栽培与野生化血丹不同部位中两种化学成分含量分析.docx

栽培与野生化血丹不同部位中两种化学成分含量分析 张传利 马晓 朱春梅 陈治华 李维峰 赵秀 何素明 杜华波摘 要： 为探讨并分析栽培与野生化血丹植株中不同部位中兩种化学成分的含量差异，该研究采用超声法提取、高效液相色谱法（HPLC）测定栽培与野生化血丹根、茎、叶、花、混合样等部位中桃叶珊瑚苷和梓醇的含量，并进行比较结果表明：（1）桃叶珊瑚苷在栽培与野生化血丹植株内均有分布，含量均以根中最高，其在栽培与野生化血丹植株内的含量表现分别为根>叶>混合样>茎>花、根>混合样>茎>花>叶，栽培化血丹不同部位中桃叶珊瑚苷的含量均高于野生化血丹2）梓醇在栽培化血丹的茎中未检出，在栽培与野生化血丹其他部位均有分布，含量均以叶中最高，其在栽培与野生化血丹植株内的含量分别表现为叶>花>混合样>根、叶>混合样>茎>花>根，野生化血丹不同部位中梓醇的含量均高于栽培化血丹3）桃叶珊瑚苷和梓醇在栽培和野生化血丹植株不同部位中的含量均存在显著差异（P<0.05），栽培与野生同一部位间总体上无显著差异，为该濒危药用植物资源药用部位选择和合理开发利用提供实验参考关键词： 化血丹， 桃叶珊瑚苷， 梓醇， 高效液相色谱法（HPLC）， 不同部位， 分析比较： Q946： A： 1000-3142（2020）05-0673-07Content analysis of two chemical compositions in different parts of cultivated and wild Centranthera grandifloraZHANG Chuanli， MA Xiao， ZHU Chunmei， CHEN Zhihua， LI Weifeng， ZHAO Xiu， HE Suming， DU Huabo*（ College of Tropical Crops of Yunnan Agricultural University， Puer 665099， Yunnan， China ）Abstract： To study and analysis the difference contents of two active ingredients in different parts of cultivated and wild Centranthera grandiflora， the contents of aucubin and catalpol in roots， stems， leaves， flowers and mixed samples of cultivated and wild C. grandiflora were determined by ultrasonic extraction and high performance liquid chromatography （HPLC） and compared. The results were as follows： （1） Aucubin was distributed in both cultivated and wild plants， with the highest contents in roots. The contents in cultivated and wild C. grandiflora were root > leaf > mixed sample > stem > flower， root > mixed sample > stem > flower > leaf， respectively. The content of aucubin in different parts of cultivated plants was higher than that in wild plants. （2） Catalpol was not detected in the stem of cultivated C. grandiflora， but was distributed in other parts of cultivated and wild C. grandiflora， with the highest content in leaves. The contents of catalpol in cultivated and wild C. grandiflora were leaf > flower > mixed sample > root， leaf > mixed sample > stem > flower > roots， respectively. The contents of catalpol in different parts of wild were higher than those of cultivated C. grandiflora. （3） There were significant differences （PKey words： Centranthera grandiflora， aucubin， catalpol， high performance liquid chromatography （HPLC）， different parts， analysis comparison化血丹（Centranthera grandiflora）為玄参科（Scrophulariaceae）胡麻草属 （Centranthera）一年生或越年生草本植物大花胡麻草的根，主要产于广西、云南、贵州等地，是一味濒危且种群极小的民族民间常用中草药（中华本草编辑委员会， 1991; 中国科学院中国植物志编辑委员会， 2013），在抗菌、抗癌、凝血、缺血、治疗心血管疾病、白血病、降压、降糖、保肝等方面疗效显著（王真等， 2012; 廖立平等， 2012;杨抒雨等， 2017）。

目前国内外对化血丹的研究主要集中在对化血丹根中化学成分分离鉴定、成分的功效等方面（梁钜忠等， 1984; 廖立平， 2014; 胡琼， 2016）;结果表明，化血丹根内含有甘露醇、类胡萝卜酸物质杜鹃红素、环烯醚萜苷类、黑蒴苷类、苯乙醇苷类、紫罗兰酮苷类等多类丰富的生物活性物质，其中桃叶珊瑚苷和梓醇是其中2种重要的环烯醚萜苷化学成分桃叶珊瑚苷具有清湿热、利小便、降压、镇痛、保肝护肝、抗肿瘤等功效（薛宏宇等， 2013; 廖立平， 2014; 韩曼飞等， 2017），梓醇具有利尿、抗炎、降血糖抗癌、神经保护及抗肝炎病毒等功效（Ismailoglu et al.， 2002; Jiang et al.， 2004; Tong et al.， 2015; 王静欢等， 2015， 2017; Xia et al.， 2017）;而对根部所含化学成分的定量分析及其他部位间含量比较未见报道化血丹作为云南等产地少数民族民间抗癌、保肝、溶血栓道地药材，以根泡酒作为偏方药，以根用药是否合理，根以外其他部位是否有药用价值均有待研究近年来由于桃叶珊瑚苷和梓醇等化学成分药用价值的研究开发，目前以桃叶珊瑚苷为主要成分的杜仲平压片和以梓醇为成分已审报两个一类新药临床研究（薛宏宇等， 2013; Liu & Ling， 2004;王静欢等， 2015），市场需求量急剧增加，加之化血丹长期以来全部依赖于野生资源和其自然繁殖率等因素，野生资源已面临濒危，而驯化栽培的化血丹的质量是否能达到野生标准也有待研究。

基于此，本研究对栽培与野生化血丹不同部位中2种化学成分含量进行测定及分析比较，旨在为其药用部位选择和栽培植株质量控制及开发利用提供一定的理论依据1 材料与方法1.1 材料野生与栽培化血丹新鲜样品均采自于云南省红河州屏边县同一生长区域，经普洱市民族医药研究所张绍云主任药师鉴定为玄参科胡麻草属植物大花胡麻草（Centranthera grandiflora）的根、茎、叶、花，野生与栽培化血丹均引种栽培保存于云南农业大学热带作物学院药用植物资源圃内栽培与野生化血丹全株在同一条件下自然风干后，均置于55 ℃真空干燥至恒重，按根、茎、叶、花等部位分别粉碎过4号筛备用，并将过筛后的根、茎、叶按质量比1∶1∶1制成混合样备用1.2 仪器安捷伦1200高效液相仪（安捷伦科技有限公司）;SK5200H型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）;CN61M/DZF真空干燥箱（上海奥豪斯贸易有限公司）;ME204E电子分析天平（上海奥豪斯贸易有限公司）;纯水/ 超纯水系统（韩国HUMAN PowerI）1.3 试剂对照品：桃叶珊瑚苷（纯度≥98%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批号为C1603095）;梓醇（纯度≥97%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批号为L1210052）;乙腈（色谱纯，德国 MERCK）、甲醇（色谱纯，德国MERCK）、磷酸（分析纯），均购自国药集团化学试剂有限公司。

1.4 HPLC分析条件以《中华人民共和国药典》（2015年版，一部）（国家药典委员会， 2015）、马运明等（2011）的测定生地黄中梓醇和桃叶珊瑚苷的高效液相色谱法为参照，对其提取方法和流动相条件进行优化桃叶珊瑚苷、梓醇测定色谱柱分别为Agilent TC-C18柱（250 mm 4.6 mm，5 μm）、SPHERI-5RP-18柱（250 mm 4.6 mm，5 μm）;流动相分别为乙晴-水（3∶97）、甲醇-0.1%磷酸水（1∶99）;检测波长分别为205、210 nm;流速均为1 mLmin-1;进样量均为20 μL;柱温分别为25、35 ℃;理论塔板数分别不少于5 000、9 0001.5 测定方法1.5.1 对照品溶液的制备 分别取桃叶珊瑚苷、梓醇对照品适量，精密称定，加各自流动相溶解，配制成0.108 mgmL-1的桃叶珊瑚苷对照品溶液和0.123 mgmL-1梓醇对照品溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得1.5.2 供试品溶液的制备 分别精密称量栽培与野生化血丹根、茎、叶、花等部位样品和混合样粉末0.50 g置于具塞锥形瓶中，精密加入40%甲醇5 mL，摇匀并称定质量，超声处理（功率250 W，频率35 KHZ）30 min，静置5 min，用40%甲醇补足减失的质量，吸取溶液，用0.45 μm的微孔滤膜滤过（崔红梅等， 2015），即得。

1.5.3 线性关系考察 按“1.5.1”项下配制桃叶珊瑚苷对照品溶液：0.003 6、0.036、0.072、0.108、0.144、0.180 mgmL-1;配制梓醇对照品溶液：0.061 5、0.092 25、0.123、0.153 75、0.184 5、0.553 5 mgmL-1;在“1.4”项色谱条件下进样，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，进行线性回归（李艳玲等， 2015; 杨海玲等， 2018），得桃叶珊瑚苷、梓醇回归方程分别为Y=16 899 435.83X+1 357.34（r=0.999 9）、Y=7 097 432.35X+3 001.31（r=0.999 9）结果表明，分别在3.6～180.0 μgmL-1、61.5～553.5 μgmL-1浓度范围内线性关系良好对照品及样品HPLC色谱图见图11.5.4 精密度试验 精密吸取“1.5.1”对照品溶液20 μL，分别在“1.4”项色谱条件下，连续进样6次，测峰面积得桃叶珊瑚苷、梓醇峰面积RSD分别为0.65%、0.69%，表明该方法具有良好精密度1.5.5 重复性试验 取栽培与野生化血丹各部位和混合样粉末各6份，每份约0.50 g，精密称定，在“1.5.2”项下配制后依次进样，在“1.4”项下测定。