实验电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量.doc

实验电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量一、实验目的1. 掌握滴定法测定氨基酸总量的原理2. 了解电位滴定法确定酸碱滴定终点原理3. 熟练使用酸度计二、实验原理氨基酸含有酸性的一COOH,也含有碱性的一NH2它们互相作用使氨基酸成为中性的内盐加入甲醛溶液时，-nh2与甲醛结合，其碱性消失这样就可以用碱来滴定一COOH，并用间接的方法测定氨基酸的含量将酸度计的玻璃电极及甘汞电极(或复合电极)插入被测液中构成电池,用碱液滴定,根据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点三、仪器与试剂1.仪器酸度计、复合玻璃电极、磁力搅拌器烧杯(200mL)微量滴定管(10ml)2.试剂① 20%中性甲醛② 0.05mol/L氢氧化钠标准溶液③ pH=6.18标准缓冲溶液四、实验步骤1. 仪器校正：开启酸度计电源，预热30分钟，连接复合电极选择适当pH的缓冲溶液,测量缓冲溶液的温度，调节温度补偿旋钮至实际温度将电极浸入缓冲溶液中，调节定位旋钮，使酸度计显示的pH值与缓冲溶液的pH值相符校正完后定位调节旋钮不可再旋动，否则必须重新校正2. 样品处理准确称取约5.0g酱油试样，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0mL，置于200mL烧杯中，力加60mL水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液［c(NaOH)=0.050mol/L］滴定至酸度计指示pH8.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液(0.05mol/L)的毫升数，可计算总酸含量。

3. 氨基酸的滴定在上述滴定至PH8.2的溶液中加入lO.OmL甲醛溶液，混匀再用氢氧化钠标准滴定溶液(0.05mol/L)继续滴定至PH9.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液(0.05mol/L)的毫升数(VJ4.空白实验同时取80mL蒸馏水置于另一200mL烧杯中，先用0.05mo1/L氢氧化钠标准溶液滴至pH8.2(此时不记碱消耗量)，再加入lO.OmL中性甲醛溶液，混匀用0.05mo1/L的氢氧化钠标准溶液继续滴定至pH9.2，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积(v2)此为试剂空白实验五、计算—甘鋅*—(E、(V-V)xc€0.014mx20/100式中：V]—样品稀释液在加入甲醛后滴定至终点(pH9.2)所消耗的氢氧化钠标准溶液的体积，ml；V2—空白实验在加入甲醛后滴定至终点(pH9.2)所消耗的氢氧化钠标准溶液的体积，ml；c—氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；m—测定用样品溶液相当于样品的质量，g；0.014一氮的毫摩尔质量，mg/mol六、说明1. 标准pH缓冲液按规定配置好以后为避免其pH值会发生变化，存放时间不应过长,否则将直接影响到滴定终点,最终导致检测结果的不准确。

2. 久置的复合电极初次使用时，一定要先在饱和KCl中浸泡24h以上3. 本法准确快速，可用于各类样品游离氨基酸含量测定4. 对于混浊和色深样液可不经处理而直接测定。