第3章核酸的化学ppt课件.ppt

第三章 核酸的化学【学【学习目的】掌握核酸的概念、分目的】掌握核酸的概念、分类、、分子分子组成与分子构造，了解核酸的理成与分子构造，了解核酸的理化性化性质，了解核苷酸衍生物的，了解核苷酸衍生物的组成及成及功能，了解核酸功能，了解核酸类物物质的制的制备及含量及含量测定方法重点【重点难点】核酸的分点】核酸的分类、功能及分、功能及分子子组成；成；DNADNA的双螺旋构造特点；的双螺旋构造特点；tRNAtRNA的三叶草型构造特点的三叶草型构造特点 1 核酸分子的化学组成核酸分子的化学组成2 核酸的构造核酸的构造3核酸的理化性质核酸的理化性质4核酸类药物的工业消费核酸类药物的工业消费 学学 习 内内 容容 1868 1868年，年，F. MiescherF. Miescher从从脓细脓细胞核中分胞核中分别别得到得到一种酸性物一种酸性物质质，即如今被称，即如今被称为为核酸的物核酸的物质质 1953 1953年，年，WatsonWatson和和CrickCrick提出提出DNADNA双螺旋构双螺旋构造模型，随后又提出造模型，随后又提出遗传遗传信息信息传传送中心法那送中心法那么。

么 1944 1944年，年，O. AveryO. Avery等等经过转经过转化化实验证实验证明核明核酸是酸是遗传遗传物物质质重要事件 1961 1961年，年，NirenbergNirenberg等破等破译译了苯丙氨酸了苯丙氨酸遗传遗传密密码码19651965年，科学家年，科学家们们破破译译了全部密了全部密码码 1973 1973年，年，CohenCohen建立体外重建立体外重组组DNADNA方法，方法，生物工程技生物工程技术诞术诞生认知核酸核酸〔核酸〔核酸〔核酸〔Nucleic acidNucleic acid〕是由核苷酸聚合而成的重〕是由核苷酸聚合而成的重〕是由核苷酸聚合而成的重〕是由核苷酸聚合而成的重要生物信息大分子，又称要生物信息大分子，又称要生物信息大分子，又称要生物信息大分子，又称 多聚核苷酸多聚核苷酸多聚核苷酸多聚核苷酸 —— ——遗传信息的信息的储存和存和传送送 Deoxyribonucleic Acid Deoxyribonucleic Acid —— ——信息的信息的传送和送和转录，直接参与蛋白，直接参与蛋白质合成合成 Ribonucleic Acid Ribonucleic Acid核酸分核酸分核酸分核酸分类类：：：： 脱氧核糖核酸〔脱氧核糖核酸〔脱氧核糖核酸〔脱氧核糖核酸〔DNADNA〕〕〕〕 核糖核酸〔核糖核酸〔核糖核酸〔核糖核酸〔RNARNA〕〕〕〕 核酸分布：核酸分布： DNA98％以上分布于％以上分布于细胞核，少量在胞核，少量粒体、粒体、叶叶绿体中体中 RNA90％分布于％分布于细胞液，胞液，10％在％在细胞核内。

胞核内一、元素一、元素组成成第第1 1节节 核酸分子的化学组成核酸分子的化学组成根本元素：根本元素：C、、H、、O、、N、、P等等 元素元素组成特点：成特点： ①① 普通不含普通不含S元素元素 ②② P含量含量较多且比多且比较恒定〔恒定〔9%～～10%〕〕 常用定磷法常用定磷法进展核酸的定量分析展核酸的定量分析 〔〔DNA 9.9% 、、RNA 9.5%〕〕二、核酸分子的根本构造单位-核苷酸〔一〕核酸的消化与吸收 〔二〕核酸的根本成分碱碱 基基RNARNA尿尿尿尿嘧啶嘧啶 U U胸腺胸腺胸腺胸腺嘧啶嘧啶 T T胞胞胞胞嘧啶嘧啶 C C鸟嘌鸟嘌呤呤呤呤 G G腺腺腺腺嘌嘌呤呤呤呤 A ADNADNA嘌呤呤——次黄次黄嘌呤、呤、1-甲基次黄甲基次黄嘌呤、呤、7-甲基甲基鸟嘌呤、呤、6-甲基腺甲基腺嘌呤等呤等嘧啶——5-甲基胞甲基胞嘧啶、、5-羟甲基胞甲基胞嘧啶、二、二氢尿尿嘧啶、、4-巯尿尿嘧啶等等均均为根本碱基的化学修根本碱基的化学修饰型稀有碱基戊戊 糖糖DNARNA磷磷 酸酸 核酸是含磷的生物大分子任何核酸中都含有磷酸，所以核酸呈酸性。

核酸中的磷酸参与构成3’，5’-磷酸二酯键，使核苷酸衔接成多核苷酸链核酸 嘌呤碱 嘧啶碱戊糖 磷酸DNA A、G C、TR PRNA A、GC、UdR P 根本成分〔三〕核苷酸的组成磷酸碱基戊糖核核 苷苷 戊糖与嘌呤或嘧啶碱以C-N糖苷键衔接而构成的糖苷就称为核苷〔nucleoside〕通常是戊糖的C1’与嘌呤碱的N9或嘧啶碱的N1相连核核 苷苷 酸酸 核苷或脱氧核苷与磷酸经过酯键相衔接分别构成核苷酸〔NMP〕或脱氧核苷酸〔dNMP〕戊糖上的羟基都可以酯化，通常以戊糖C5′-OH与磷酸基团酯化构成的5′－核苷酸为主可根据核苷称号命名为“某某核苷几磷酸〞 RNADNA 腺苷酸（AMP）脱氧腺苷酸（dAMP）鸟苷酸（GMP）脱氧鸟苷酸（dGMP）胞苷酸（CMP） 脱氧胞苷酸（dCMP）尿苷酸（UMP） 脱氧胸苷酸（dTMP）核酸的根本构造单位三、核苷酸的衍生物ATP是生物体内能量的通用货币多多 磷磷 酸酸 核核 苷苷 酸酸OHOHOHONNH2NO O O - P - OCMPCDP O O - P - OCTP O O - P - O环环 化化 核核 苷苷 酸酸第二信使在代谢调理中起重要作用。

辅辅 酶酶 类类 核核 苷苷 酸酸辅酶Ⅰ〔NAD+〕辅酶Ⅱ〔NADP+ 〕FMNFAD辅酶A (CoA-SH)腺嘌呤核苷酸＋尼克酰胺核苷酸黄素单核苷酸＋腺嘌呤核苷酸3’－腺苷酸＋5 ’－焦磷酸＋氨基乙硫醇＋泛酸参与糖、脂肪、参与糖、脂肪、蛋白蛋白质代代谢参与生物氧化过程参与生物氧化过程一、核酸的一级构造 第第2 2节节 核酸的构造核酸的构造 一个核苷酸分子一个核苷酸分子C3’-OH 与另一核苷酸分子的与另一核苷酸分子的5’-磷酸基磷酸基团脱水脱水缩合构成的磷酸二合构成的磷酸二酯键称称为3′,5′-磷酸二磷酸二酯键核酸分子中的核苷酸序列或碱基序列称核酸的一核酸分子中的核苷酸序列或碱基序列称核酸的一级构造构造 5’5’3’3’+l l主主主主键为键为3ˊ, 5ˊ-3ˊ, 5ˊ-3ˊ, 5ˊ-3ˊ, 5ˊ-磷酸二磷酸二磷酸二磷酸二酯键酯键 l l主主主主链为链为反复的构造反复的构造反复的构造反复的构造单单元〔磷酸元〔磷酸元〔磷酸元〔磷酸————戊糖〕戊糖〕戊糖〕戊糖〕l l侧链为侧链为特征构造特征构造特征构造特征构造————碱基碱基碱基碱基 l l具有具有具有具有严厉严厉的方向性：的方向性：的方向性：的方向性：5ˊ→3ˊ 5ˊ→3ˊ 5ˊ→3ˊ 5ˊ→3ˊ 多核苷酸链构造特点 多核苷酸多核苷酸链是五十个以上的核苷酸分子是五十个以上的核苷酸分子经过3′,5′-磷酸二磷酸二酯键相相连而成的而成的链状聚合物。

状聚合物 戊糖戊糖C5′上有完好磷酸基的一端称上有完好磷酸基的一端称为5′-磷酸末端磷酸末端〔〔5′-端〕戊糖端〕戊糖C3′上上连有有羟基的一端，称基的一端，称为3′-羟基末端〔基末端〔3′-端〕端〕多核苷酸链书写方式二、DNA分子的空间构造 研讨背景Chargaff规那么：A＝T G＝CFranklin和Wilkins用X-射线衍射技术分析DNA结晶，获得了DNA分子为螺旋构造的直接证据1953年， Watson和Crick在前人研讨成果的根底上，建立了DNA分子二级构造的双螺旋构造模型〔一〕DNA分子的二级构造James Watson (23y)Francis Crick (35y)• •DNADNADNADNA分子由两条反向平行的多核苷酸分子由两条反向平行的多核苷酸分子由两条反向平行的多核苷酸分子由两条反向平行的多核苷酸链链以右手螺旋方式以右手螺旋方式以右手螺旋方式以右手螺旋方式围绕围绕一假想的中心一假想的中心一假想的中心一假想的中心轴轴构成双螺旋构造碱基位于螺旋内构成双螺旋构造碱基位于螺旋内构成双螺旋构造碱基位于螺旋内构成双螺旋构造碱基位于螺旋内部，碱基平面与中心部，碱基平面与中心部，碱基平面与中心部，碱基平面与中心轴轴垂直；脱氧核糖和磷酸基垂直；脱氧核糖和磷酸基垂直；脱氧核糖和磷酸基垂直；脱氧核糖和磷酸基团团构成构成构成构成螺旋的骨架，位于螺旋的外螺旋的骨架，位于螺旋的外螺旋的骨架，位于螺旋的外螺旋的骨架，位于螺旋的外侧侧。

• •两条两条两条两条链链上位于同一平面的碱基按照互上位于同一平面的碱基按照互上位于同一平面的碱基按照互上位于同一平面的碱基按照互补规补规律律律律缔缔合构成碱合构成碱合构成碱合构成碱基基基基对对，，，，G G G G与与与与C C C C配配配配对对构成三个构成三个构成三个构成三个氢键氢键，，，，A A A A与与与与T T T T配配配配对对构成两个构成两个构成两个构成两个氢键氢键• •螺旋的每一周包含螺旋的每一周包含螺旋的每一周包含螺旋的每一周包含10101010个碱基个碱基个碱基个碱基对对，相，相，相，相邻邻碱基碱基碱基碱基对对的的的的间间隔隔隔隔为为0.34nm0.34nm0.34nm0.34nm，螺距，螺距，螺距，螺距为为3.4nm3.4nm3.4nm3.4nm螺旋直径螺旋直径螺旋直径螺旋直径为为2nm2nm2nm2nm• •双螺旋构造的双螺旋构造的双螺旋构造的双螺旋构造的维维系力包括：系力包括：系力包括：系力包括：①①①①氢键氢键：：：：维维系双螺旋构造横系双螺旋构造横系双螺旋构造横系双螺旋构造横向向向向稳稳定；定；定；定； ② ② ② ②碱基堆碱基堆碱基堆碱基堆积积力：碱基之力：碱基之力：碱基之力：碱基之间层层严间层层严密堆密堆密堆密堆积积，构，构，构，构成疏水型中心，成疏水型中心，成疏水型中心，成疏水型中心，坚坚持双螺旋构造持双螺旋构造持双螺旋构造持双螺旋构造纵纵向向向向稳稳定。

定③③③③离子离子离子离子键键：：：：磷酸残基阴离子与介磷酸残基阴离子与介磷酸残基阴离子与介磷酸残基阴离子与介质质中的阳离子构成离子中的阳离子构成离子中的阳离子构成离子中的阳离子构成离子键键，可降低，可降低，可降低，可降低双双双双链间链间的静的静的静的静电电排斥力双螺旋构造要点5´3´5´3´5´3´5´3´磷酸磷酸核糖核糖碱基碱基T-A碱基对碱基对C-G碱基对碱基对 双螺旋中的大沟对于DNA和蛋白质结合时的相互识别很重要 ，在沟内可以识别碱基的顺序模拟模拟DNA双螺旋双螺旋〔蓝色〕〔蓝色〕 大沟中结合着肽大沟中结合着肽 〔红色〕〔红色〕DNA双螺旋的类型① A-DNA螺旋：DNA在75%相对湿度的钠盐中的构型② B-DNA螺旋：DNA在92%相对湿度的钠盐中的构型规范的右手双螺旋，细胞正常形状下DNA存在的构型③ Z-DNA螺旋：左手螺旋，这种螺旋能够在基因表达的调控中起作用类类类类 型型型型旋转旋转方向方向螺旋直径螺旋直径（（nmnm））螺距螺距（（nmnm））每转碱基每转碱基对数目对数目碱基对间垂直碱基对间垂直距离（距离（nmnm））碱基对与水碱基对与水平面倾角平面倾角A A－－DNADNAB B－－DNADNAZ Z－－DNADNA右右右右左左2.02.02.32.31.81.82.82.83.43.44.54.51111101012120.2550.2550.340.340.270.272020º º0º0º7º7º〔二〕DNA分子的高级构造超螺旋构造超螺旋构造核小体、染色质和染色体核小体、染色质和染色体真核生物染色体真核生物染色体DNA组装组装不同层次的构造不同层次的构造DNA 〔〔2nm〕〕核小体链〔核小体链〔 11nm，每个核小体，每个核小体200bp〕〕纤丝〔纤丝〔 30nm，每圈，每圈6个核小体〕个核小体〕突环〔突环〔 150nm，每个突环大约，每个突环大约75000bp〕〕玫瑰花结〔玫瑰花结〔 300nm ，，6个突环〕个突环〕螺旋圈〔螺旋圈〔 700nm，每圈，每圈30个玫瑰花〕个玫瑰花〕染色体〔染色体〔 1400nm，， 每个染色体含每个染色体含10个玫瑰花个玫瑰花200bp〕〕三、RNA分子的构造与功能① ① 单链构造，碱基构造，碱基组成成为A A、、G G、、C C、、U U等，稀有碱基等，稀有碱基或修或修饰碱基碱基较多，多，稳定性定性较差，易水解。

差，易水解② ② 单链本身回折，碱基互本身回折，碱基互补〔〔A A＝＝U U，，G≡CG≡C〕构成部〕构成部分双螺旋，非互分双螺旋，非互补区构成突区构成突环，称，称““茎茎环〞构造或〞构造或发夹构造③ RNA③ RNA同同样要构成高要构成高级构造构造时才干才干发扬活性参与蛋白质合成的参与蛋白质合成的RNA核糖体RNA rRNA〔ribosome RNA〕信使RNA mRNA〔messenger RNA〕转运RNA tRNA〔transfer RNA〕RNARNA的构造特点：的构造特点：〔一〕mRNA mRNA的功能是将细胞核中基因信息转录后携带出来，作为指点蛋白质生物合成的直接模板真核细胞生物的mRNA是由其前体核不均一RNA〔hnRNA〕剪接而成真核细胞成熟mRNA的构造特点： 〔1〕5ˊ端帽子构造：5ˊ-末端在成熟过程中会加上7-甲基鸟嘌呤核苷三磷酸〔m7Gppp〕，称为“帽子〞构造该构造与mRNA的稳定性有关，并与其转运出细胞核、与核糖体结合以及与蛋白质生物合成的起始等过程都有一定的关系〔2〕3ˊ端多聚腺苷酸尾部：3ˊ-末端有一段20～200个腺苷酸的多聚腺苷酸尾部〔poly A〕，与mRNA的稳定性和转运出细胞核的过程等有关。

〔二〕tRNAl ltRNAtRNAtRNAtRNA的主要功能是携的主要功能是携的主要功能是携的主要功能是携带带蛋白蛋白蛋白蛋白质质合成所需的氨基酸，合成所需的氨基酸，合成所需的氨基酸，合成所需的氨基酸，并按并按并按并按mRNAmRNAmRNAmRNA上的密上的密上的密上的密码顺码顺序序序序““““对对号入座〞地将其定位于号入座〞地将其定位于号入座〞地将其定位于号入座〞地将其定位于多多多多肽链肽链上l l根本构造具有以下共同特点：根本构造具有以下共同特点：根本构造具有以下共同特点：根本构造具有以下共同特点：l l①①①①是三种是三种是三种是三种RNARNARNARNA分子中最小的一分子中最小的一分子中最小的一分子中最小的一类类，由，由，由，由70707070～～～～90909090个核苷个核苷个核苷个核苷酸酸酸酸组组成一条成一条成一条成一条单链单链；；；；l l②②②②是含稀有碱基最多的核酸，普通每分子含有是含稀有碱基最多的核酸，普通每分子含有是含稀有碱基最多的核酸，普通每分子含有是含稀有碱基最多的核酸，普通每分子含有7 7 7 7～～～～15151515个如二氢氢尿尿尿尿嘧啶嘧啶〔〔〔〔DHUDHUDHUDHU〕、胸腺〕、胸腺〕、胸腺〕、胸腺嘧啶嘧啶〔〔〔〔T T T T〕、〕、〕、〕、假尿假尿假尿假尿嘧啶嘧啶〔〔〔〔ψψψψ〕、次黄〕、次黄〕、次黄〕、次黄嘌嘌呤〔呤〔呤〔呤〔I I I I〕等；〕等；〕等；〕等； l l③③③③其其其其5ˊ5ˊ5ˊ5ˊ端大多端大多端大多端大多为为pG pG pG pG ，，，，3ˊ3ˊ3ˊ3ˊ端全都是端全都是端全都是端全都是CCA-OHCCA-OHCCA-OHCCA-OH；；；； l l④④④④碱基碱基碱基碱基组组成具有保守性，一切成具有保守性，一切成具有保守性，一切成具有保守性，一切tRNAtRNAtRNAtRNA分子中分子中分子中分子中约约有有有有30%30%30%30%的碱基固定不的碱基固定不的碱基固定不的碱基固定不变变。

124“ “叶子〞叶子〞叶子〞叶子〞反密反密码子子运运运运载载氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸臂氨基酸臂氨基酸臂氨基酸臂RNA中的碱基配中的碱基配对原那么原那么 A-U G-C3可变环(额外环)D环(二氢尿嘧啶环) 不同的不同的tRNA具有不同的具有不同的额外外环，所以，所以额外外环是是tRNA分分类的重要目的的重要目的TψC环(胸苷假尿苷环)反密码子环tRNA三叶草型二级构造三叶草型二级构造l l氨基酸臂与反密氨基酸臂与反密氨基酸臂与反密氨基酸臂与反密码码环环分分分分别别位于位于位于位于““““倒倒倒倒L L L L〞〞〞〞型分子的两端，型分子的两端，型分子的两端，型分子的两端，DHUDHUDHUDHU环环与与与与TψCTψCTψCTψC环环位于拐位于拐位于拐位于拐角上l l主要依托碱基堆主要依托碱基堆主要依托碱基堆主要依托碱基堆积积力和力和力和力和氢键维氢键维系，系，系，系，紧紧凑而凑而凑而凑而稳稳定tRNA的三级构造〔三〕rRNA rRNA rRNA的功能：的功能： 与多种核糖体蛋白与多种核糖体蛋白组成核糖〔组成核糖〔ribosomeribosome〕，提供〕，提供蛋白质生物合成的蛋白质生物合成的场所。

场所 核糖体由大小不核糖体由大小不同的两个亚基所组同的两个亚基所组成rRNArRNA是构成核是构成核糖体大、小亚基的糖体大、小亚基的骨架，决议着整个骨架，决议着整个复合体的构造以及复合体的构造以及蛋白质组分所附着蛋白质组分所附着的位置的位置 核蛋白体的组成项目项目项目项目RNA RNA RNA RNA DNA DNA DNA DNA 特征碱基特征碱基特征碱基特征碱基 U U U U T T T T 稀有碱基稀有碱基稀有碱基稀有碱基 多见多见多见多见 极少见极少见极少见极少见 碱基含量碱基含量碱基含量碱基含量 无一定规律无一定规律无一定规律无一定规律 A=TA=TA=TA=T；；；；G=C G=C G=C G=C 碱基配对碱基配对碱基配对碱基配对 A A A A与与与与U U U U；；；；G G G G与与与与C C C C部分配对部分配对部分配对部分配对 A A A A与与与与T T T T；；；；G G G G与与与与C C C C全部配对全部配对全部配对全部配对分子大小分子大小分子大小分子大小 大小不等，含数十至大小不等，含数十至大小不等，含数十至大小不等，含数十至数千个核苷酸数千个核苷酸数千个核苷酸数千个核苷酸 一般比一般比一般比一般比RNARNARNARNA大得大得大得大得多多多多 结构特点结构特点结构特点结构特点 单链单链单链单链 互补双链互补双链互补双链互补双链 主要功能主要功能主要功能主要功能 参与遗传信息表达参与遗传信息表达参与遗传信息表达参与遗传信息表达 储存遗传信息储存遗传信息储存遗传信息储存遗传信息RNA和和DNA的比较的比较一、核酸的分子大小、粘度、溶解性、酸碱性质第第3 3节节 核酸的理化性质核酸的理化性质① DNA① DNA分子量分子量约106106～～1011D1011D，，RNARNA分子量分子量约102102～～106D106D。

② ② 线性大分子，粘度高但抗剪切力差性大分子，粘度高但抗剪切力差③ DNA③ DNA为白色白色纤维状固体，状固体，RNARNA为白色粉末，均微溶白色粉末，均微溶 于水，不溶于有机溶于水，不溶于有机溶剂 RNA RNA易溶于低易溶于低盐〔〔0.14mol/LNaCl0.14mol/LNaCl〕溶液 DNA DNA易溶于高易溶于高盐〔〔1mol/LNaCl1mol/LNaCl〕溶液④ ④ 核酸属于两性解离物核酸属于两性解离物质，具有等，具有等电点〔点〔pIpI为2 2～～ 3 3〕，普通呈酸性〔在中性溶液中〕，普通呈酸性〔在中性溶液中带负电荷〕二、核酸的紫外吸收 嘌呤碱和嘧啶碱分子中具有共轭双键，因此核酸具有紫外吸收的特征，最大吸收峰波长为260nm 利用此特性，可采用紫外分光光度法进展核酸的定性定量分析，也可借此鉴别核酸检品中的蛋白质杂质l l在一定理化要素作用下，在一定理化要素作用下，DNADNA双螺旋构造中碱基双螺旋构造中碱基之间的氢键断裂，变成单链的景象称为之间的氢键断裂，变成单链的景象称为DNADNA变性变性l l在适当的条件下，两条互补单链重新结合并恢复在适当的条件下，两条互补单链重新结合并恢复天然的双螺旋构造，称为复性〔天然的双螺旋构造，称为复性〔renaturationrenaturation〕〕l l 热变性的热变性的DNADNA缓慢冷却后复性称为退火。

缓慢冷却后复性称为退火 l l 增色效应：当核酸变性或降解时增色效应：当核酸变性或降解时260nm260nm处处光吸收值显著添加的景象光吸收值显著添加的景象l l 减色效应：核酸复性后，减色效应：核酸复性后，260nm260nm处光吸收处光吸收值又恢复到原有程度的景象值又恢复到原有程度的景象l l 加热变性时加热变性时DNADNA溶液溶液A260A260升高到达最大升高到达最大值一半时即值一半时即DNADNA解链解链50%50%时的温度称为该时的温度称为该DNADNA的的熔点或熔解温度〔熔点或熔解温度〔melting temperature Tmmelting temperature Tm〕G G＋＋C C比例高，比例高，TmTm值高三、核酸的变性复性四、分子杂交与探针技术l l分子杂交〔分子杂交〔分子杂交〔分子杂交〔hybridizationhybridizationhybridizationhybridization〕指不同〕指不同〕指不同〕指不同源的单链核酸分子结合构源的单链核酸分子结合构源的单链核酸分子结合构源的单链核酸分子结合构成杂化的双链核酸的过程。

成杂化的双链核酸的过程成杂化的双链核酸的过程成杂化的双链核酸的过程 l l杂交可发生在杂交可发生在杂交可发生在杂交可发生在DNA-DNADNA-DNADNA-DNADNA-DNA、、、、l l RNA-RNA RNA-RNA RNA-RNA RNA-RNA和和和和DNA-RNADNA-RNADNA-RNADNA-RNA之间l l探针〔探针〔探针〔探针〔probeprobeprobeprobe〕：一段带〕：一段带〕：一段带〕：一段带有放射标志或其他化学标有放射标志或其他化学标有放射标志或其他化学标有放射标志或其他化学标志的寡核苷酸链志的寡核苷酸链志的寡核苷酸链志的寡核苷酸链 第第4 4节节 核酸类药物的工业消费核酸类药物的工业消费制备核酸类药物的途径①从生物资料中提取；②微生物发酵；③化学合成一、核酸的提取①破碎细胞；②提取核蛋白；③用蛋白量变性剂如苯酚或去垢剂十二烷基硫酸钠〔SDS〕等，或用蛋白酶处置除去蛋白质；④用乙醇等沉淀剂使核酸从溶液中析出 二、核酸的分别纯化原位杂交法原位杂交法亲和色谱法亲和色谱法凝胶电泳法凝胶电泳法 密度梯度离心法密度梯度离心法柱色谱法柱色谱法三、核酸含量的测定定磷法定磷法定糖法定糖法紫外分光紫外分光光度法光度法方法方法A260nm＝0.022〔1μg/ml RNA〕A260nm＝0.020〔1μg/ml DNA〕〔加热条件下〕〔加热条件下〕D-D-核糖＋浓盐酸＋地衣酚核糖＋浓盐酸＋地衣酚绿色〔绿色〔670nm670nm〕〕D-2-D-2-脱氧核糖＋酸＋二苯胺脱氧核糖＋酸＋二苯胺蓝色〔蓝色〔595nm595nm〕〕有机磷消化有机磷消化→→钼蓝钼蓝660nm660nmRNA:8.5~9.0%RNA:8.5~9.0%DNA:~9.2%DNA:~9.2%四、核酸类药物制备实例。