免疫荧光技术的原理分类及应用ppt课件.ppt

2024/9/17免疫荧光技术的原理、分类与运用1;.免疫荧光技术根本原理 免疫荧光技术是将抗原抗体反响的特异性和敏感性与显微示踪的准确性相结合的一项技术 以荧光素作为标志物，与知的抗体或抗原结合、但不影响其免疫学特性然后将荧光素标志的抗体作为规范试剂，用于检测和鉴定未知的抗原 在荧光显微镜下，可以直接察看呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其存在的部位 在实践任务中，由于荧光素标志抗体检查抗原的方法较为常用，所以普统统称为荧光抗体技术2荧光的产生•物质吸收外界能量进入激发形状，再回到稳定基态时，多余的能量会以电磁辐射的方式释放，即发出荧光，这类物质被称为荧光素•由光激发所引起的荧光，为光致荧光 • ——荧光免疫技术• 由化学反响引起的荧光，为化学荧光• ——化学荧光技术3荧光素的荧光特性•停顿供能，荧光景象随即终止•对光的吸收和荧光的发射具有高度的选择性 发射光的波长>入射光波长•荧光效率： 发射荧光的光量子数• 荧光效率=• 吸收光的光量子数• 荧光淬灭景象：荧光素的辐射才干减弱4适宜荧光素的选择•具有与蛋白质构成共价键的化学基团•荧光效率高，标志后下降不明显•荧光与背景的色泽对比鲜明•标志后能坚持生物学活性和免疫活性•标志方法简单、快速、平安无毒5免疫荧光技术的主要优缺陷•优点：特异性强、敏感性高、速度快•缺陷：存在非特异性染色，结果断定的客观性缺乏，技术程序也较复杂6根据实验方法分类•直接法•间接法•补体法•其他7直接法•将荧光标志的特异性抗体〔抗原〕直接加在抗原〔抗体〕上，经一定的温度和时间染色，水洗-枯燥-封片-镜检•操作简便、特异性高、非特异性染色少•敏感性低抗原标志抗体荧光8间接法•先用知未标志的特异抗体〔一抗〕与抗原反响，再用标志的抗体〔二抗〕与其反响，构成抗原-抗体-抗体复合物，水洗-枯燥-封镜-镜检未知抗未知抗原原未标志未标志抗体抗体标志抗标志抗体体荧光荧光9补体法•利用补体反响，经过构成抗原-抗体-补体复合物发射荧光补体补体标志抗标志抗补体抗补体抗体体10其他免疫荧光技术•时间分辨荧光免疫分析•荧光偏振免疫分析技术11时间分辨荧光免疫测定 利器具有双功能基团构造的螯合剂，将镧系元素标志到抗体〔或抗原〕上，经免疫反响构成复合物，由于镧系元素能发出荧光，故分别除去未结合的成分后，利用时间分辨荧光仪即可测定荧光强度，从而推测待测物含量。

12时间分辨荧光测定的特点• 采用脉冲光源〔每秒闪烁1000次以上的疝灯〕，照射样品后即短暂的熄灭•以电子设备控制延缓时间，待非特异本底荧光衰退后，再测镧系荧光•镧系元素具有较长的荧光寿命，延缓丈量时间，能有效地消除非特异本底荧光(10ns)的干扰•镧系螯合物的的激发光与荧光发射峰之间的波长差别，有利于排除非特异性荧光干扰，提高检测特异性13荧光偏振免疫分析技术 利用荧光素经单一波长的偏振光照射后吸收光能，释放出相应的偏振荧光，荧光偏振程度与荧光分子大小成正比的关系而建立的免疫分析技术14谢谢谢谢！！15。