TLC展开剂选择及显色剂的总结(转载).docx

选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷＜己烷＜苯＜乙醚 ＜THF＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常 使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有： Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展 开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂展开剂的选择条件：①对的所需成分有良 好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3〜0.5之间；④不与 待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好 用新鲜配制一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节 溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯 仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木 脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性 很大的生物碱类化合物的分离。

很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果我们在实验中，为了实现一个配 体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚一EtOAc—HCOOH （5.5： 3.5： 0.1）混合溶剂一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象, 再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂 对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来 中和硅胶的酸性选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择分 离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度， 酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行溶剂的含水 量和杂质含量对分离效果都有明显的影响温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现有时 同一展开条件，上下午的Rf截然不同展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑在进行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动 相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分，然后细分，对于分离未知的化学物质， 展开剂的选择也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量！ 溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。

在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯 上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质 这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂 为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂如果对某一极性物质用吸附性较弱的 吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入溶解样品 的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附然后渐增大溶剂的极性这种极性的增大是一 个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱如果极性增大过诀（梯 度太大），就不能获得满意的分离溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（£）来表示介电常数 高，洗脱能力就大以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝对非极性吸附剂，如活性炭， 则正好与上述顺序相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂中为强3．被分离物质的性质：被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相 连。

在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分离物质的结构与性质有关对 极性吸附剂而言，成分的极性大，吸附住强当然，中草药成分的整体分子观是重要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就会更大些，在同系 物中碳原子数目少些，被吸附也会强些总之，只要两个成分在结构上存在差别，就有可能分离，关键在 于条件的选择要根据被分离物质的性质，吸附剂的吸附强度，与溶剂的性质这三者的相互关系来考虑 首先要考虑被分离物质的极性如被分离物质极性很小为不含氧的萜烯，或虽含氧但非极性基团，则需选 用吸附性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱但多数中药成分的极性较大，则需要选 择吸附性能较弱的吸附剂（一般III〜IV级）采用的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增，或可应用薄层 层析以判断被分离物在某种溶剂系统中的分离情况此外，能否获得满意的分离，还与选择的溶剂梯度有 很大关系现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系如有多组分的混合物，象植 物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份当以硅胶为吸附剂时，使油脂被吸附后 选用一系列混合溶剂进行洗脱，油脂中各单一成分即可按其极性大小的不同依次被洗脱。

又如对于C-27甾体皂貳元类成分，能因其分字中羟基数目的多少而获得分离：将混合皂貳元溶于含有5% 氯仿的苯中，加于氧化铝的吸附柱上，采用以下的溶剂进行梯度洗脱如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代 氧化铝，由于硅酸镁的吸附性较弱，洗脱剂的极牲需相应降低，亦即采用苯或含 5%氯仿的苯，即可将一 元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱下来这一例子说明，同样的中草药成分在不同的吸附剂中层析时，需用不 同的溶剂才能达到相同的分离效果，从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的相互关系二）簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法一般将柱层析用的吸附剂撒布到平 面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析其原理与柱层析基本相似1．薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同主要区别在于薄层层析要求吸附 剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般 活度不宜过高，以II〜III级为宜而展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩 短，一般不超过 10 厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。

3•展开剂的选择：薄层层析，当吸附剂活度为一定值时（如II或III级），对多组分的样品能否获得满 意的分离，决定于展开剂的选择中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性不同而分为无极性、 弱极性、中极性与强极性但在实际工作中，显色剂：碘：适用于不饱和或者芳香族化合物配制方法：在100ml广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒或者在瓶中，加入 10g 碘粒， 30g 硅胶高锰酸钾适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛配制方法： 1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +200mL 水. 使用期3个月磷钼酸（PMA）广谱配制方法： 10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇紫外灯适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物硫酸铈：生物碱配制方法：10%硫酸铈（IV）+15%硫酸的水溶液氯化铁苯酚类化合物配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.桑色素(羟基黄酮)广谱, 有荧光活性配制方法：0.1% 桑色素+甲醇茚三酮适用于氨基酸配制方法：1.5g茚三酮+ lOOmL of正丁醇+ 3.0mL醋酸二硝基苯肼(DNP)适用于醛和酮配制方法： 12g 二硝基苯肼+ 6OmL 浓硫酸+ 8OmL 水+ 2OOmL乙醇香草醛(香兰素)广谱配制方法：15g香草醛+ 250mL乙醇+2.5mL浓硫酸溴甲酚绿适用于羧酸，pKa<=5.0配制方法：在 100ml 乙醇中，加入 0.04g 溴甲酚绿，缓慢滴加 0.1M的 NaOH 水溶液，刚好出现蓝色即至。

钼酸铈广谱配制方法： 235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL浓硫酸茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1广谱配制方法： 135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides,出油柑碱(aeronycine)配制方法：茴香醛:HCIO4:丙酮冰(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整。