S100A8A9和S100A4在外阴硬化性苔藓及外阴鳞癌中表达及意义.pdf

S 1 0 0 A 8 ／A 9 和S 1 0 0 A 4 在外阴硬化性苔藓及外阴鳞癌中表达及意义E x l ：a n dSi g n i f i c a n c eo fS 0 0 A 8 ／A 9 乏r o d S100A4Exoresslona n dS1 9 n l t l c a n c eo IllO O A 4乏i nV u l v a rL i c h e nS c l e r o s u sa n dV u l a rS q u a m o u sC e l l C a r c i n o m a导师：论文课题起止时间：2Q ! Q 生墨月二2Q ! ! 生三旦中国医科大学．( 辽宁)20 11 年3 月中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。

论文作者签名：丛亟盆日期：丝：三：三：．z中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文．·论文作者签名．．．幽 指导教师签名：一：料日期：21 = ：翌目录、一、摘要中文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1英文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4二、英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“7三、论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“8日U 舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“葛材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1 0讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯j ⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。

⋯⋯··15四、本研究创新性的自我评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19五、参考文献⋯．，．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·2 0．六、附录综j 苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2 2在学期间科研成绩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·3 2致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3 3个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3 4·中文论著摘要·S 1 0 0 A 8 ／A 9 和S 1 0 0 A 4 在外阴硬化性苔藓及外阴鳞癌中表达及意义，目的S 1 0 0 蛋白家族是一类低分子量酸性钙离子结合蛋白，具有E F 手相结构，可以在特定时空参与钙离子信号传导，调节多种细胞生物学活动，如细胞分化、细胞迁移、基因转录以及细胞周期运行等，S 1 0 0 A 8 、S 1 0 0 A 9 与S 1 0 0 A 4 均属于S 1 0 0蛋白家族，其中S 1 0 0 A 8 和S 1 0 0 A 9 极易形成异二聚体复合物，研究表明，S 1 0 0 A 8 ／A 9 表达失调与几种常见的人类恶性肿瘤相关。

而S 1 0 0 A 4 蛋白在多种恶性肿瘤中的也有异常表达但其与外阴疾病之间是否存在一定的关联尚不明确，因此，本研究将检测外阴硬化性台藓及外阴鳞癌中S 1 0 0 A 8 ／A 9 及S 1 0 0 A 4 的表达情况，探讨其与外阴疾病之间的关联一，材料材料与方法1 、标本选自中国医科大学附属第一医院病理研究室内1 9 9 8 ．2 0 1 1 年经手术切除活检存档的蜡块，外阴鳞癌( V S C C ) 3 0 例，外阴硬化性苔藓( v L S ) 2 0 例，外阴正常皮肤1 0 例所有患者病理资料完整，’标本均经病理学证实，均未经放化疗及激光等物理治疗搜集外阴鳞癌患者的临床病理资料进行统计分析，包括：临床分期、病理分级’2 、试剂鼠抗人S 1 0 0 A S ／A 9 多克隆抗体( 工作浓度1 ：5 0 ) ，鼠抗人S 1 0 0 A 4 多克隆抗体( 工作浓度1 ：1 0 0 ) 均购自美国S A N T A 公司，即用型S A B C 试剂盒，D A B 显色剂购自北京博奥深生物工程有限公司二、实验方法采用S A B C 免疫组织化学方法分别检测外阴正常组织、外阴硬化性台藓及外阴鳞癌中S 1 0 0 A 8 ／A 9 及S 1 0 0 A 4 的表达情况。

三、免疫组化染色结果判定标准在光学显微镜下观察以细胞浆或细胞核出现黄色或棕黄色颗粒者为阳性，利用显微图象分析系统M e t aM o r p h ( U I C ／O L U M P U S ．U S ／J P ) 进行积分光密度测定，每张切片选取5 个不同高倍视野，计算同一张切片的平均积分光密度值四、统计学方法利用S P S S l 7 ．0 统计分析软件，各组计量资料结果进行t 检验，P 0 ．0 5 ) ，在V S C C 中癌巢中呈阴性表达或极少细胞阳性，阳性1 9 例，间质细胞呈高表达，S 1 0 0 A 4 蛋白表达阳性细胞的平均光密度值0 ．5 3 1 0 + 2 ．7 6 8 ，与2正常相比有统计学差异口 0 ．0 5 ) ．m o r ep o s i t i v ec e l l sw e r ef o u n di nt h em e s e n c h y m eo fv s c c ( F i g u r c6 ) ．A v e r a g eo p t i c a ld e n s i t yo fS10 0 A 4p r o t e i nc e l l sW a s ，s i g n i f i c a n t5d i f f e r e n c 它w a sf o u n dw h e nc o m p a r e dw i t ht h en o r m a l ( p o ．0 5 ) ，在V S C C 中癌巢中呈阴性表达或极少细胞阳性，间质细胞呈高表达，阳性1 9 例，S 1 0 0 A 4 蛋白表达阳性细胞的平均光密度0 ．5 3 1 0 ±2 ．7 6 8 值，与正常相比有统计学差异( P o ．0 5 ) ，阳性细胞仍位于基底细胞层，提示：S 1 0 0 A 4 没有参与外阴硬化性苔藓的病变过程。

在外阴癌中，S 1 0 0 A 4 蛋白主要表达于肿瘤的间质细胞，而在癌巢中弱表达或无表达，与正常皮肤相比有统计学上的差异( P < o ．0 5 ) 研究发现在许多肿瘤中如：乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、胆囊癌、胃癌、肺癌、膀胱癌、卵巢癌、结肠癌和甲状腺癌内均有S 1 0 0 A 4 过表达，且S 1 0 0 A 4 的表达与病人生存时间的缩短和预后差有密切的关系【1 2 ’1 3 1 1 0 0 A 4 具有胞内和胞外的双重作用，在细胞内S 1 0 0 A 4同肌球蛋白I I 【1 4 】结合，调节细胞活性，促进细胞的转移在细胞外S 1 0 0 A 4 可与层粘连蛋白结合，即内皮细胞纤维酶原的共同受体这一作用可以促进纤维酶原的活性，促进纤维酶原的释放，其可以激活没有活性的基质金属蛋白酶【l5 1 1 0 0 A 4可增加T G F 介导的M M P 9 的表达，减低细胞间的粘附，促进转移另外，$ 1 0 0 A 4可使血小板反应蛋白1 t 1 6 】( t h r o m b o s p o n d i n l ) 和甲硫氨酸基肽酶2 ( M e t A p 2 ) 表达下调，后两者是血管生成的抑制剂，因此，促进血管的生成，加速转移。

因此，外阴癌间质中S 1 0 0 A 4 的高表达，提示其促进肿瘤细胞的侵袭和转移另外，研究发现S 1 0 0 A 4 具有促进P 5 3 的丢失【1 刀，抑制其活化的作用，结果导致P 5 3 功能丧失：1 ) 使D N A 损伤的细胞不能停留在G o ／G l ，进行修复后再进入S 期，．而直接进入S 期，促进细胞恶变和异常增殖2 ) D N A 损伤的细胞不能修复后将进入细胞的凋亡程序本研究中外阴癌巢肿瘤细胞S 1 0 0 A 4 近阴性，提示：S 1 0 0 A 4 蛋白在外阴表皮细胞癌变过程中未起作用结论缅F 匕1 、S 1 0 0 A 8 ／A 9 参与外阴硬化性苔藓的病变过程2 、S 1 0 0 A 8 ／A 9 在外阴鳞状细胞癌中促进肿瘤细胞增殖的作用3 、S 1 0 0 A 4 在外阴鳞状细胞癌间质中促进肿瘤细胞的侵袭和转移，但在外阴表皮细胞癌变过程中并未起作用1 8·本研究创新性的自我评价·目前国内外对S 1 0 0 A 8 ／A 9 及S 1 0 0 A 4 与外阴疾病之间是否存在一定的关联尚不明确，因此，本实验对这一问题进行了探究，检测外阴硬化性台藓及外阴鳞癌中S 1 0 0 A 8 ／A 9 及$ 1 0 0 A 4 的表达情况，探讨其与外阴疾病之间的关联。

1 9·参考文献·1W a l l a c e ( 1 9 7 1 ) r e p o r t e At h a t1 2o f 2 9 0 ( 4 ％) p a t i e n t sd e v e l o p e dS C Cf o l l o w i n gah i s t o r yo f L Sd u r i n ga12 - y e a rp e r i o db u tf u r t h e rf o l l o w - u ps t u d i e sh a v es h o w naw i d er a n g eo fr i s ko fp r o g r e s s i o n ( H a r te ta t , 1 9 7 5 ；M e f f e r te t 口厶1 9 9 5 ；C a r l s o ne ta l , 1 9 9 8 ) ．2O t h e r s ( R u e d ae t 口f ' 1 9 9 4 ；S c u r r ye t 口7 ' 1 9 9 7 ；V i l m e re t 以2 0 0 0 ) h a v el o o k e da tt h es k i na d j a c e n tt oS C Cw h i c h , n o tu n c o m m o n l y , s h o w se p i t h e l i a ld i s o r d e r s ；t h em o s tc o m m o na r eL Sa n ds q u a m o u sh y p e r p l a s i a ( S H ) ．3R a v a s iT ’H s uKG o y e t t eJ ，e ta 1 ．P r o b i n gt h eS10 0p r o t e i nf a m i l yt h r o u g hg e n o m i ca n df u n c t i o n a la n a l y s i s 叨．G e n o m i c s ，2 0 0 4 ；8 4 ( 1 ) ：1 0 - 2。