植物单细胞培养技术ppt课件.ppt

植物单细胞培育技术 周口师范学院生命科学系 1 植物单细胞培育的意义1.1 有利于察看细胞个体的分裂、分化、生长和繁衍情况；1.2 有利于获得纯细胞系；1.3 有利于进展细胞特性、细胞生长规律、细胞代谢过程及其调理控制规律等方面的研讨；1.4 有利于生物转化和天然化合物的消费2 植物单细胞的分别技术2.1 从外植体直接分别单细胞2.2 从愈伤组织分别单细胞2.3 经过原生质体再生法获得单细胞2.1 从外植体直接分别单细胞 外植体经过切割、捣碎或酶解，然后经过一定孔径的不锈钢筛网过滤，得到细胞悬浮液 悬浮液中所含的完好细胞数量较少，但分散性好 2.2 从愈伤组织分别单细胞 将愈伤组织进展振荡培育，使其分散成小的细胞团或单细胞，然后用适当孔径的不锈钢筛网过滤，除去大的细胞团和残渣，离心除去小的残渣，得到单细胞悬浮液 为了加强分散效果，必要时可添加适量的果胶酶，使由果胶粘连在一同的细胞分开。

2.3 经过原生质体再生法获得单细胞 外植体、愈伤组织或细胞团经过纤维素酶和果胶酶等的作用，除去细胞壁而获得原生质体原生质体再生细胞壁 外植体愈伤组织单细胞悬浮液 愈伤组织 再生植株酶解1 单细胞悬浮液的制备单细胞来源： 3.1 平板培育法 程 序： 外植体(叶肉细胞)愈伤组织原生质体 2 单细胞悬浮液的密度调整要求：调整后的密度为植板细胞密度的2倍调整方法：①假设密度过大，参与液体培育基进展 稀释； ②假设密度小，经过低速离心使细胞沉降后，再参与适量液体培育基3.1 平板培育法 程 序： 3 固体培育基的配制 当细胞植板密度过高(104或105个/ml)，运用和在悬浮培育中或愈伤组织培育中成分类似的纯合成培育基 当细胞植板密度过小，细胞对培育基的要求就变得越加复杂 留意：要选择适宜单细胞培育的培育基3.1 平板培育法 程 序： 4 单细胞悬浮液与固体培育基等量混合①当培育基凝固后，细胞能均匀的分布并固定在很薄一层(1mm)培育基中②在培育皿外对单细胞做标志，便于察看。

3.1 平板培育法 程 序： 5 暗培育留意： 培育期间对细胞频繁的镜检会对细胞的生 长产生有害作用，应尽量减少镜检次数3.1 平板培育法 程 序： 6 继代培育 选取生长良好的由单细胞构成的细胞团，可以获得由单细胞构成的细胞系3.1 平板培育法 程 序：  初始植板细胞浓度对单细胞培育的影响 用平板法培育单细胞或原生质体时，常以植板效率来表示 植板效率=每个平板上构成的细胞团数/每个平板上接种的细胞总数×100% 假设在琼脂培育基或液体培育基中，植板细胞的初始密度为1 ×104或1 ×105个/ml，植板后由相邻细胞构成的细胞群落常混在一同 假设降低植板密度或完全孤立地培育单细胞，那么可防止这个问题但是当低于临界密度时，细胞就不能分裂 缘由是什么？ ？ 初始植板细胞浓度对单细胞培育的影响缘由： 植物细胞的生长繁衍需求一定浓度的某些内源化合物 初始植板细胞浓度对单细胞培育的影响 如何培育完全孤立的单细胞？？1将生长活泼的愈伤组织接2种在固体培育基上 3.2 看护培育法 程 序： 2 在愈伤组织块上方放置一片面积为1cm2的无菌滤纸，滤纸下方紧贴愈伤组织3 借助于微型移液管从细胞悬浮液中提取适量单细胞悬浮液 ，然后接种在无菌滤纸上面。

3.2 看护培育法 程 序： 4 将在滤纸上由单细胞构成的细胞团转移到新颖的固体培育基中进展继代培育，获得由单细胞构成的细胞系 能够的缘由是： 1 愈伤组织的存在给单细胞传送了某些生物信息 2 愈伤组织为细胞的生长繁衍提供了某些物质条件为什么有愈伤组织的看护就能进展单细胞培育？1 借助于微型移液管从细胞悬浮液中提取适量单细胞悬浮液 ，置于一张无菌载片上在这滴培育液周围与之隔一定间隔加上一圈石蜡油，构成微室的〞围墙〞，在围墙左右两侧再各加一滴石蜡油，每滴之上置一张盖片作为微室的“支柱〞 3.3 微室培育法 程 序： 2 将第三张盖片架在两个“支柱〞之间，构成微室的“屋顶〞 3.3 微室培育法 程 序： 3单细胞悬浮液在微室中4 当细胞团长到一定大小时揭掉盖片，把细胞团转移到新颖培育基上培育微室培育图示：1滴含单细胞培育液滴含单细胞培育液周围加石蜡油周围加石蜡油凹穴载玻片凹穴载玻片旁边加石蜡油旁边加石蜡油盖盖玻片盖盖玻片盖盖玻片盖盖玻片平视图置培育皿中26～28 ℃恒温培育微室培育的优点： ①有利于对细胞特性的研讨 ②有利于对单个细胞的生长、分裂、分化等情况进展全程跟踪研讨。

小 结： 经过这一节课 的学习，我们要掌握的知识点： 1 植物单细胞的获得方法 2 植物单细胞的培育技术思索：1 简述植物单细胞平板培育操作过程2 在进展植物单细胞培育时，细胞密度过大或过小会对培育结果产生什么影响？。