实验常用试剂、缓冲液,培养基地配制方法-孤岛颠人收藏.doc

word生物实验常用试剂、缓冲液，培养基的配制方法孤岛颠人收藏 / 1、1M Tris-HCl     ★组份浓度 1 M Tris-HCl 〔pH 7.4，7.6，8.0〕★配制量 1L ★配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中 2. 参加约800mL的去离子水，充分搅拌溶解3. 按下表量参加浓盐酸调节所需要的pH值       pH值                      浓HCl                              约70mL                         约60mL                          约42mL 4. 将溶解定容至1L 5. 高温高压灭菌后，室温保存                           注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位 2、1.5 M Tris-HCl  ★组份浓度 1.5 M Tris-HCl     〔pH8.8〕 ★配制量 1L ★配置方法 称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 参加约800mL的去离子水，充分搅拌溶解 3. 用浓盐酸调pH值至8.8 4. 将溶液定容至1L 5. 高温高压灭菌后，室温保存 ★注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位 3、10×TE Buffer       ★组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 〔pH 7.4，7.6，8.0〕★配制量 1L ★配置方法1. 量取如下溶液，置于1L烧杯中 1 M Tris-HCl Buffer〔pH7.4，7.6，8.0〕 100mL                              500 mM EDTA〔pH8.0〕 20mL 2. 向烧杯中参加约800mL的去离子水，均匀混合 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌 4. 室温保存 4、3 M 醋酸钠    ★组份浓度 3 M 醋酸钠     〔pH5.2〕★配制量 100mL ★配置方法•3H2O置于100～200mL烧杯中，参加约40mL的去离子水搅拌溶解 参加冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 参加去离子水将溶液定容至100mL 4. 高温高压灭菌后，室温保存 5、 Buffer       ★组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 ★配制量 1L ★配置方法 称量如下试剂，置于1L烧杯中                                                       NaCl                      8 g                                                       KCl                      0.2g                                                       Na2HPO4           1.42 g                                                       KH2PO4             0.27g 2. 向烧杯中参加约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后参加去离子水将溶液定容至1L。

 4. 高温高压灭菌后，室温保存 ★注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2 6、10 M醋酸铵        ★组份浓度 10 M醋酸铵                                ★配制量 100mL ★配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，参加约30 mL的去离子水搅拌溶解 2.加去离子水将溶液定容至100mL 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌 4.密封瓶口于室温保存  ★注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌 7、Tris- HCl平衡苯酚   ★配置方法 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应防止使用同时也应防止使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进展重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进展分子生物学实验         操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套与防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进展，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进展平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解 ② 参加羟基喹啉〔8-Quinolinol〕至终浓度0.1％该化合物是一种复原剂、RNA酶的不完全抑制剂与金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色有助于方便识别有机相 ③ 参加等体积的1M Tris-HCl〔pH8.0〕，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相  ④ 重复操作步骤③ ⑤ 参加等体积的0.1M Tris-HCl〔pH8.0〕，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相  ⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留局部上层水相 ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8 ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存 8、苯酚/氯仿/异戊醇 ★配置方法 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇〔25：24：1〕。

氯仿可使蛋白〔25 ：24 ：1〕 质变性并有助于液相与有机相的别离，而异戊醇如此有助于消除抽提过程中出现的气泡  2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇〔24：1〕均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存 9、10％〔W/V〕SDS ★组份浓度 10％〔W/V〕SDS ★配制量 100mL ★配置方法称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，参加约80mL的去离子水，68℃加热溶解 2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2 3. 将溶液定容至100mL后，室温保存 10、2 N NaOH          ★组份浓度 2N NaOH ★配制量 100mL ★配置方法 量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中〔NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂〕  2. 称取8g NaOH小心地逐渐参加到烧杯中，边加边搅拌 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存11、2.5 N HCl         ★组份浓度 2.5 N HCl ★配制量 100mL ★配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中参加21.6mL的浓盐酸〔11.6N〕，均匀混合。

2. 室温保存 12、5 M NaCl        ★组份浓度 5 M NaCl ★配制量 1L ★配置方法 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，参加约800mL的去离子水后搅拌溶解 2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份 3. 高温高压灭菌后，4℃保存 13、20％〔W/V〕Glucose     ★组份浓度 20％〔W/V〕Glucose ★配制量 100mL ★配置方法 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，参加约80mL的去离子水后，搅拌溶解 加去离子水将溶液定容至100mL 高温高压灭菌后，4℃保存 14、Solution I  〔质粒提取用〕      ★组份浓度 25 mM Tris-HCl〔pH8.0〕，10mM EDTA，50mM Glucose ★配制量 1L ★配置方法 量取如下溶液，置于1L烧杯中 1M Tris-HCl〔pH8.0〕             25mL                            0.5 M EDTA〔pH8.0〕            20mL                            20％Glucose〔1.11M〕           45mL                               dH2O                                    910mL 2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 mL的Soliution I中参加2mL的RNase A〔20mg/mL〕 15、Solution II  〔质粒提取用〕   ★组份浓度 250mM NaOH，1％〔W/V〕SDS m ★配制量 500mL ★配置方法 1.量取如下溶液置于500mL烧杯中                                                         10％SDS                        50mL                                                          2N NaOH                       50mL 2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀 3. 室温保存此溶液保存时间最好不要超过一个月 ★注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌 16、Solution III 〔质粒提取用〕★组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH ★配制量 500mL ★配置方法 1. 量取如下溶液置于500mL烧杯中                                                         KOAc                            147g                                                         CH3COOH                    57.5mL 2. 参加300mL去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500mL 4. 高温高压灭菌后，4℃保存 17、0.5M EDTA            ★组份浓度 0.5 M EDTA   (pH8.0)      ★配制量 1L ★配置方法 1.称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中            2.参加约800mL的去离子水，充分搅拌 3. 用NaOH调节pH值值8.。