大赛璐手性分析方式筛选与优化.docx

大赛璐手性分析方式筛选与优化大赛璐手性分析方法筛选与优化主要内容手性色谱基础和大赛璐手性柱涂布型正相手性分析方法开发涂布型反相手性分析方法开发化学键合型手性分析方法开发常见手性分析问题与注意事项液-液萃取法生物催化法不对称合成法膜分离法传感器法结晶法毛细管电泳色谱法手性分离方法手性色谱技术超临界(SFC)气相色谱（GC）薄层色谱（TLC）逆流色谱（CCC）模拟移动床(SMB)高效液相色谱（HPLC）色谱法手性色谱技术方法精度说明旋光法低(5%)非对映体异构体法高(0.1%)几十毫克.中等(2%)几毫克需要位移试剂.色谱法高(0.1%)微克-毫克HPLC、GC、SFC对映体纯度测定方法及其比较几十毫克样品用量需要其它的手性化合物来制备非对映体需要真实样品手性色谱固定相法基本原理操作简单不需要预处理准确度高即可用于对映体的常规分析，也可实现大规模制备RR对映体分离示意图SSSSSSSSSSR,S消旋体(racemate)手性选择剂RSRRRRRRRR引入手性环境是实现手性分离的前提Daicel手性色谱柱一览表正相直链淀粉衍生物CHIRALPAKAD/AD-H/AD-3CHIRALPAKAS/AS-H/AS-3CHIRALPAKAY-H/AY-3CHIRALPAKAZ-H/AZ-3纤维素衍生物CHIRALCELOD/OD-H/OD-3CHIRALCELOJ/OJH/OJ-3CHIRALCELOZH/OZ-3CHIRALCELOA,OB,OCCHIRALCELOF,OG,OKCHIRALCELCA-1反相CHIRALPAKAD-RH/AD-3RCHIRALPAKASRH/AS-3RCHIRALCELOD-RH/OD-3RCHIRALCELOJRH/OJ-3RCHIRALPAKAYRH/AY-3RCHIRALCELOZRH/OZ-3R其它Chiral-AGPCROWNPAKCR(),()CHIRALPAKOT(),OP()CHIRALPAKWH,MA()CHIRALPAKQD-AXCHIRALPAKQN-AX共价键合型CHIRALPAKIA/IA-3CHIRALPAKIB/IB-3CHIRALPAKIC/IC-3大赛璐固定相：USPEP中国药典涂布型正相手性柱：手性分析方法的建立和优化分析条件优化流程图(1)酸性中性碱性1.确认流动相中是否使用酸、碱添加剂配制流动相Hex/IPA/TFA=70/30/0.1Hex/IPA/DEA=70/30/0.1Hex/IPA=70/30样品碱性样品添加物在分离中的作用mVMinutes0.01.02.03.04.05.06.07.002468101214161820222410.7413.96Hex/IPA/DEA=90/10/0.1流量：1.0mi/min.温度：检测波长：（254）流动相Hex/IPA=90/10Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1流动相Hex/IPA=90/10-0.10-0.050.000.050.100.150.200.250.300.35mV024681012141618202224262830Minutes10.940.40流量：1.0mi/min.温度：检测波长：（254）05101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52Minutes0.00.20.40.60.81.01.21.41.6mV0510152025303540酸性样品FCOOHNH2NON（没出峰)（无法分离)添加物的种类和用量样品酸碱性添加物种类添加量中性不需要碱性二乙胺(DEA)(n-丁胺*1)(乙醇胺*2)0.5通常0.1酸性三氟乙酸(TFA)醋酸0.5通常0.1*1主要用于1级胺*2主要用于1级氨基醇Minutes0.02.55.07.510.012.515.017.520.0mv020040060080010001200mv02004006008001000120012.2401.8531:220nm,4nmRetentionTimeMinutes051015mv0100020003000mv01000200030001:220nm,4nmRetentionTimeColumn:AY-H(4.6*150mm)Temp:35Flow:2.0ML/MINMobilephase:CO2/IPA/DEA=85/15/0.1不同添加剂对手性分离的影响Column:AY-H(4.6*150mm)Temp:35Flow:.2ML/MINMobilephase:CO2/IPA/1-propylamine=85/15/0.10.05.010.015.020.025.0min0100200300400mVDetectorACh1:220nm2.22529.8790.02.55.07.510.012.515.017.520.0min-250255075100125mVDetectorACh1:220nm12.00515.0460.02.55.07.510.012.515.017.5min-50-250255075100mVDetectorACh1:220nm12.16414.754对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离Column:OZ-H(4.6*150mm)Temp:35Flow:1.0ml/minMobilephase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1)Column:OZ-H(4.6*150mm)Temp:35Flow:1.0ml/minMobilephase:hexane/IPA/TFA(85/15/0.1)Column:OZ-H(4.6(150mm)Temp:35Flow:1.0ml/minMobilephase:hexane/IPA/TFA/DEA(80/20/O.1/0.05)分析条件优化流程图(2)保留时间?长适宜的分析时间(10-30min.)短增加异丙醇增加正已烷2.配制好流动相选择合适的手性柱分析分析条件优化流程图（3）没有分离部分分离3.选择合适的手性柱尝试别的手性柱OK!基线分离继续优化分析条件分离？筛选结果0510152025303540455055600123456789101112131415Minutes4.684.82OB15mV1234567891011121314Minutes6.716.87OD05101520253035404550556065mV0-505101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52AD05101520253035404550556065mV0123456789101112131415OJmV01020304050607080mV012345678910111213144.7090AS1501020304050607080901000123456789101112131415Minutes4.70OCMinutes1020304050607080mV0123456789101112131415Minutes4.3615OGMinutes001020304050607080mV01234567891011121314Minutes4.36OF色谱条件流动相：Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1流量：1.0ml/min.温度：40检测波长：UV254nm样品：FCOOH选择效果最好的手性柱,然后继续优化分析条件分析条件优化流程图（4-A）部分分离A.降低异丙醇浓度B.调整温度C.更换醇类4.分析条件继续优化醇浓度的影响05101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52在多数情况下，降低醇的浓度可延长保持时间，改善分离度Column：AD,Temp.：40,Flowrate：1.0ml/min.Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1Hex./IPA/AcOH=100/1/0.1-0.50.00.51.01.52.02.53.03.5mV051015202530354045505560Minutes35.7743.71FCOOHSample：Flurbiprofen部分分离B.调整温度C.更换醇类4.分析条件继续优化分析条件优化流程图（4-B）A.降低异丙醇浓度温度的影响Column：CHIRALPAKADMobilephase：Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1,Flowrate：1.0ml/min.2540Temp.：5FCOOH降低柱温可增大值，但会使峰形变宽升高柱温会减少值，但会使峰形尖锋-0.50.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.00123456789101112131415Minutes8.7212.13:1.59mVMinutes0510152025303501234567891011121314156.667.52:1.23mV01234567890123456789101112131415Minutes7.669.12:1.320.02.55.07.5min-10-505101520mVDetectorACh1:200nm3.2173.732Temp.：25Rs:1.990.02.55.07.5min0255075mVDetectorACh1:200nm4.3355.281Temp.：20Rs:2.78Temp.：15Rs:3.560.02.55.07.5min010203040506070mVDetectorACh1:200nm4.3975.661温度的影响Column:CROWNPAKCR(+)(4.6*150mm)Mobilephase:PH=1.0高氯酸Flow:0.3ml/minSample:苏氨酸部分分离C.更换醇类B.调整温度4.分析条件继续优化A.降低异丙醇浓度分析条件优化流程图（4-C）由异丙醇换为乙醇-选择性增大Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1FCOOHIPA和EtOH有时会使峰形和值发生明显变化Column：CHIRALPAKADTemp.：40,Flowrate：1.0ml/min.Sample：Flurbiprofen05101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52=1.2305101520253001234567891011121314157.589.64=1.45mVMinutesHex./EtOH/AcOH=95/5/0.10.05.010.015.020.025.0min0255075100mVDetectorACh2:254nm20.24121.4240.02.55.07.510.012.515.0min050100150200250300mVDetectorACh2:254nm10.01113.410由异丙醇换为乙醇-更好的选择性Column:AY-H(4.6X250mm)Temp:35Flow:1.0ml/minMobilephase:hexane/IPA/DEA(90/10/O.1)Column:AY-H(4.6X250mm)Temp:35Flow:1.0ml/minMobilephase:hexane/EtOH/DEA(90/10/O.1)01020min0250500mVDetectorACh1:220nm0.05.010.0min0250500750mVDetectorACh1:220nm8.47511.818IA-H80I20DEA0.1-1.0mlmin-35IA-M100DEA0.1-1.0mlmin-350.02.55.07.510.012.515.017.5min-50-250255075100mVDetectorACh1:220nm12.16414.7540.02.55.07.510.012.5min0501001502。