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甘油冷冻保藏法以及一些注意事项.doc

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卖家[上传人]：m****

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甘油冷冻保藏法以及一些注意事项本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右1) 用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落2) 平皿倒置于30°C或37°C恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右3) 挑取一个单菌落，接种于一个装50mL(LB)的300mL三角瓶中30C或37C振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.54) 用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌5) 按30%甘油：种子液为1：1(V/V)的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管(1-2mL/管)，-70C或液氮保存实验需要预准备的材料：平皿培养基50％甘油母液，1.5刻度离心管(保存菌种用，最好买进口的，质量较好)注意事项：(1) 50％甘油母液要多灭几次，因为甘油对细菌有很好的保护作用，所以灭菌除杂时也就相对难一点，多灭几次可解决2) 平皿要提前灭好培养基倒进去后要计算好过一周附近再涂平板，因为冷却不久的平板积水汽比较多，不利用涂布弄干放几天可减少水分，利于涂布，不过放太久平皿也会干掉的哦！(3) 最后的甘油浓度一般15〜30%,太多不容易冻上，而且如有质粒也有可能丢(有质粒时甘油浓度尽量低一些)，。

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