2023年D二聚体测定试剂免疫比浊法注册技术审查指导原则.doc

D-二聚体测定试剂（免疫比浊法）注册技术审查指导原则（2023年）附件3 D-二聚体测定试剂（免疫比浊法） 注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对D-二聚体测定试剂（免疫比浊法）注册申报资料的预备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料供应参考 本指导原则是对D-二聚体测定试剂（免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以接受，但应供应具体的争辩资料和验证资料应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断进展，本指导原则相关内容也将适时进行调整 一、适用范围 从方法学考虑，在本文中D-二聚体测定试剂是指以胶乳凝集免疫比浊法为基本原理，利用全自动、半自动凝血分析仪；全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学试验室对人体血浆样本中D-二聚体含量进行体外定量分析的试剂。

依据《体外诊断试剂注册管理方法》（国家食品药品监督管理总局令第5号），D-二聚体测定试剂管理类别为二类，分类代号为6840 本指导原则不适用于： （一）单独申请注册的D-二聚体校准品和质控品 （二）免疫比浊法原理之外的其他D-二聚体测定试剂盒 二、注册申报材料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物平安性方面的说明、产品主要争辩结果的总结和评价以及同类产品上市状况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理方法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2023年第44号）的相关要求，下面着重介绍与D-二聚体测定试剂预期用途有关的临床背景状况 D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ⅩⅢ交联后，经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，能够反映体内的凝血功能和纤溶活性，是机体高凝状态、血栓形成、继发性纤溶亢进的指标在深静脉血栓、肺栓塞、弥散性血管内凝血、重症肝炎等疾病中水平上升，以及溶栓治疗后均可见D-二聚体水平上升，可作为溶栓治疗的有效观看指标由于具有极高的敏感性和阴性猜测值，临床上已经将D-二聚体阴性作为排解肺栓塞（pulmonary embolism，PE）、深静脉血栓（deep venous thrombosis，DVT）形成的重要依据。

（二）主要原材料的争辩资料（如需供应） 主要原材料的选择、制备、质量标准及试验验证争辩资料；质控品、校准品的原料选择、制备、定值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、试验方法、数据及统计分析等具体资料 （三）主要生产工艺及反应体系的争辩资料（如需供应） 1.主要生产工艺介绍，可以图表方式表示 2.反应原理介绍 3.检测方法的介绍：含样本采集、标准品和质控品、测试步骤、结果计算等 4.反应体系争辩：含样本采集及处理、样本要求（抗凝剂的选择）、样本用量、试剂用量、反应条件（波长、温度、时间等）、校准方法（如有）、质控方法等的争辩资料 5.不同适用机型的反应条件假如有差异应分别详述 （四）分析性能评估资料 企业应提交在产品研制阶段对试剂盒进行的全部性能验证的争辩资料，包括具体争辩方法、试验数据、统计方法等具体资料进行至少三个批次的验证对于D-二聚体测定试剂，建议着重对以下分析性能进行争辩 1.精密度 1.1重复性 在重复性条件下，对不同浓度的样品分别重复测定10次，计算10次测定结果的平均值（）和标准差（SD），依据公式（1）得出变异系数（CV），结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。

CV=SD/×100%...................................（1） 1.2批间差 用质控血浆（正常血浆和特别血浆）分别测试3个不同批号的试剂，每个批号测试10次，分别计算两个水平测量值的平均值（）和标准差（SD），按公式（1）计算变异系数（CV） 2.精确     度 按以下优先挨次选择精确     度性能评估方法： 2.1相对偏差 2.1.1用可用于评价常规方法的参考物质/有证参考物质（CRM）对试剂进行测试，重复检测3次，取测试结果均值（M），按公式（2）计算相对偏差（B）假如3次结果都符合要求，即判为合格假如大于等于2次的结果不合格，即判为不合格假如有1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并分别依据公式（2）计算相对偏差，假如大于等于19次测试的结果符合要求，则精确     度符合企业规定要求 B=（M-T）/T…………………….（2） 式中：M—测试结果均值； T—有证参考物质标示值，或各浓度人源样本定值 注：首选国家参考物质，如无国家参考物质再选用国际参考物质 2.1.2对企业参考品进行检测 用定值的企业参考品对试剂进行测试，重复检测3次，取测试结果均值（M），按公式（2）计算相对偏差（B）。

假如3次结果都符合要求，即判为合格假如大于等于2次的结果不合格，即判为不合格假如有1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并分别依据公式（2）计算相对偏差，假如大于等于19次测试的结果符合要求，则精确     度符合企业规定要求 2.2比对试验 参考《体外诊断试剂分析性能评估（精确     度—方法学比对）技术审查指导原则》及CLSI的EP9—A2《用患者样本进行方法比对及偏倚估：批准指南——其次版》进行精确     度评估 方法：用不少于40个掩盖检测浓度范围内不同浓度的人源样品，以生产企业指定的试剂作为比对方法，每份样品按待测试剂及比对试剂的操作方法分别检测线性回归计算两组结果的相关系数（r）、斜率及偏差，结果应符合企业规定要求 2.3回收试验 参考《体外诊断试剂分析性能评估（精确     度—回收试验）技术审查指导原则》（食药监办械函〔2023〕116号）要求完成精确     度评估 方法：选择接近参考区间的常规检测样本，分为体积相同的3—4份，在其中2—3份样本中加入不同浓度相同体积的待测物标准液制备待回收分析样本，加入体积小于原体积的10%，制成2—3个不同浓度的待回收分析样本，计算加入的待测物的浓度。

在另一份样本中加入同样体积的无待测物的溶剂，制成基础样本用待评价系统对待回收分析样本和基础样本进行测定，通常对样本进行3次重复测定，计算均值，取其均值进行下述计算 数据处理及结果报告： 用公式（3）计算回收率： （3） 式中：R—回收率； V—加入待测物标准液的体积； V0—基础样本的体积 C—基础样本加入待测标准物质后的检测浓度； C0—基础样本的检测浓度； Cs—待测物标准液的浓度 3.线性 建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相像在浓度梯度的选择上，应使用具有溯源性的具有浓度差的样本，或经上一级方法或临床已注册上市的试剂盒验证其测值真实性的样本，样本浓度应适当掩盖其线性范围线性范围不得窄于企业预期的测定范围用接近D-二聚体测试区间上限的高浓度样品和缓冲液稀释成至少5个稀释浓度（xi）；每个稀释浓度测试3次，分别求出测定结果的均值（yi）以稀释浓度（xi）为自变量，以测定结果均值（yi）为因变量求出线性回归方程按公式计算线性回归的相关系数（r）不强制要求企业对线性范围内的偏差进行分段评估，如不分段，各浓度的相对偏差应≤±10%如分段，则分界点设置不宜过高，高于分界点的浓度相对偏差应≤±10%，低于分界点的浓度确定偏差应不高于分界点浓度的±10%。

目前，国内外厂家的线性区间一般为0.5—30μg/mL（DDU单位）或0.2—4μg/mL（FEU单位） 4.特异性 4.1溶血（血红蛋白）、脂血（甘油三酯）、黄疸（胆红素）、类风湿因子等干扰因素对检测结果的影响 4.2样本中其他可能干扰试剂反应的物质对检测结果的影响 4.3资料中所提到的干扰物质，其干扰程度均不应使用模糊的描述方式，而应细化到干扰量，并供应相应的试验数据予以支持 5.校准品及质控品 参照GB/T 21415—2023《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和把握物质赋值的计量学溯源性》的要求，供应企业（工作）校准品及试剂盒配套校准品定值及不确定度计算相关资料，供应质控品赋值及其质控范围确定的相关资料同时，应对校准品、质控品的赋值结果的瓶内均匀性、瓶间均匀性，以及其赋值结果的精确     度进行评价如校准品或质控品的基体不同于临床常用样本类型，还应提交校准物质互换性的相关争辩资料 6.其他需留意问题 6.1对于适用多个机型的产品，应供应如产品说明书适用机型项中所列的全部适用机型的性能评估资料 6.2如注册申请中包含不同的包装规格，需要对不同包装规格之间的差异进行分析或验证。

如不同的包装规格产品间存在性能差异，需要提交接受每个包装规格产品进行的上述项目评估的试验资料及总结如不同包装规格之间不存在性能差异，需要提交包装规格之间不存在性能差异的具体说明，具体说明不同包装规格之间的差别及可能产生的影响 6.3试剂空白吸光度、分析灵敏度，执行GB/T 26124—2023临床化学体外诊断试剂中有关要求 （五）参考区间确定资料 应提交验证参考区间所接受样原来源及具体的试验资料 应明确参考人群的筛选标准，争辩各组（如性别、年龄等）例数不应低于120例 参考值争辩结果应在说明书参考区间项中进行相应说明 特殊强调：D-二聚体参考区间的确定对于静脉血栓形成的排解诊断至关重要传统的以正常人群测定结果分布的95%置信区间作为参考区间的方法对于本产品挂念不大应以可获得深静脉血栓形成诊断最佳敏感性或阴性猜测值作为临界值的推断指标各试验室应当以对疑诊深静脉血栓形成的患者经过客观影像学检验证明的临床争辩中确立针对该特定检测方法和特定人群的检测界限 （六）稳定性争辩资料 稳定性争辩主要包括注册单元中全部组成部分的效期稳定性及开瓶（复溶）稳定性等，如有需要可增加运输稳定性、机载稳定性、样本稳定性争辩等。

如试剂需要配制，还应对配制后试剂的稳定性进行争辩企业可依据实际需要选择合理的稳定性争辩方案常用的稳定性争辩方案为证明试剂在经过被作用于指定条件后，仍能满足主要性能指标要求与未被作用于指定条件的试剂性能全都稳定性争辩资料应包括争辩方法的确定依据、具体方法及过程对于实时稳定性争辩，应供应至少3批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的争辩资料 （七）临床评价资料 依据《体外诊断试剂注册管理方法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）及《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2023年第16号）执行 1.争辩方法 选择境内已批准上市的性能相近的同类产品作为对比试剂，接受试验用体外诊断试剂与之进行对比试验争辩，证明本品与已上市产品等效或优于已上市产品建议企业尽量选择方法学相同、线性范围及精密度等性能接近的同类试剂作为对比试剂 2.临床试验机构的选择 应选择至少两家经国家食品药品监督管理总局备案的临床试验机构，临床机构试验操作人员应充分生疏检测系统的各环节（试剂、质控及操作程序等），生疏评价方案在整个试验中，考核试剂和参比试剂都应处于有效的质量把握下，定期对仪器进行校准、保养，最大限度保证试验数据的精确     性及可重复性。

3.临床试验方案 临床试验开展前，应按《关于医疗器械临床试验备案有关事宜的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2023年第87号）有关要求进行临床备案，备案。