DNA琼脂糖凝胶电泳课堂PPT.ppt

DNADNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 姓名：徐秀倩 学号：3160481 导师： 吴小芹1 实验原理实验原理琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型 凝胶 ——分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构 象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pH>DNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与 分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线 状DNA>开环DNA2不同浓度琼脂糖分离不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围分子的范围琼脂糖浓度（琼脂糖浓度（%%）） 分离范围（分离范围（kbkb）） 0.3 5-600.3 5-60 0.6 1-20 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3 2.0 0.1-33琼脂糖凝胶中琼脂糖凝胶中DNA的观察的观察溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光4主要实验器材主要实验器材电泳仪电泳仪电泳槽电泳槽缓冲液缓冲液琼脂糖琼脂糖凝胶槽凝胶槽梳子梳子取液器取液器溴酚蓝溴酚蓝5电泳槽结构电泳槽结构6操作步骤操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相7 溶溶 胶胶8准备胶槽准备胶槽9凝胶冷却至凝胶冷却至凝胶冷却至凝胶冷却至50°C50°C，加，加，加，加EBEB至终浓度至终浓度至终浓度至终浓度0.5μg/ml0.5μg/ml10铺铺 胶胶11凝胶凝固后取出梳子凝胶凝固后取出梳子12加缓冲液加缓冲液13 准备样品准备样品14点点 样样15电电 泳泳16注意观察溴酚蓝染液的迁移注意观察溴酚蓝染液的迁移17紫外灯下观察电泳结果紫外灯下观察电泳结果18 照照 相相19相关实验 对琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的有效性的再认识20琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的基本原理 DNA 为多元酸，在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动 由于不同DNA 分子在同一凝胶中迁移速率不一样， 电泳一段时间后可将其分开。

21材料 铜绿假单胞菌噬菌体PaP1 基因组DNA ，按常规提取，置-20 ℃保存备用Agarose Ⅰ、限制性内切酶EcoRⅤ为上海生工生物工程有限公司产品从凝胶中小量回收DNA 片段的试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品，1 kb DNA Ladder为MBI 产品22方法琼脂糖凝胶电泳 用1×TAE 配制0.8 %琼脂糖凝胶， 电泳缓冲液为1 ×TAE，电压为5 V/ cm ，电泳1 h ，用溴化乙锭或LIGHTBLUE Dye 显色23结果 电泳后在日光下电泳后在日光下(LIGHTBLUE Dye (LIGHTBLUE Dye 染色染色) )或在紫外或在紫外灯下灯下( (溴化乙锭染色溴化乙锭染色) )切取含切取含“ “ 单一单一” ” 目的目的DNA DNA 分分子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNADNA 24 在3 个大的目的DNA 片段1、2 和3(分别约为10 、7、4.5 kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5 kb 到100 bp不等)在日光下(用LIGHTBLUE Dye 显色)分别切取含有单一目的片段1、2、3 的胶条用试剂盒回收DNA 分子，为了获得足够量的目的DNA 而同时上样4 条泳道。

25 谢谢观看谢谢观看 26。