磁珠分离细胞技术.ppt

单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,单击此处编辑母版标题样式,,22,磁珠分选技术,,磁珠分选技术,免疫学,+,细胞生物学,+,磁力学,,基于抗体对抗原的特异性识别：免疫磁珠,,磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连：抗体偶联磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、,Oligo,,dT,磁珠,,在高强度、梯度磁场中达到磁性分离的目的：分离细胞、蛋白、核酸、细菌等,磁珠,,磁力架,,分离柱或分离试管,,MACS，Dynal，BD，StemCell，R&D…,磁珠分选系统,管式分选,Dynalbeads®,Dynalbeads,分离试管,磁力架,柱式分选,未标记的细胞先行流出,MACS,微珠进行磁性标记,撤去磁场，将标记的细胞洗出,磁性铁珠在分选器作用下形成强大的磁场，使含磁珠的细胞悬浮在磁场中,MACS,,d≈50nm，多聚糖和氧化铁组成的超顺磁化微粒；可被细胞生物降解而无需解离磁珠；分离丰度极小的细胞(10,-8,);,,Dynal,,d=4.5um﹑2.8um﹑1um，多聚材料包被的氧化铁超顺磁微球；均一性好；也适用于细胞活化；,,BD,,d≈200nm，超顺磁化微粒；包被了高质量的BD抗体；,,StemCell,,管式；柱式;,,R&D,,d≈150nm，链酶亲和素磁珠，类胶体.,,直标,间标,抗链酶亲和素磁珠,抗生物素磁珠,抗免疫球蛋白磁珠,抗荧光素磁珠,在没有直接标记微珠可选时,,使用自备抗体或配体的磁性分选中,,分选或去除用多个抗体混合物标记的多种细胞,,分选稀有细胞和抗原弱表达的细胞,间标扩展了分选范围,分选策略,阳性分选,,去除分选,,多重分选,,用磁珠标记目标细胞,目标细胞滞留在分选柱内,目标细胞被洗脱，收集,目的细胞磁性标记后，作为阳性的标记组分直接分选出来。

高纯度，高回收率，操作简单，尤其是富集稀少细胞分选前,阴性组分(未滞留在分选柱上的细胞),阳性组分(滞留在分选柱上的细胞),应用anti-CD19磁珠分选人外周血中的B细胞,非目的细胞磁性标记后，作为阴性的组分滞留在分选柱上，未标记的目的细胞被分选出来去除不需要的细胞,,缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞）,,不需要抗体和目的细胞结合，即细胞不被,刺激,（如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析）,,需进一步通过阳性选择分选细胞亚群,标记非目的细胞,非目的细胞滞留在分选柱上，被去除,生物素标记CD2, CD14, CD16, CD36, CD43, CD235a; 再加入链酶亲和素标记的磁珠,应用去除法分选人外周血中的B细胞,先去除非目的细胞，再进行阳性分选非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原；要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选，可获得高纯度的目的细胞标记去除非目的细胞,标记目的细胞,洗脱目的细胞,应用：分选人外周血中的,CD4,+,CD25,+,,T,细胞,分选前,去除分选后,阳性分选后的阴性组分,阳性分选后的阳性组分,洗脱目标细胞,用标记1标记目标细胞,用标记2标记目标细胞,去除磁珠标记,洗脱目标细胞,进行多次连续阳性分选，进行新标记前先去除原来的磁珠标记。

可进行多参数分选应用：分选人外周血中的,CD3,+,CD56,+,,T,细胞,分选前,第一次阳选,第二次阳选,,优点：,操作简单，高效快捷，无菌和细胞状态更有保证，回收率、纯度高缺点：,不能在分选的同时进行分析，分选过程中很难去除死细胞团块的干扰，难于同时进行多种标记物的分选分选前标本处理,,密度梯度离心,(,Ficoll,,,Percoll,),,（根据情况）溶血,(,溶解红细胞,),,过滤,(,单个细胞,),,分选标本：不含有死细胞或者碎片的单细胞悬液,,骨髓、外周血、脐带血提取的单个核细胞,,处理的组织细胞,,培养的细胞,,全血*（,autoMACS,）,选择合适的分选策略！,The End~,。