吖啶橙荧光染色法.docx

口丫咤橙荧光染色法【实验原理】口丫咤橙(acridine orange, AO)是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的 DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光 其激发峰为492nm,荧光发射峰为530nm (DNA)、640 ( RNA ),它与双链DNA 的结合方式是嵌入双链之间，而与单链 DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上在蓝光( 502nm)激发下，细胞核发亮绿色荧光(约 530nm),核仁和胞质RNA发橘红色荧光(>580nm)口丫咤橙的阳离子 也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示 DNA、RNA两种核酸实验用品】1、 器材荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸2、 试剂(1) 0.1mol/l pH7.0 PBS 液A 液：NaH2PO4・H2O 2.76g,加蒸储水至 100ml;B 液：Na2HPO4 . 7H2O 5.36g ,加蒸储水至 100ml;取A液16.5ml+B液33.5ml+NaCl 8.5g ,用蒸储水稀释至 100ml2) 1%口丫咤橙原液取0.1g 口丫咤橙加蒸储水稀释至 100ml (临用时配制0.01%口丫咤橙染液：将1%口丫咤橙原液用pH7.0 PBS溶液 稀释10倍)。

3、 材料口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌 BEL-7402细胞爬片1)取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上2) 95%乙醇溶液固定5min3)滴加0.01%口丫咤橙染液5min4)盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察结果与观察】荧光显微镜下(选用蓝色激发滤片)，可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光，含 RNA的细胞质及核仁显 示橘红色荧光体外培养的肝癌细胞口丫咤橙荧光染色【注意事项】(1)制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落2)每种荧光染料，均有自己的最适 pH,此时荧光最强当 pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的 pH缓冲液中进行。