HPLC法测定二氯醋酸二异丙胺含量药学论文.doc

HPLC法测定二氯醋酸二异丙胺含量_药学论文 【关键词】 高效液相色谱法；二氯醋酸二异丙胺；含量测定　　［摘要］ 目的：建立HPLC法测定二氯醋酸二异丙胺的含量方法：采用Zorbax SBC18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以1.0 mmol/L四丁基溴化铵溶液（用氨水调pH至7.2）乙腈（72∶28）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为207 nm结果：二氯醋酸二异丙胺在0.5～1.5 mg/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9999），日内和日间精密度分别为0.80%、1.05%，平均回收率为99.1%，样品经破坏的降解产物和二氯醋酸二异丙胺分离度良好结论：本法简便、专属性强，可用于二氯醋酸二异丙胺的含量测定 　　 ［关键词］ 高效液相色谱法；二氯醋酸二异丙胺；含量测定 　　Determination of diisopropylamine dichloroacetate with HPLC　　［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method to determine the contents of diisopropylamine dichloroacetate. Methods: Zorbax SBC18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used. The mobile phase was consisted of 1.0 mmol/L tetrabutylammonium bromide solution (adjusted pH to 7.2 with ammonia water)acetonitrile (72∶28). The flow rate was 1.0 mL/min. And detection wavelength was set at 207 nm. Results: The calibration curve of diisopropylamine dichloroacetate was linear in range of 0.5～1.5 mg/mL. The RSD of intraday and interday assays was 0.80% and 1.05%, respectively. Satisfactory separation between diisopropylamine dichloroacetate and its main degradation product was obtained. Conclusions: The method is convenient, selective and effective for determination of diisopropylamine dichloroacetate.　　［Key words］ HPLC; Diisopropylamine dichloroacetate; Quantitative determination　　二氯醋酸二异丙胺是维生素B15的活性成分，有改善肝功能、调节血脂代谢的作用［1］。

二氯醋酸二异丙胺主要用于 治疗 各种疾病引起的肝功能障碍，可用于治疗非酒精性脂肪性肝病者［2］及并发高脂血症者［1］　　已有 文献 报道可用GC法测定二氯醋酸二异丙胺尿药浓度［3］，但是二氯醋酸二异丙胺的沸点较高，该方法对气相色谱柱损害较大，普通实验室难以普及，而有关物质和含量测定的HPLC法则未见报道本研究建立了二氯醋酸二异丙胺含量测定的HPLC法，并进行了方法学评价结果表明，该方法分离度好、灵敏度高、专属性强，可用于二氯醋酸二异丙胺质量控制　　 1 仪器与试药 　　Agilent 1100高效液相色谱仪，包括紫外检测器和Chem Stations化学工作站（安捷仑科技有限公司）二氯醋酸二异丙胺，批号：040214（北京双鹤药业）；二氯醋酸二异丙胺对照品（美国Sigma公司，含量99.8%）乙腈为色谱纯（Merck公司），水为重蒸水，其他试剂均为市售分析纯　　 2 方法与结果 　　2.1 色谱条件色谱柱：Zorbax SBC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：1.0 mmol/L四丁基溴化铵溶液（用氨水调pH至7.2）乙腈（72∶28）；检测波长：207 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL。

　　2.2 线性范围取二氯醋酸二异丙胺对照品约0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述溶液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度并摇匀，照色谱条件测定以峰面积（A）为纵坐标，样品浓度（C）为横坐标，进行线性回归，本品在0.5～1.5 mg/mL浓度范围内呈良好线性关系，回归方程为A=9.98×102C+3.52，r=0.9999　　2.3 回收率试验取二氯醋酸二异丙胺对照品约60 mg、90 mg和140 mg各三份，精密称定，分别置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，照色谱条件测定，将测得的峰面积代入标准曲线得测得量， 计算 回收率，得平均回收率为99.1%（RSD=0.30%，n=9）　　2.4 精密度和检测限称取二氯醋酸二异丙胺适量，用流动相溶解配成1.0 mg/mL的6份平行溶液，连续进样测定，考察日内精密度；连续测定3天，考察日间精密度测得日内和日间精密度RSD分别为0.80%（n=6）和1.05%（n=3）采用0.5 mg/mL的标准溶液逐级稀释，以信噪比（S/N=3）测得二氯醋酸二异丙胺检测限为10 μg/mL。

　　2.5 破坏试验为考察样品在不同条件下降解产物对方法的影响，分别将本品于130 ℃高温烘烤4 h，强光5 000 lx照射5 d，用0.1 mol/L的HCl溶液、0.1 mol/L的NaOH溶液和10％H2O2溶液在100 ℃加热1 h破坏，以同法处理的相应溶剂作对照，测定经破坏后的样品溶液的色谱图，见图1结果表明，在高温、光照、酸、碱和氧化剧烈条件下破坏产生的产物和二氯醋酸二异丙胺分离度良好，不影响本品含量测定　　图1 略　　2.6 空白溶剂干扰试验本法用流动相配制测定溶液，故以流动相为空白，色谱图见图2结果表明，空白溶剂不存在干扰　　图2 空白溶剂色谱图　略　　2.7 样品测定精密称取二氯醋酸二异丙胺适量，加流动相配制成1 mg/mL的溶液，作为供试品溶液；另精密称取对照品适量，加流动相配制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液按上述色谱条件检测，记录峰面积，按外标法 计算 含量测得二氯醋酸二异丙胺含量为99.2%，归一化法计算有关物质为0.75%用二氯醋酸二异丙胺国家标准［3］即滴定法作为对照，测得供试品的含量为99.3%，说明本方法可用于二氯醋酸二异丙胺的质量控制　　 3 讨论 　　由于二氯醋酸二异丙胺极性较大，水溶液显弱酸性，在C18柱上基本上无保留， 参考 有关 文献 ［4］，可以在流动相中加入四丁基季铵盐进行分离。

我们选用四丁基溴化铵为离子对试剂后，色谱图中主峰保留时间在7 min左右，能实现样品和杂质的分离根据文献［4］，选用pH为7.5左右的流动相最为合适经过实验，当pH值低于7.0时，出峰时间短于2 min，说明主峰未与离子对试剂结合；当流动相pH值为8.0时，色谱图和pH为7.5时基本一致但是C18柱的pH耐受范围一般在3～8，为了避免对色谱柱造成不必要的损害，我们在稍低于7.5的pH条件下进行了实验有文献报道用GC法测定二氯醋酸二异丙胺的含量［5］，但未见HPLC法测定其含量的报道本文建立了HPLC测定二氯醋酸二异丙胺的方法，经破坏试验表明，样品的降解产物与主药二氯醋酸二异丙胺能完全分离，该方法可用于二氯醋酸二异丙胺的含量测定　　 参考文献： 　　［1］ 王 哲, 周长玉, 李晓莉. 二氯醋酸二异丙胺 治疗 非酒精性脂肪性肝炎的临床观察［J］. 深圳中西医结合杂志, 2003, 13(6): 373375.　　［2］ 陆伦根, 曾民德, 茅益民, 等. 二氯醋酸二异丙胺治疗非酒精性脂肪性肝病的随机双盲临床研究［J］. 中华肝脏病杂志, 2005, 13(2): 9295.　　［3］ 国家药品标准, 化学药品［S］. 第十四册. WS10001(HD1319)2003.　　［4］ 孙毓庆. 分析化学(下册)［M］. 第四版. 北京: 人民卫生出版社, 1999: 279280.　　［5］ 蔡素芳, 肖永红, 余泽波. 顶空气相色谱法测定二氯乙酸二异丙胺尿药浓度［J］. 重庆医科大学学报, 2004, 29(1): 108112.。