糖原的显示(PAS)反应.ppt

糖原的显示糖原的显示(PAS(PAS反应反应) )山东师范大学生命科学学院 邢维贤v 实验目的v 实验原理v 实验用品v 实验方法与步骤v 实验结果v 实验报告目的要求•通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布基本原理•糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（—CHO），游离醛基与Schiff ‘s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比•由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能显示的糖类主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等因此要确定此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其他多糖 实验用品1．器材：石蜡切片机，盖玻片、载玻片、染色缸等．2．试剂 0.5%过碘酸溶液；Schiff‘s试剂3．材料：小鼠肝脏石蜡切片 切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。

注意注意：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，过碘酸的作用时间与反应：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，过碘酸的作用时间与反应环境温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，环境温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，当室温较低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长当室温较低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检对照片的设置•为了确保实验结果的可信性，在实验中需设置阴性对照片•对照片在复水后，用唾液淀粉酶37℃水解30—60分钟，取出后水洗，再入过碘酸处理实验结果实验报告•绘图表示糖元在细胞中的分布情况；•在实验过程中，过碘酸处理能起到什么作用，它和Feulgen反应中HCl的作用有何异同？。