寄生虫诊断方法.docx

第六章 寄生虫病诊断寄生虫病应采取综合诊断，应根据临床症状、流行病学、病理变化、病原体检查等 综合进行第一节 病原学诊断方法 病原体检查是寄生虫病最可靠的诊断方法，无论是粪便中的虫卵，还是组织内不同 阶段的虫体，只要能够发现其一，便可确诊一、粪便虫卵检查法许多寄生虫，特别是寄生于消化道的虫体，其虫卵、卵囊或幼虫均可通过粪便排出 体外，通过检查粪便，可以确定是否感染寄生虫或确定寄生虫的感染强度1．直接涂片法 direct smear method 直接涂片法是取50%甘油水溶液或普通水1~2 滴滴于载玻片上，镊取黄豆大小的被 检粪块与之混匀，剔除粗粪渣，抹薄涂匀，盖上盖玻片镜检本法最为简便，但检出率 不高为提高阳性检出率，每个样本应检多片2．漂浮集卵法 flotation method 应用比重较虫卵大的漂浮液，使蠕虫卵、球虫卵囊等浮于液体表面，易于集中检查 漂浮集卵法对某些线虫卵、绦虫卵和原虫卵囊有很好的检出效果缺点是高比重的漂浮 液易使虫卵和卵囊变形，检查时必须迅速，也可在制片时补加一滴清水常用方法为饱和盐水漂浮法取5〜10g粪便置于200ml烧杯中，先加入少量饱和盐 水（1L水中加食盐400g）,搅拌混合后再加入约20倍的漂浮液，用金属筛或纱布滤去粪 渣，滤液静置30〜60min,用直径0.5〜1.0cm的金属圈蘸取表面液膜，抖落于载玻片上， 加盖片后镜检。

常用的饱和液还有次亚硫酸钠饱和液、硫酸镁饱和液、硝酸钠饱和液、硝酸铵液、 硝酸铅液等检查比重较大的虫卵，如棘头虫虫卵、猪肺丝虫虫卵及吸虫卵时，需用硫 酸镁、硫代硫酸钠以及硫酸锌等饱和溶液3．沉淀集卵法 sedimentation method 用水处理粪便，经离心或自然沉淀，使虫卵沉淀集中，更易于检查自然沉淀集卵法是取粪便5~10g加水混合成悬浮液，经40~60孔/2.54cm2铜筛滤去大 块物质，静置15min后倾去上清液，如此反复操作，直至上层液体透明为止,最后弃去上层 液体，置沉淀物于载玻片上，镜检虫卵离心沉淀法是取1~2g被检粪便于试管中，加5倍量的水制成悬浮液，经40孑L/cm2 铜筛过滤到一离心管中，以800rpm离心3~5min,弃上清，将沉渣置载玻片上，镜检虫卵本法也适用于检查尿液内的虫卵4．麦氏计数法 MacMaster method 是常用的虫卵计数方法之一通过虫卵计数，可以估计动物感染强度取粪样 2g 放入三角烧瓶内，加饱和盐水 58ml 和玻璃珠若干，充分震荡使成混悬液， 吸取混悬液注入麦氏计数室，置显微镜下计数计数室（lcm2 ）内虫卵数由于每室混悬 液等于0.15ml,结果乘以200，即为每克粪便虫卵数。

通常一次计数4室，然后按平均值计 本法只适用于可被饱和盐水漂起的各种虫卵麦氏计数室由二片载玻片制成为了使用方便，其中一片较另一片窄在较窄的玻 片上刻有lcm见方的划度2个，两载片间的距离为1.5mm这样，两个划度便形成了 2 个麦氏计数室5．毛蚴孵化法 hatching test 是诊断日本血吸虫及东毕吸虫的方法之一其依据是血吸虫卵内的毛蚴在适宜的的 条件下能很快孵出，并基本上按直线运动于水面下，利用这一特性检查毛蚴即可确诊取被检粪便30~100g（牛100g）经沉淀集卵法处理，将沉淀倒入500ml三角烧瓶内， 加温清水（自来水需脱氯处理）至瓶口，置22〜26oC孵化，第1、3、5h，用肉眼或放大 镜观察并记录一次如见水面下有白色点状物做直线来往运动，即是毛蚴，但需与水中 一些原虫如草履虫、轮虫等相区别必要时吸出在显微镜下观察气温高时，毛蚴孵出 迅速，因此，在沉淀处理时应严格掌握换水时间，以免换水时倾去毛蚴造成假阴性结果 也可用 1.0%〜1.2%食盐水冲洗粪便,以防止毛蚴过早孵出，但孵化时应用清水6．粪便培养与幼虫分离法 圆线虫目所属线虫种类很多，其虫卵在形态上非常相似，很难区别有时为了区别 这些线虫的种类，常将含有虫卵的粪便加以培养，待其中虫卵发育成为幼虫时，再检查 幼虫，根据幼虫形态上的差异，加以鉴别。

最常用的方法是在培养皿底部加草纸或滤纸一张，而后将欲培养的粪便加水调成硬 糊状，塑成半球形，放于皿内的纸上，并使半球形粪球的顶部略高出平皿边沿，使加盖 时与皿盖相接触将此皿置25°C温箱中，注意保持皿内湿度（应使底部的垫纸保持潮湿 状态）经7天后，多数虫卵即可发育成第三期幼虫，并集中于皿盖上的水滴中将幼虫 吸出置载玻片上，放显微镜下检查有些寄生虫（如网尾科线虫），其虫卵在新排出的粪便中已变为幼虫；类圆属线虫的 卵随粪便排出后，在外界温度较高时，经5〜12小时后，即孵出幼虫为了提高检出率， 常将幼虫从粪便中分离出来进行检查常用的方法为漏斗幼虫分离法 亦称贝尔曼法（Baermann's technique）取粪便15~20 克，放在漏斗内的金属筛上，漏斗下接一短橡皮管，管下再接一小试管装置如图图 贝尔曼幼虫分离装置将粪便放漏斗内铜筛上，不必捣碎，加入40°C温水到淹没粪球为止，静置1~3小时此时大部分幼虫游走沉于试管底部拔取底部小试管，取其沉渣，在显微镜下检查7．测微技术各种虫卵和幼虫，常有恒定的大小，测量虫卵或幼虫的大小，可作为确定某一虫卵 或幼虫的依据虫卵和幼虫的测量需用测微器测微器由目镜测微尺和镜台测微尺组成。

目镜测微尺是一个可放于目镜中隔环上的 圆形玻片，其上刻有50~100刻度的小尺使用时，将目镜的上端镜头旋开，将此测微尺 放于镜头内隔位上，再将镜头旋好，此时通过此镜头即可在视野内见到一清晰的刻度尺 此刻度并不具有绝对的长度意义，而必需通过镜台测微尺计算之镜台测微尺是一载玻 片，其中央封有一标准刻度尺，一般是将 1 毫米均分为 100 小格，亦即每小格的绝对长 度为 10 微米使用时放于显微镜载物台上，调节显微镜使用清楚地看到镜台测微尺上的 刻度，移动镜台测微尺，使与目镜测微尺重合，此时即可确定在固定的物镜、目镜和镜 筒长度的条件下，目镜测微尺每格所表示的长度其测算方法是：将目镜测微尺和镜台 测微尺的零点对齐，再寻找目镜测微尺和镜台测微尺上较远端的另一重合线，算出目镜 测微尺的若干格相当于镜台测微尺的若干格，从而计算出目镜测微尺上每格的长度例 如，在用 10 倍目镜、40 倍物镜、镜筒不抽出的情况下，目镜测微尺的 44 格相当于镜台 测微尺的15格（即150微米），即可算出目镜测微尺的每格长度为：150 u m/44=3.409 卩 m在测量具体虫卵时，可将镜台测微尺移去，只用目镜微尺量度。

如果得其虫卵的长 度为24格，则其具体长度为3.409umX24=81.816um,但应注意，以上算得的目镜测 微尺的换算长度只适用于一定的显微镜，一定的目镜、一定的物镜等条件更换其中任 一因素，其换算长度必需重新测算二、体表虫体检查法寄生于动物体表的寄生虫主要有蜱、螨、虱等对于它们的检查，可采用肉眼观察 和显微镜观察相结合的方法蜱寄生于动物体表，个体较大，通过肉眼观察即可发现 螨和虱有些个体较小，常需刮取皮屑，于微镜下寻找虫体或卵 刮取皮屑的方法甚为重要，应选择患病皮肤与健康皮肤交界处，这里的螨较多刮 取时先剪毛，取凸刃小刀，在酒精灯上消毒，使刀刃与皮肤表面垂直，刮取皮屑，直到 皮肤轻微出血（此点对检查寄生于皮内的疥螨尤为重要）在野外进行工作时，为了避免风将刮下的皮屑吹去，可根据所采用的检查方法的不 同，在刀上先蘸一些水或5%的甘油溶液，这样，可使皮屑粘附在刀上将刮下的皮屑集 中于培养皿或试管内，带回供检查蠕形螨病，可用力挤压病变部，挤出脓液，将脓液摊于载玻片上供检查将刮下的皮屑，放于载玻片上，滴加50%甘油溶液，覆以另一张载玻片搓压玻片 使病料散开，分开载玻片，置显微镜下检查为了在较多的病料中，检出其中较少的虫体，而提高检出率，可采用浓集法。

先取 较多的病料，置于试管中，加入10%氢氧化钠溶液浸泡过夜（如急待检查可在酒精上 煮数分钟），使皮屑溶解，虫体自皮屑中分离出来而后待其自然沉淀（或以每分钟 2,000 转的速度离心沉淀5 分钟），虫体即沉于管底，弃去上层液，吸取沉渣检查也可将病料浸入40〜45°C的温水里，置恒温箱中，1〜2小时后，将其倾入表面玻璃上， 解剖镜下检查活螨在温热的作用下，由皮屑内爬出，集结成团，沉于水底部还可将刮取到的干的病料，放于培养皿内，加盖将培养皿放于盛有40~45C温水的 杯上，经10〜15分钟后，将皿翻转，则虫体与少量皮屑粘附于皿底，大量皮屑则落于皿 盖上取皿底检查可以反复进行如上操作本法可在镜下收集到与皮屑分离的虫体， 供制作玻片标本用三、生殖道虫体检查寄生于生殖道的虫体主要有牛胎儿三毛滴虫和马媾疫锥虫牛胎儿毛滴虫存在于病母牛的阴道与子宫的分泌物、流产胎儿的羊水、羊膜或其第 四胃内容物中，也存在于公牛的包皮鞘内，应采取以上各处的病料寻找虫体由于虫体的检定，常以见到运动活泼的虫体为准，故在采集病料时必需尽可能地避 免污染，以免其它鞭毛虫混入病料造成误诊采集用的器皿和冲洗液等应加热使接近体 温，否则虫体骤然遇冷会失去活动力或死亡。

冲洗液应采用以玻璃蒸馏装置制备的蒸馏 水配制生理盐水，以保证冲洗液中不含金属离子，减少金属离子对虫体的影响病料采 集后应尽快地进行检查由母畜采集病料，是取阴道分泌的透明粘液，以直接自阴道内采取为良好，建议用 一根长45厘米，直径1.0厘米的玻璃管，在距一端的12厘米处，弯成150°角，而后消 毒备用使用时将管的“短臂”插入受检畜的阴道，另端接一橡皮管并抽吸，少量阴道 粘液即可吸入管内取出玻管，两端塞以棉球，带回实验室检查收集公牛包皮冲洗液，应先准备100~150毫升加温到30〜35C的生理盐水，用针筒注 入包皮腔用手指将包皮口捏紧，用另一手按摩包皮后部，而后放松手指，将液体收集 于广口瓶中待查流产胎儿，可取其第四胃内容物，胸水或腹水检查检查时应将收集到的病料，立即放于载玻片上，并防止材料干燥对浓稠的阴道粘 液，检查前最好以生理盐水稀释2~3 倍，羊水或包皮洗涤物最好先以每分钟2,000 转的速 度离心沉淀5 分钟，而后以沉淀物制片检查未染色的标本主要检查活动的虫体，在显 微镜下可见其长度略大于一般的白细胞，能清楚地见到波动膜，有时尚可见到鞭毛，在 虫体内部可见含有一个圆形或椭圆形的有强折光性的核。

波动膜的发现，常作为本虫与 其它一些非致病性鞭毛虫和纤毛虫在形态上相区别的依据也可将标本固定，用姬氏染 液或苏木素染色后检查马媾疫锥虫在末梢血液中很少出现，因此血液学检查在马媾疫诊断上的用处不大 检查材料主要应采取浮肿部皮肤或丘疹的抽出液，尿道及阴道的粘膜刮取物，特别在粘 膜刮取物中最易发现虫体采取病料时，浮肿液和皮肤丘疹液用消毒的注射器抽取，为了防止吸入血液发生凝 固，可于注射器内先吸入适量的2%柠檬酸钠生理盐水马阴道粘膜刮取物的采取，先用 阴道扩张器扩张阴道，再用长柄锐匙在其粘膜有炎症的部位刮取，刮时应稍用力，使刮 取物微带血液，则其中容易检到锥虫采取公马尿道刮取物时，应先将马保定，左手伸 入包皮内，以食指插入龟头窝中，徐徐用力以牵出阴茎，用消毒的长柄锐匙插入尿道内 刮取病料以上所采的病料，均可加适当量的生理盐水，置载玻片上，覆以盖玻片，制成压滴 标本检查；也可制成抹片，用姬氏液染色后检查也可用灭菌纱布，以生理盐水浸湿，用敷料钳夹持，插入公马尿道或母马阴道，擦 洗后，取出纱布，洗入无菌生理盐水中，将盐水离心沉淀，取沉淀物检查，方法同上四、血液和组织内虫体检查法能够出现于血液中的虫体为丝虫目一些线虫的幼虫和一些原虫。

它们的病料采集和 检查方法大体相似1．鲜血压滴标本检查 自。