蛋白质含量测定.doc

化学与制药工程学院 工业分析专业实验 实验题目： 蛋白质含量的测定 班 级： 应化0704 学 号： 07220418 姓 名： 实验日期： 实验题目:蛋白质含量的测定一、摘要通过对牛奶依次进行消解、凯氏定氮仪蒸馏、滴定从而计算出牛奶中蛋白质的含量为：3.39g/100ml关键词：蛋白质，牛奶，凯氏定氮法二、前言：蛋白质含量是衡量食品的营养成分的一项重要标准，但由于蛋白质组成及其性质的复杂性，在食品分析中，通常用食品的总氮量表示凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量凯氏定氮仪是依据经典凯氏定氮方法设计的自动测定系统，根据蛋白质中氮的含量恒定的原理，通过测定样品中氮的含量从而计算蛋白质含量该仪器安装、操作简单;适用于粮油检测、饲料分析、植物养分测试、土肥检测、环保、医药、化工等行业的分析、教学及研究中主要用来检测粮食、食品、乳制品、饮料、饲料、土壤、水、药物、沉淀物和化学品等中的氨氮、蛋白质氮等含量，是操作人员的理想工具，同时利用定氮仪也可以测二氧化硫等物质，是实验室比较重要的理化分析仪器。

三、实验原理1、凯氏定氮法：样品经加硫酸消化使蛋白质分解，其中氮素与硫酸化合成硫酸铵然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后，再用盐酸或硫酸滴定根据盐酸消耗量，再乘以一定的数值即为蛋白含量，其化学反应式如下2NH2(CH2)2COOH+13H2S04 → (NH4)2S04+6C02+12S02+16H2(NH4)2SO4+2NAOH → 2NH2+2H2O+NA2SO42NH3+4H3BO3 → (NH4)2B4O7+5H2O (NH4)2B407+H2S04+5H20-(NH4)9SO4+4H2BO21）、有机物中的铵根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO42）、在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中3）、用已知浓度的H2SO4（或HCl）标准溶液滴定，根据HCl消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量2、KDN-08A定氮仪蛋白质测定仪（定氮仪）以国际凯氏定氮法为依据，进行设计制造的，此仪器主机采用蒸气自动控制发生器，在液位稳压器的配合下，使蒸气在数十秒时间内平稳输出供蒸馏器使用第一执行机关控制下的碱液流经蒸馏管进入定量消化管，使固定在酸液里的氨在碱性条件下挥发。

第二执行机关控制下的蒸气对碱性条件的试样再进行蒸馏，使氨彻底挥发，挥发的氨被冷凝器冷凝下来，完全地被固定在硼酸之中，然后用标准酸对其滴定到终点，计算出氮的含量，再乘以换算蛋白质的系数得出蛋白质的含量四、试剂与仪器1、硫酸钾2、硫酸铜 3、硫酸4、2％硼酸溶液5、40％氢氧化钠溶液6、混合指示剂：把溶解于95％乙醇的0.l％溴甲酚绿溶液10毫升和溶于95％乙醇的0.l％甲基红溶液2毫升混合而成．7、0.01M HCL标准溶液或0.01M硫酸标准溶液8、凯氏微量定氮仪一套（KDN-08A定氮仪）9、定氮瓶100m1或50ml一只10、三角瓶150ml 3只11、量筒50ml、l0ml、l00ml12、吸量管10ml只13、酸式滴定管1支14、容量瓶100毫升1只15、小漏斗1只五、实验步骤1、样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。

取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水3、想接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作六、数据处理1、硫酸标准溶液的标定：Na2CO3的浓度：标准硫酸溶液的浓度：则 标准硫酸溶液的平均浓度：2、牛奶中蛋白质的测定：牛奶中蛋白质的含量（g/100ml）：表2：牛奶中蛋白质的测定项目数据牛奶的体积（ml）10空白试样消耗标准硫酸溶液的体积（ml）3.26牛奶试样消耗标准硫酸溶液的体积（ml）6.94牛奶中蛋白质的含量（g/100ml）3.39七、实验讨论1、蒸馏反应室里的溶液总体积要控制，否则反应室溶液体积太大，液面升高，容易喷进冷凝管内。

还要控制蒸汽量或火力大小，蒸汽量太大也会将反应液喷进冷凝管中；火力太小，蒸馏速度慢，且易发生倒流；蒸汽产生要均匀，防止暴沸；一定要装上蒸汽发生器的安全管，同时加上几粒玻璃珠2、本实验方法要求实验样品应是均匀的，大块的固体样品应用粉碎设备打得细小均匀，液体样品应振摇或搅拌均匀3、加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂4、消化过程中，首先确保浓硫酸量足够，如样品脂肪含量较高时，应适当增加硫酸量;其次对某些样品炭化易产生泡沫，这时可采用消解炉曲线升温或手动控制升温，让消解溶液沸腾均匀后再提高消解温度，直至消化液呈透明蓝绿色再消化0.5h或1h因为炭化过程中，升温速度过快会使样品溢出消化管或溅起粘附在管壁导致无法消化完全而造成氮损失，影响结果准确性5、蒸馏时必须加碱，一是中和硫酸，二是使溶液处于强碱性，这样才能使 (NH4)2SO4变成NH3被硼酸吸收 八、实验结论：牛奶试样中蛋白质含量为3.39g/100ml九、评语和成绩成绩： 指导教师： 。