益生菌分散片的制备及体外抑菌研究.docx

          益生菌分散片的制备及体外抑菌研究                    摘要：目的：优选益生菌分散片制备工艺，确认分散片体外抑菌作用方法：采用单因素试验对麦芽糊精、乳糖量进行筛选，采用正交试验对交联聚维酮添加量、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素比例进行优化；并对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌进行体外抑菌圈试验结果：麦芽糊精添加量为5%，乳糖添加量为5%，交联聚维酮添加量15%，羧甲基纤维素钠8%，微晶纤维素30%，润滑剂适量，以制得的分散片崩解时间<3 min，分散均匀且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均有＞7mm的抑菌圈出现结论：按该方法制备的益生菌分散片工艺稳定可行；分散片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌有抑菌作用关键词:益生菌；分散片；抑菌试验1.引言阴道炎是女性常见的生殖器官炎症，已婚妇女中，一半以上人群患有不同程度的阴道炎抗生素是治疗阴道妇科疾病的主要手段，而长时间使用可导致宿主对抗生素的耐药性，且抗生素可改变阴道的正常微生态环境造成菌群失调，从而导致治疗效果不好、复发率高等问题[1]但并没有从根源上解除妇科疾病，忽视了女性生殖道微生态菌群平衡。

近年来已研究出许多新方法并开发出不少的剂型，如洗液、栓剂、散剂及胶囊等等[2]分散片是一种崩解快、溶出快、生物利用度高的固体制剂，兼具片剂和液体制剂的优点[3]本试验拟开发一种妇科用益生菌分散片，不仅能有效的缓解与预防阴道炎，而且很大程度的避免了药物使用过程中的污染和交叉感染，开发利用本品，会给广大女性阴道炎患者带来福音2.材料与方法2.1仪器及试剂6冲压片机（上海天凡药机制造厂），崩解时限仪(天津市富兰斯电子科贸有限公司），YP2001N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司）交联聚维酮、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、麦芽糊精、乳糖、乳酸、聚乙二醇、微粉硅胶、硬脂酸镁；95%乙醇；大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌（广州环凯生物技术有限公司）；益生菌混合菌粉由内蒙古普泽生物制品有限公司提供2.2崩解时间测定方法取分散片6片，分别置于崩解仪吊篮的玻璃管中，使吊篮浸入1000 mL烧杯中，并调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25 mm，烧杯内盛有37℃蒸馏水，调节水位使吊篮上升时筛网在水面下15 mm 处，启动崩解仪，观察崩解情况并记录时间2.3填充剂的选择对分散片常用的填充剂麦芽糊精、乳糖进行单因素考察，以崩解时间为指标筛选较优填充量，以交联聚维酮为崩解剂，与其他辅料混匀，加入95%乙醇适量制软材，制粒，干燥，整粒，压片，测定崩解时间。

2.4崩解剂的选择在填充剂用量保持不变的情况下，以崩解时间为指标，采用L9(34)正交表对崩解剂的配伍比例进行筛选2.5体外抑菌试验(1)抑菌片的制备:取无菌并干燥的滤纸片每片滴加实际使用浓度抑菌溶液 20μL，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃) 中烤干，或置室温下自然干燥后备用2)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×105cfu/mL～5×106cfu/mL 试验菌悬液（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌），在营养琼脂培养基（沙氏培养基）平板表面均匀涂抹3次每涂抹1次，平板应转动 60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周盖好平皿，置室温干燥 5min3)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片用无菌镊子取样片贴放于平板表面各样片中心之间相距 25mm以上，与平板的周缘相距 15mm 以上贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h 观察结果用游标卡尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) 并记录测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行 测量其直径应以抑菌环外沿为界 4. 抑菌环直径大于 7mm 者，判为有抑菌作用[4-6]。

3. 结果与分析3.1填充剂的选择结果对分散片常用的填充剂麦芽糊精、乳糖进行单因素考察，结果见表1、表2表1 麦芽糊精不同添加量崩解时间比较添加量（%）崩解时间（s）1955105101211516820197结果显示，随着麦芽糊精添加量的增加崩解时间变长，但1%添加量片剂表面粗糙，无光滑感，且1%和5%添加量崩解时间差别不大，故选5%为麦芽糊精最终添加量表2 乳糖不同添加量崩解时间比较添加量（%）崩解时间（s）318642105233628973153%、4%虽然崩解时间短，但考虑乳糖作为益生元，会影响产品中益生菌活性，降低其功能性； 6%添加量接近崩解时限5min，为了减少它对后期整体崩解时间的影响，所以确定5%为乳糖最终添加量3.2崩解剂的选择结果采用L9(34)正交表对崩解剂的配伍比例进行筛选，因素水平见表3，正交试验结果见表4通过直观分析结果可知，最优组合是A1B1C2，经过3次崩解时间验证，平均时间为118s，故交联聚维酮添加量15%，羧甲基纤维素钠8%，微晶纤维素30%为最佳配伍比例表3 崩解剂配伍比例正交试验因素水平表水平交联聚维酮（%）A羧甲基纤维素钠（%）B微晶纤维素（%）C11582022010303251240表4崩解剂配伍比例正交试验安排与结果序号ABC崩解时间（s）111112221221663133171421213152231916231180731314183211829332183均值1153.000131.333161.333均值2167.333179.667160.000均值3168.667178.000167.667极差15.66748.3347.6673.3体外抑菌结果抑菌圈结果如图1所示，分散片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均出现直径＞7mm的抑菌圈。

大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌图1 抑菌圈图4.结论本试验对填充剂进行单因素试验确定麦芽糊精添加量为5%，乳糖添加量为5%；对崩解剂进行正交试验确定交联聚维酮添加量15%，羧甲基纤维素钠8%，微晶纤维素30%；润滑剂适量经过3批的制备，其崩解时间平均为118s，片型良好，外观光滑，适于益生菌分散片的制备；该分散片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均出现抑菌环直径＞7mm，有较好抑菌效果参考文献：1. 钟燕,Inge Tarnow,隋龙.鼠李糖乳杆菌GR-1和罗伊氏乳杆菌RC-14防治阴道炎的研究进展[J].国际妇产科学杂志,2013,40(05):428-431.2. 康艳萍.四物汤分散片制备工艺研究[J].广州化工,2021,49(18):28-30.3. 蓝美英,徐凯,曾华哲,郑晓斌.克拉霉素分散片制备工艺研究[J].中国处方药,2021, 19 (08):33-35.4. 董锡文,孙晶,杜春梅,汪景宽.嗜酸乳杆菌的体外抑菌研究[J].安徽农业科学,2008(07): 2629 -2630+2635.5. Anatoly, Bezkorovainy. Probiotics: determinants of survival and growth in the gut1,2,3[J]. The American Journal of Clinical Nutrition, 2001, 73(2):399s-405s.6. 资英娟,孔俊铭,郭志鹏,杜全能,史宝军.凝结芽孢杆菌NJh032产酶抑菌活性及其发酵产品性能探究[J].饲料研究,2021,44(07):102-106.  -全文完-。