《网织红细胞计数》课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,,精选PPT,*,实验三,网织红细胞计数,一、实验原理,,网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的,RNA,物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后,RNA,中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构，可在显微镜下识别计数,1000,个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比，或,×,红细胞计数结果报告其绝对值1,精选PPT,实验三　网织红细胞计数一、实验原理1精选PPT,网织红细胞（,Ret,）,,是,晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是,尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的,RNA,物质嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名分型：丝球型、网型、破网型、点粒型Ⅰ,、,Ⅱ,、,Ⅲ,、,Ⅳ,型）,,2,精选PPT,网织红细胞（Ret）　　 是晚幼红细胞脱核后到成熟,网织红细胞,,,3,精选PPT,网织红细胞3精选PPT,计数方法,1,、普通光学显微镜法：活体染色后推片镜检,,2,、网织细胞计数仪法：荧光染色后用流式细胞术计数,,,4,精选PPT,计数方法1、普通光学显微镜法：活体染色后推片镜检4精选PPT,二、试剂器材,1、试剂 10,g/L,煌焦油蓝酒精（水）溶液,2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、,Miller,窥盘,或直径约20,mm（,较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正中央开一边长为3,mm,的菱形或正方形小孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）,,5,精选PPT,二、试剂器材1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液,三、操作步骤,1.,染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合（玻片法）；试管法取染液,2,滴入试管，加血,2,滴混匀，封闭好，待,15,分钟以上时间，,2.,推片：取混合液,1,小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜，,3. 低倍镜浏览，选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜，在,Miller,窥盘下计数小方格中的,RBC,数和大方格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的,RBC,总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视野,RBC,总数,>1000,为止）。

6,精选PPT,三、操作步骤1. 染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴,,,,Miller,窥盘,,,,,,,,A,3,,1,B,将,Miller,窥盘放在显微镜目镜中,,,通过窥盘中大小方格间的,9,比,1,比例关系计算,RBC,数和,Ret,数7,精选PPT,Miller窥盘A31B将Miller窥盘放在显微,,8,精选PPT,8精选PPT,四、计算,,1.,Miller,窥盘法：网织红细胞（,Retic）,百分率(%)= （大方格内,Retic,总数）/（小方格内,RBC,总数×9）×100%,2.,直接计数法：网织红细胞（,Retic）,百分率(%)= 多个视野内,Retic,总数,/,多个视野内,RBC,总数×100%,,9,精选PPT,四、计算 1.Miller窥盘法：网织红细胞（Retic）百,五、注意事项,1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动，使染料和血液混合，防止凝固2.,染色时间一定要充足，混合后不能立即推片，室温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻片防止蒸发3.,染液与血液比例以1：1为宜，贫血适当加血量4.,涂片厚薄均匀适宜，弓形移动，多个区域计数,5.,试剂应定期重配，以免变质沉淀。

6.,与变性珠蛋白小体鉴别,,,10,精选PPT,五、注意事项1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后，,六、参考值,成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）,新生儿：0.0,2-0.06,（,2%-6%,）,儿童：0.0,05-0.075,（,0.5%-7.5%,）,成人绝对值,（,24-84,）,10,9,/L,,,11,精选PPT,六、参考值成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）,七、临床意义,,（,1,）评价骨髓增生能力，判断贫血类型,,再障,时，明显降低绝对值低于,5×10,9,/L,可做为急性再障的辅助诊断指标失血、多数,溶血性贫血,患者网织红细胞可明显高于正常营养不良性贫血,在治疗前网织红细胞可保持正常、轻度升高或降低12,精选PPT,七、临床意义　（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 12精,,（,2,）评价疗效,,网织红细胞反应：,IDA,或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素,B,12,或叶酸治疗,2,~,3d,后，网织红细胞计数值开始上升，,7,~,10d,达到最高,(10%,左右,),；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。

骨髓移植、,EPO,治疗后：,若骨髓开始恢复造血功能，,RMI,升高，网织红细胞计数值上升13,精选PPT,（2）评价疗效13精选PPT,（,3,）放、化疗监测,,机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期,HFR,和,MFR,降低，然后才检测到网织红细胞的降低而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升可指导临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制14,精选PPT,（3）放、化疗监测 14精选PPT,RPI=,病人网织红细胞（,%,）,/2 *,病人,HCT/,正常人,HCT,（男,0.45,，女,0.40,）,临床应用：,＞,3,提示溶血性贫血或急性失血性贫血；,,网织红生成指数,（,Reticulocyte production index,RPI,）,,15,精选PPT,RPI=病人网织红细胞（%）/2 * 病人HCT/正常人HC,八、思考题,一溶血性贫血患者，红细胞计数2.6,x10,12,/L，,血细胞比容0.29，网织红细胞计数相对值为35%，如何报告网织红细胞检测结果？,,16,精选PPT,八、思考题 一溶血性贫血患者，红细胞计数2.6x1012,,外周血网织红细胞计数（百分数和绝对值）是一反映骨髓红系增生活性的常用指标。

许多学者先后提出应用,FCM,和不同的,RNA,特异性荧光染料自动计数网织红细胞的方法，如派若宁,Y,、,AO,、溴化乙啶、,thiazole  orange,等    目前最普遍应用的是,thiazoie,,orange,染色法，这种特异性,RNA,的激发波（,488nm,）测量的特点，与人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数和绝对值，而且还能获得网织红细胞成熟指数（,RMI,）RMI,是一个检测骨髓功能的独立实验室指标，它与网织红细胞内,RNA,含量成正比，,RMI,可成功地用于评价骨髓移植的效果17,精选PPT,外周血网织红细胞计数（百分数和绝对值）是一反映骨髓红系增生活,,目前，FCM检测网织红细胞主要用于      1）预测骨髓移植的效果；      2）解释各种红系增长低下性贫血的发病原因;      3）评价某些新的重组生物制剂的治疗效果18,精选PPT,目前，FCM检测网织红细胞主要用于      1）预测骨髓,。