1、IL-6 、PGE 2、ET-1 等指标； 注：肛。