玉露组织培养方案.docx

玉露组织培养与快速繁殖技术研究方案一、 实验目的1、 探究玉露组织培养的最适培养基的配置；2、 利用探究出来的最适培养基进行玉露的快速繁殖二、 仪器与用具1、 仪器：超净工作台，光照培养箱；2、 用具：酒精灯1个、打火机1个、酒精棉球、长镊子1把、 培养皿5套、滤纸、烧杯2个、量筒、记号笔1支、剪刀1把、刀子 1把、小喷壶1个、电子天平、电炉、玻棒、PH试纸等；3、试剂：75%酒精，0. 1%HgCI，无菌水，工业酒精、蔗糖、 2琼脂、1.0mg/L的KT，不同浓度的NAA，不同浓度的6-BA,NaOH溶液；4、实验材料：玉露的幼嫩花茎三、 实验方法1. 培养基的配置及灭菌2. 无菌材料的获得：将选取的培养材料小心剥去苞叶，流水冲洗2 h， 75%酒精浸泡3〜5S，无菌水漂洗3〜5次，0. 1%HgCl2：浸泡8 min， 无菌水冲洗3〜4次将消毒后的材料剪切成1 cm左右的小段置于无菌 滤纸上，备用3. 培养基的筛选I、诱导培养基的筛选：切取1cm左右的玉露花茎接种在： (l)MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L; (2)MS+NAA0.1mg/L+KT1.0mg/L;(3)MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L；⑷ MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L 培养基上，每个处理 4瓶， 每瓶3个外植体，隔天观察花茎生长状况，并记录，约15天后统计愈 伤组织数目。

II、 增殖培养基的筛选：将诱导出的愈伤组织或带有芽的愈伤组织团 进行切割接种在：⑸ MS+NAA0.1mg/L+KT1.0mg/L;MS+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L;(7) MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L;(8) MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L四种培养基上，每个处理4 瓶，每瓶3个外植体，约15天后，观察其生长发育及成株情况III、 生根培养基的筛选：选再生植株接种在：⑼1/2MS+NAA0.1mg/L; (10)MS+ NAA0.1mg/L两种培养基上，观察其生根情况以上培养基均添加3%的蔗糖，6%的琼脂，pH 5. 8〜6. 0，培养温 度(25±2)°C，光照强度2 000〜3 000 Ix，光照时间12 h/d4. 炼苗：在生根培养基上生长30-40d后，植株逐渐长大移出培养 室，置于常温室内，利用自然光照培养1周，打开瓶盖，苗2〜3 d取出带有4〜5条根系的小苗5. 移栽：用清水洗掉附着的培养基，用1 000倍多菌灵溶液浸泡20 min， 置于报纸上晾干，在炼苗后，适当风干后，移栽到经灭菌的培养基质 上(腐殖土：细沙：蛭石=1： 1:1)再用塑料薄膜盖住，不要让植株 与薄膜直接接触。

每天放风2〜3次，每3〜4 d浇少量水2周后揭去 薄膜，让其自然生长成活后，每个月喷洒一次杀菌剂待其重新发 出新根后，再移栽到苗床上四、现象记录1、 观察外植体接种2-6d的污染情况；2、 观察并逐日记录外植体出芽的情况，包括外植体的形态变化，芽 出现的时间以及芽的形态特征，并计算每种培养基外植体的诱导情况， 增殖情况及生根情况，确定最适诱导培养基、增殖培养基、生根培养 基参考文献：许继勇，麦瑜玲，郑添群，黄伟雄，夏时云“高地〃截形瓦苇的组织培养与快速繁殖技术研究［天津农业科］2006, 12(2)陈红刚，高素芳，杨韬.玉露的组织培养与快速扩繁［北方园艺学］—甘肃中医学院2011 (12) : 101〜102黄清俊，丁雨龙，唐晓英珍奇罗肉植物万象微型繁殖［北方园艺］-(上海农林职业技术学院，南京林业大学)2007 (5)： 191〜193李德森，孙涛.截形十二卷的组织培养与快速繁殖［期刊论文］-植物生理学通讯2012， 38 (6)宋晓涛，沈萌，左志宇，安晓云，尹晓爽，孙涛，杨雪，李德森.十二卷属植物西山寿的组织培养与快速繁殖［期刊论文］-植物生理学通讯2007, 43 (5)。