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药物急性毒性实验.doc

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  • 上传时间:2021-12-26
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    • 实验一 药物急性半数致死量(LD50)的测定 【目的】 了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理,掌握半数致死量的测定方法和计算过程原理】 LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量由于实验动物的抽样误差,药物的致死量对数值大多在50%质反应的上下呈正态分布在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线,S型曲线的两端处较平,而在50%质反应处曲线斜率最大,因此这里的药物剂量稍有变动,则动物的死或活的反应出现明显差异,所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小实验材料】1、 动物:小白鼠,体重18-24g,雌、雄各半,实验前禁食12小时,不禁水2、 药品:盐酸普鲁卡因,苦味酸3、 器械:小鼠笼,天平,注射器(1mL),电子计算器方法和步骤】(一)预备实验1、探索剂量范围: 先找出100%及0%死亡的剂量,此即上下限剂量(Dm及Dn)方法是先取出小鼠9-12只,每组3只,按估计量(根据经验或文献资料定出)给药,如3只小鼠全死则降低剂量一半,如全不死则增加剂量一倍,如部分死亡,则按2:1的比例向上、向下调整剂量,由此找出上下限剂量2、确定组数,计算各组剂量:确定组数(G):可根据适宜的组距确定组数,一般分5-8个剂量组。

      计算各组剂量:要求各组剂量按等比级数排列,在找出Dm及Dn和确定组数后,可按下列公式求出公比r:(G-1) Dm/Dn r =再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm,其中D1=Dn=最小剂量,D2=D1r; D3=D2r; D4=D3r; D5=D4r; ……DG=DG-1rr值一般以1.7~1.15之间为宜计算举例:已知某药在致死毒性实验中,Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5,求r及各组剂量先代入公式求r=1.25,再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg, D2=76.81.25=96 mg/kg, 依次计算D3,D4,及DG(D5)分别为120,150,187.5 mg/kg3、配制等比稀释药液系列,使每只小鼠给药容量相等,一般为0.1-0.25 mL/10g母液浓度C= Dm/等容注射量,如某药的Dm=187.5 mg/kg,等容注射量为0.2 mL/10g,则母液浓度C=187.5(mg/kg)/0.2(mL/10g)=0.94%按此配制母液25mL放入5号小烧杯,即为5号液;从中吸出20 mL 放入4号小烧杯,加水至25mL,即为4号液;再吸出20mL 4号液放入3号杯中,加水至25mL,即为3号液,如此类推,配制出2号液和1号液。

      二)正式实验1、分组编号:称各小鼠体重,将体重相同小鼠放一笼,分别用苦味酸做好标记再按确定组数(5组)分层随机分组,使各组平均体重及性别分布尽可能一致,每组一般用小鼠10只(5只雄性,5只雌性)1、给药:先计算各体重组小鼠腹腔等容注射药量(0.2mL/10g),取相应的等比稀释药液,给各组小鼠腹腔注射给药顺序:如分为5组,先按2、3、4组顺序给药,再根据实验结果决定是向下或向上注射2、观察记录:给药后观察小鼠中毒表现,记录小鼠死亡数,计算每组死亡率观察时间可根据药物作用快慢而定,应到小鼠不再因药物作用死亡为止一般观察时间为24小时,作用快者可观察10—30分钟本次实验观察时间为30分钟,记录每组剂量和动物死亡数计算LD50及95%可信限】1、 孙氏改进寇氏法(1) 基本要求1) 反应情况符合活接近对数正态分布2) 相邻两剂量的比值应相等3) 各组动物数相等或相近,一般为10只4) 不要求死亡率必须包括0%与100%,但二者之和最好在80%-120%范围内2) 计算公式1)当最小剂量组的死亡率为0%,最大剂量组的死亡率为100%时,按下列公式计算:式中Xm―最大剂量的对数; p―各组动物的死亡率(以小数表示) ∑p―各组动物死亡率的总和(p1+p2+p3……) I―相邻两组对数剂量的差值(大剂量组减小剂量组)。

      2)当最小剂量组的死亡率大于0%而又小于30%,或最大剂量组的死亡率小于100%而又大于70%时,可按下列校正公式计算: 式中Pm―最大剂量组的死亡率; Pn―最小剂量组的死亡率 3)LD50的标准误按下列计算: 式中 n―每组的动物数 4)LD50的95%可信区间按下式计算:Lg-1(lgLD501.96SlgLD50)2、应用计算软件:点击桌面“LD50”进入计算软件,将各组剂量和死亡数填入,然后点击“运行”,即可算出LD50及95%可信限注意事项】1、本实验为定量药物效价测定,要求较高的准确性,在实验过程中要求实验者做到准确无误2、动物种类、体重范围、给药途径、实验观察时间等因素对LD50及ED50的测定结果都有影响,在报告结果时都应加以注明3、公比的表示法有2种:(1) r=D2/D1; (2) K=D1/D2二者的关系为r=1/K,D2=D1 r 或D2=D1/K如r=1.25则K=1/1.25=0.8 实验二 最大耐受量(MTD)测定【目的】 了解最大耐受量的概念,掌握其测定方法 【原理】最大耐受量(MTD)是指动物能够耐受而不引起动物产生死亡的最高剂量。

      当某些药物用最大允许浓度和最大允许容量给予动物时仍未能测出LD50,可以做一次或一日最大耐受量测定,也可反映受试药的毒性情况实验材料】1器材 小鼠灌胃针头,烧杯,天平2药物 某种中药浸膏3动物 小鼠(202g,雌雄各半)方法和步骤】取禁食12~16h的小鼠20只,雌雄各半,按药物最大允许浓度和小鼠最大允许容量给小鼠灌胃给药1次,连续观察7天,记录小鼠给药后外观、行为、饮食、分泌物、排泄物等的变化 【结果与处理】若7天内未见任何动物死亡,则MTD可写成大于g/kg剂量注意事项】小鼠灌胃最大给药剂量为0.4mL/10g,最多不超过1.0mL/只,给药浓度根据药物的理化性质,以能顺利通过灌胃器针头为度当注射给药尤其是静脉注射时,一般还要求pH和渗透压在可忍受范围之内,注射速度控制在10~20s 。

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