钼蓝比色法.docx

钼蓝比色法:8.1.1 仪器和用具：8.1.1.1 瓷坩锅或石英坩锅8.1.1.2 紫外分光光度计8.1.1.3 移液管：5、10ml8.1.1.4 电炉高温炉8.1.1.5 容量瓶： 100,500,1000ml8.1.1.6 表面皿8.1.1.7 烧杯8.1.1.8 量筒8.1.1.9 恒温水浴锅8.1.1.10 漏斗8.1.1.11 坩锅8.1.1.12 试剂瓶等8.1.2 试剂：8.1.2.1 50%氢氧化钾溶液8.1.2.2 盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸8.1.2.3 0.015%硫酸联氨溶液8.124 2.5%钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，摇匀，冷却至室温，加入 12.5g钼酸钠，溶解后加水至500ml,摇匀，静置24小时备用8.1.2.5磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中作为1号液，含磷 0.1mg/ml,吸取1号液10ml,加水稀释至100ml含磷0.01mg/ml作为2号液，比色用8.1.3操作方法：8.1.3.1 绘制标准曲线：取5只50ml比色管，编成1、2、4、6、8五个号码，按号码顺序分别加入磷标准2号液1、 2、4、6、8ml，再按顺序分别加水9、8、6、4、2ml。

接着向5只管内各加0.015%硫酸联 氨溶液8.0mk，各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml加塞，摇匀，去塞，将5只管置于正在沸腾的 水浴中加热10分钟，取出冷却至室温，用水稀释至50ml充分摇匀，经10分钟后，用分光 光度计计在波长650nm下，用1cm液槽，用水调整零点，分别测定消光值以消光值为纵 坐标，以磷（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）为横坐标绘制标准曲线8.1.3.2制备被测液：用坩锅称取试样约10g（准确至0.001g）,加氧化锌0.5g，先在电炉上加热炭化，然后送入550〜 600°C的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约2小时，取出坩锅在干燥器中冷却至室温，用 热盐酸（1:1）10ml溶解灰分，并加热微沸5分钟，将溶解液过滤，注入100ml容量瓶中，用 热水冲洗坩锅和滤纸，待滤液冷却至室温后，用 50%氢氧化钾溶液中和至出现浑浊，缓慢 滴加盐酸使氢氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2 滴，最后用水稀释至刻度，摇匀8.1.3.3比色：用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中，加入0.015%硫酸联氨8.0ml,力口 2.0ml钼酸 钠稀硫酸溶液，加塞， 摇匀， 将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10分钟，取出冷却至室温， 用水稀释至50ml充分摇匀，经10分钟后，用分光光度计在650nm下，用1cm液槽，用水 调整零点，测定消光值。

8.1.4结果计算：根据被测液的消光值，从标准曲线查得磷量（p）,按公式计算磷脂含量：P磷脂（％） = xl04W式中：P 标准曲线查得的磷量，mgV2 ——样品灰化后稀释的体积， mlVl ——比色时所取的被测液体积， ml26.31——每毫克磷相当于磷脂的毫克数W ——试样重量， g注：①于常数已输入紫外分光光度计，结果即为（KxABS）值② 品完全烧焦后，才放到马福炉中灰化③ 用热蒸馏水冲洗坩埚时应少量多次，尽可能把样品冲洗干净④ 硫酸联氨溶液会引起皮肤、眼睛、嗓子等器官发炎，损害心脏和肺，故操作时要小心谨慎。