葡萄球菌属的常规鉴定标准操作程序.docx

葡萄球菌属的常规鉴定标准操作程序1 概述葡 萄 球 菌 属 是 一 类 触 媒 试 验 阳 性 的 革 兰 阳 性 球 菌 ，包 括 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ，表 面葡萄球菌、 腐生葡萄球菌等 32 个种 是临床最常见的化脓性球菌 ， 广泛分布 于自然界中，在人体表面鼻、咽、肠道也经常存在2 形态与染色革兰阳性球菌，直径~仙m成单、双、短链或不规则状排列在液体培养基浓 汁标本中，往往排列成双或短链状多数有鞭毛3 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上典型菌落为金黄色，周围有明显的透明（B） 溶血环，部分菌落呈橙色，在高盐甘露醇平板上呈橙色菌落表皮葡萄球菌等 其他葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，不溶血4 生化反应触酶试验阳性，多数能分解葡萄糖、麦蚜糖、蔗糖和甘露醇不分解棉籽 糖和水杨甘，液化明胶，血浆凝固酶和DNA酶实验分阳性5 鉴别要点本菌属特征：触酶实验阳性，革兰阳性球菌，葡萄状排列，菌落中等大小，中 等干燥与微球菌属的鉴别：触酶实验都为阳性，但O/ F试验葡萄球菌属为发酵型， 而微球菌为氧化型或无反应，而且菌体较葡萄菌属更大，排列呈四联状为主与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属触酶试验都为阳性，而链球菌为阴性，O/ F 试验葡萄球菌属为发酵型而链球菌为氧化型。

凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表鸟氨酸脱结合型凝 游离型凝菌名PYP试验 DNA试验 VP试验固 酶 试 验固 酶 试 验竣酶实验金黄色葡萄球菌++-++-中间型葡萄球菌-+++--施氏葡萄球菌+-+++-路邓葡萄球菌+-+-++注：“+”为90%以上菌株为阳性，”--”为90%以上菌株为阳性凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表叱咯烷酮芳基新生霉素耐药多黏菌素B耐菌名露醇蔗糖凝固因子月尿酶甘(50 g)酰胺酶药300U纸片(PYR)表面葡萄球菌 一一+ 一 +腐生葡萄球菌一——+V++溶血葡萄球菌+一一V+一一人型葡萄球菌一一+一+一一华纳葡萄球菌一一+V+——一模仿葡萄球菌+一+++ ——一头状葡萄球菌一一V++ ——一耳葡萄球菌V一一一V 一一施氏葡萄球菌++一一——一路邓葡萄球菌+VV一+一V注："+”为90%以上菌株为阳性，“一”为90%以上菌株为阴性6细菌鉴定与药物敏感试验取平板上菌落直接涂片、革兰染色并镜检，葡萄球菌为革兰阳性球菌呈单个、 成双或葡萄状排列，菌体呈圆形在血琼脂平板上，成圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润德不透明菌落， 可产生脂溶性色素，在血琼脂平板上部分葡萄球菌表现为B溶血。

触酶试验（3%过氧化氢试验）阳性发酵葡萄糖产酸血浆凝固酶试验（用混合德人血浆）6.4.1 试管法：检测分泌型凝固酶：取1: 4枸檬酸钠抗凝血浆，加入3~5个菌 落，35c培养箱4~6小时，观察血浆有无凝固发生，凝固者为阳性，若阴性， 继续观察到24小时，不凝固者为阴性，试验应同时作阴性、阳性对照6.4.2 玻片法：检测结合凝固酶，但要注意假阳性和假阴性的出现取纯化后的单个菌落，用Vitek2 系统GPS药敏卡进行细菌鉴定和药敏试验， 如有必要加入做补充试验耐 苯 唑 西 林 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 为 MRSA， 耐 苯 唑 西 林 的 凝 固 酶 阴 性 葡 萄 球 菌 为 MRSCN也可选头 报西丁来检测MRSA和MRSCN7 检验结果分析与报告金黄色葡萄球菌在任何标本中分离出都要及时鉴定报告，输液管、人工植 入组织分离的表皮葡萄球菌和尿液中的腐生葡萄球菌视为病原菌；凝固酶阴性 感染鉴定到种；注意MRS的报告根据NCCLS标准,如果该菌B -内酰胺酶阳性, 则应报告该菌对所有的青霉素类、大多数一代头孢菌素耐药，治疗时建议临床 医师选择含酶抑制的复合抗生素或对该酶稳定的药物；如该菌MRS阳性，则应 报告该菌对所有B -内酰胺酶类抗生素（包括含抑酶剂复合剂）耐药，要注意其 他药物的多重耐药性。

8 临床意义葡萄球菌属在自然界分布很广，大部分无致病性金黄色葡萄球菌是最重 要的治病性葡萄球菌，以金黄色葡萄球菌代表的致病性葡萄球菌寄人类化脓性 感染 中最重要 的病原菌 ，能 引 起 多组织 、多 系统 尤其是深部组织 的 化 脓性感染 ， 另外还可以引起心内膜炎、败血症等全身感染，现在临床中凝固酶阴性的葡萄 球菌感染上升，是医院感染的重要病原菌，另外MRSAffi MRSCN®染也呈上升趋 势，是医院感染的主要问题，应该足够重视。