酶解法制备葡萄糖酸钙.ppt

酶法制备葡萄糖酸钙酶法制备葡萄糖酸钙                                                                                                                         月饼小分队：白朋纲月饼小分队：白朋纲 杨梦雪杨梦雪 姜昌熊姜昌熊 张雪冰张雪冰钙是体内含量最大的无机物，为维持钙是体内含量最大的无机物，为维持人体神经，肌肉，骨骼系统，细胞膜人体神经，肌肉，骨骼系统，细胞膜和毛细血管通透性正常功能所必需和毛细血管通透性正常功能所必需 葡萄糖酸钙在中国和许多国家的药典里都有葡萄糖酸钙在中国和许多国家的药典里都有收藏，是一种我们比较熟悉的的药物，葡萄收藏，是一种我们比较熟悉的的药物，葡萄糖酸钙常常被用来做补钙剂它有利于人体糖酸钙常常被用来做补钙剂它有利于人体骨质的形成，对青少年骨骼发育有促进作用骨质的形成，对青少年骨骼发育有促进作用,同时由于它是一种抗过敏溶解度高，生理同时由于它是一种抗过敏溶解度高，生理活性大的钙营养药，可以治疗生理性缺钙症活性大的钙营养药，可以治疗生理性缺钙症和血钙引起的手足抽搐、痉挛等症，以及治和血钙引起的手足抽搐、痉挛等症，以及治疗软骨、佝偻等缺钙症。

疗软骨、佝偻等缺钙症发酵法：营养盐和黑霉菌种子营养液，发酵法：营养盐和黑霉菌种子营养液，进行发酵发酵液加石灰乳中和，过滤，进行发酵发酵液加石灰乳中和，过滤，滤液减压浓缩，结晶得到粗品，经精制滤液减压浓缩，结晶得到粗品，经精制得到葡萄糖酸钙得到葡萄糖酸钙生产成本较高，纯化工艺较复杂生产成本较高，纯化工艺较复杂 ））  试验原理（（1 1））αα- -淀淀粉粉酶酶(EC (EC 3.2.1.1)3.2.1.1)又又称称液液化化型型淀淀粉粉酶酶，，它它作作用用于于淀淀粉粉时时，，随随机机的的从从淀淀粉粉分分子子内内部部切切开开αα-1,4-1,4糖糖苷苷键键，，使使淀淀粉粉水水解解成糊精和一些还原糖成糊精和一些还原糖2 2）糖化酶（）糖化酶（EC 3.2.1.3EC 3.2.1.3）又）又称葡萄糖淀粉酶，它作用于淀称葡萄糖淀粉酶，它作用于淀粉时，从淀粉分子的非还原端粉时，从淀粉分子的非还原端开始逐个地水解开始逐个地水解αα-1,4-1,4糖苷键，糖苷键，生成葡萄糖和一些低聚糖，且生成葡萄糖和一些低聚糖，且糖化酶还有一定的水解糖化酶还有一定的水解αα-1,6-1,6糖苷键和糖苷键和αα-1,3-1,3糖苷键的能力糖苷键的能力(C6H10O5)n +nH2OnC6H10O6α-淀粉酶淀粉酶糖化酶糖化酶 试验原理（（3 3））葡葡萄萄糖糖氧氧化化酶酶（（EC EC 1.1.3.41.1.3.4））是是一一种种糖糖蛋蛋白白，，它它能能够够特特异异性性的的氧氧化化ββ- -D-D-葡葡萄萄糖糖生生成成中中间间产产物物D-D-葡葡萄萄糖糖酸酸- - δ δ - -内内酯酯和和过过氧氧化化氢氢，，并并发发生生非非酶酶促促反反应应水解为葡糖酸。

水解为葡糖酸4 4）过氧化氢酶）过氧化氢酶（（EC1.1.1.1.6EC1.1.1.1.6））它以过氧化氢作它以过氧化氢作为专一的底物，为专一的底物，催化过氧化氢分催化过氧化氢分解为水和氧气保解为水和氧气保护酶受到过氧化护酶受到过氧化氢的毒害氢的毒害4C6H12O6+3O2+2H2O4C6H12O7+2H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶2C6H12O7+CaCO3Ca(C6H11O7)2+CO2+H2O2H2O22H2O+O2过氧化氢酶过氧化氢酶500ML烧杯烧杯，， PH试纸试纸，， 玻璃棒玻璃棒，， 水浴锅水浴锅，， 电炉电炉，， 石棉网石棉网，， 温度计温度计，， 滤纸滤纸，， 漏斗漏斗，， 电子天平电子天平，， 量筒量筒等常用试验用器材等常用试验用器材实验器材实验器材淀粉，淀粉， a-淀粉酶淀粉酶，， 糖化酶糖化酶 ，， 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 ，， 过氧化氢酶过氧化氢酶 ，， NaOH Na2CO3 ，，CaCO3，， CaCl2，， 碘液碘液 ，活性炭等等，活性炭等等试验试剂试验试剂 操作步骤操作步骤一，葡萄糖标准曲线一，葡萄糖标准曲线配置配置5个梯度浓度的个梯度浓度的葡萄糖标准溶液葡萄糖标准溶液各取各取1mL分装分装于五支试管中于五支试管中设置一个空白组设置一个空白组分别加入分别加入2mL DNS试剂试剂沸水浴中沸水浴中2min后取出后取出加加蒸馏水至蒸馏水至15mL测定吸光值，获得标准曲线测定吸光值，获得标准曲线 操作步骤操作步骤 45g淀粉淀粉+150ml水搅水搅拌拌 Na2CO3调节调节pH=6--6.4  加入加入a-淀粉酶，淀粉酶，72℃℃加加热搅拌热搅拌15min 再加热至再加热至90℃℃30min  淀粉糊化淀粉糊化加加热热到到沸腾沸腾10min，，酶失酶失活活二，液化二，液化冷却至冷却至55-60℃℃加入糖化酶加入糖化酶调节调节ph=4.5于于60-65℃℃恒温水浴恒温水浴糖化糖化3-4h加入活性加入活性炭，在炭，在80℃℃搅拌搅拌30min抽滤抽滤，得到透，得到透明糖液明糖液测量葡萄糖含量测量葡萄糖含量三，糖化三，糖化 操作步骤操作步骤四，四，双酶氧化双酶氧化葡萄糖+CaCO3  (过量)              加过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶35℃搅拌反应，通过pH判断反应进行的程度反应结束，加活性炭脱色获得葡萄糖酸钙溶液 操作步骤操作步骤 试验结果试验结果吸光值吸光值1.4142.6822.8912.9583.01浓度浓度（（%））0.51357 样品的吸光值为样品的吸光值为1.636，通过表中的数据整合出，通过表中的数据整合出的的标准曲线得出葡萄糖的浓度为标准曲线得出葡萄糖的浓度为0.58%试验过程及其产物照片试验过程及其产物照片谢谢！谢谢！。