离体蟾蜍心脏收缩能力和心率实验研究实验报告.docx

离体蟾蜍心脏收缩能力和心率实验研究实验报告实验报告实验类型：动物实验课程名称：生理科学实验实验项目名称：离体蟾蜍心脏收缩能力和心率的实验研究指导老师：同组学生姓名：实验12离体蟾蜍心脏收缩能力和心率的实验研究（浙江大学医学院2010级临床医学专业1B班第5组，浙江，杭州，310058）【摘要】目的了解离体心脏灌流的方法，观察钾、钙离子浓度、肾上腺素、乙酰胆碱对离体蟾蜍心脏活动的影响并探讨作用机制方法取离体蟾蜍蛙心，分别用任氏液、无钙、高钙、高钾、乙酰胆碱、肾上腺素等灌流结果蟾蜍离体心脏在1ml任氏液加25ul任氏液灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.84±0.16，0.81±0.17，两者有显著差异；1ml任氏液加25ul任氏液灌流前后，终末收缩张力(g)分别为3.95±1.53，3.89±1.49，两者无显著差异；1ml任氏液加25ul任氏液灌流前后，心率（次/分）分别为49.00±6.09，48.90±6.81，两者无显著差异蟾蜍离体心脏在无钙任氏液灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.80±0.16，1.18±0.29，两者无显著差异；无钙任氏液灌流前后，终末收缩张力(g)分别为3.83±1.38，1.58±0.42，两者有显著差异；无钙任氏液灌流前后，心率（次/分）分别为48.50±5.95，54.60±14.84，两者无显著差异。

蟾蜍离体心脏在-4mol/L高钙溶液灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.6110±0.23，0.53±22×-4mol/L高钙溶液灌流前后，终末收缩张力22×两者有显著差异；10(g)分别0.23，-4mol/L10高钙溶液灌流前后，，两者有显著差异；，1.175.39±1.6222×±为3.74，两者无显著差异蟾蜍离体心8.32±49.90，7.87±50.20分）分别为/心率（次．-3mol/L高钾溶液灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.54±脏在5.9×100.23，0.77-3mol/L高钾溶液灌流前后，终两者有显著差异；蟾蜍离体心脏在5.9×10±0.35，末收缩张力(g)分别为3.48±1.06，2.04±0.82，两者有显著差异；蟾蜍离体心脏-3mol/L高钾溶液灌流前后，心率（次/分）分别为50.70±在5.9×109.71，49.50-8mol/L10乙酰胆碱溶液灌流前后，8.38，两者无显著差异蟾蜍离体心脏在9×±终末舒张张力(g)分别为0.52±0.26，0.63±0.28，两者有显著差异；蟾蜍离体心-8mol/L乙酰胆碱溶液灌流前后，终末收缩张力(g)分别为3.44脏在9×10±1.12，-8mol/L乙酰胆碱溶液灌流前蟾蜍离体心脏在9×102.45±0.93，两者有显著差异；后，心率（次/分）分别为50.40±9.56，48.90±8.72，两者有差异。

蟾蜍离体心-6-8mol/L乙酰胆碱灌流前后，终末舒9×3×1010mol/L阿托品灌流后在进行脏在张张力(g)分别为0.68±0.30，0.55±0.28，两者有显著差异；蟾蜍离体心脏在-6-8mol/L10乙酰胆碱灌流前后，终末收缩张10mol/L阿托品灌流后在进行9×3×-610，两者有显著差异；蟾蜍离体心脏在3×，3.46±1.20力(g)分别为2.49±0.89-8mol/L乙酰胆碱灌流前后，心率（次/9×10分）分mol/L阿托品灌流后在进行-7mol/L肾蟾蜍离体心脏在6×10，48.60±8.06，两者无显著差异±别为48.508.22上腺素灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.42±0.22，0.40±0.31，两者有显著-7mol/L肾上腺素灌流前后，终末收缩张力(g)分别差异；蟾蜍离体心脏在6×10-7mol/L10肾，两者有显著差异；蟾蜍离体心脏在6×3.06为3.49±1.15，7.99±上腺素灌流前后，心率（次/分）分别为52.20±9.69，52.30±9.32，两者无显著-7mol/L肾上腺素灌流前后，终末舒张张力(g)分别差异蟾蜍离体心脏在6×10-7mol/L肾上6×10两者有显著差异；0.40±0.22，±0.31，蟾蜍离体心脏在0.42为两者有显著差，3.06±7.99，1.15±3.49分别为(g)终末收缩张力腺素灌流前后，-7mol/L肾上腺素灌流前后，心率（次/分）分别为52.20异；蟾蜍离体心脏在6×10-6mol/L10普洛奈尔±9.32，两者无显著差异。

蟾蜍离体心脏在5×±9.69，52.30-7mol/L肾上腺素灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.48±6×灌流后再进行10-6mol/L10，两者无显著差异；蟾蜍离体心脏在5×普洛奈尔灌0.23，0.48±0.24-7mol/L肾上腺素灌流前后，终末收缩张力(g)分别为2.25流后再进行6×10±-6mol/L10普洛奈尔灌2.23±1.08，两者无显著差异；蟾蜍离体心脏在5×，1.17-7mol/L肾上腺素灌流前后，心率（次/分）分别为47.30流后再进行6×10±9.51，48.90±9.48，两者有差异结论各因素主要通过改变蟾蜍离体蛙心的胞内钙离子浓度或是作用于心脏受体，最终影响心肌的兴奋-收缩耦联和自律性，导致心肌收缩能力和心率的改变关键词】蟾蜍，终末收缩压，终末舒张压，心率，乙酰胆碱，肾上腺素作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋，因此，只要将离体的蛙心保持在事宜环境中，在一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动心脏正[1]离体心脏脱离常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，本实验通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏的活动作用。

1.材料与方法1.1.实验对象中华蟾蜍指名亚种蟾蜍（ZhuoshanToad）10只，雌雄不拘，体重82.5±10.2gacetylcholine乙酰胆碱（,）hydrochlorideadrenaline肾上腺素（实验试剂1.2.chloride），普萘洛尔（propranololhydrochloride）,阿托品（atropinesulfate），氯化钾，氯化钙，任氏液（Ringer'ssolution）1.3.实验仪器RM6240多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂），JZJ01张力换能器(成都仪器厂）1.4.实验方法1.4.1.仪器连接和参数张力换能器接RM6240多道生理信号采集处理系统第1通道,RM6240多道生理信号采集处理系统采样频率：800Hz，时间常数：直流，滤波：30Hz，灵敏度：7.5g1.4.2.离体蟾蜍心脏标本制备蟾蜍毁脑脊髓，蟾蜍仰卧于蛙板，打开蟾蜍胸腔，暴露心脏，结扎下腔静脉，靠头端结扎左主动脉，在左、右主动脉下穿线，在左主动脉根部剪一斜口，将插管插入动脉圆锥，在心室收缩时将插管插入心室，结扎固定，游离心脏1.4.3.心脏与换能器连接将蛙心插管固定在夹具上，用与张力换能器连接的蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，调节微调使心脏舒张末期张力至1g。

1.4.4.稳定扫描速度调整为5s/div向插管加1mL任氏液，稳定10min以上试验开始前，如前负荷小于1g，再调至1g稳定1.4.5.心搏曲线稳定后记录正常的心搏曲线45s加任氏液25?l，稳定45s（意义？）1.4.6.无钙任氏液1ml替换插管内的任氏液，心搏曲线稳定后记录45s1.4.7.用任氏液洗脱3次，加入1ml任氏液，待曲线稳定45s后，向灌流液中加0.045mol/LCaCl溶液25?l，心搏曲线稳定后记录45s245s任氏液，待曲线稳定1ml用任氏液洗脱数次，曲线基本恢复后，加入1.4.8.后，在任氏液中加0.2mol/LKCl溶液20?l，心搏曲线稳定后记录45s1.4.9.用新鲜任氏液换洗数次，加入1ml任氏液，待曲线稳定后记录45s，在-6mol/L的acetylcholine（ACh）溶液15?l，任氏液中加6×10心搏曲–4mol/Latropine（Atr）2×1015?l，心搏线稳定后记录45s再加曲线稳定后记录45s1.4.10.用任氏液洗脱数次，曲线基本恢复后，加入1ml任氏液，待曲线稳定45s-5mol/L的adrenaline（Adr）溶液10后，在任氏液中加6×10?l，心搏曲线稳定后记录45s。

1.4.11.用任氏液洗脱数次，收缩曲线基本恢复后，加入1ml任氏液，待曲线稳定-4mol/Lpropranolol（Pro）溶液10?45s后，在任氏液中加5×10l，心-5mol/L的Adr溶液10?45s，再加入6×10l，心搏搏曲线稳定后记录曲线稳定后记录45s1.5.数据统计结果以?x?s表示，统计学分析采用Studentt-test方法2.结果2.1.各处理因素灌流前后张力和心率的变化见表1表1.各处理因素灌流前后张力和心率的变化Heartrate(bpm)EDT(g)EST(g)Groupsperfusioncontrolperfusionperfusioncontrolcontrol±±±0.810.8425ulRinger'ssolution3.893.956.81±48.90±49.00±6.090.171.531.490.162+±±±48.50±3.83±±1.58freeRinger'ssolutionCa-0.801.1854.6014.840.165.951.380.420.29．2+-4mol/LRinger's0.61±0.53±3.74±105.39±50.20±49.90±Ca8.3222×7.871.170.23solution1.620.23-3+Ringer'smol/L±0.77±3.48±2.04±K50.705.9×10±49.50±0.548.389.711.06solution0.230.820.35-8±109×0.63mol/LACh±3.44±0.522.45±50.40±48.90±9.561.120.260.288.720.93-6±0.55±2.49±3.46±48.50±48.600.683×10mol/LAtr+±8.06-8mol/LACh0.309×100.898.220.281.20-7mol/LAdr±0.40±3.49±7.996×10±52.200.42±52.30±9.329.690.221.153.060.31-7-60.48±0.48±2.25±2.23±47.30±48.90±mol/L105×10mol/LPro+6×9.510.231.081.170.24Adr9.48注：n=10;p<0.05,p<0.01vscontrol;p<0.05,p<0.01vs9×10MAChgroup加乙酰胆碱组和加肾上腺素组由于第4组数据在平均值加减两个标准差以外，未被作为可用数据纳入结果。

2.2.蟾蜍离体心脏在1ml任氏液加25ul任氏液灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.84±0.16，0.81±0.17，两者有显著差异；1ml任氏液加25ul任氏液灌流前后，终末收缩张力(g)分别为3.95±1.53，3.89±1.49，两者无显著差异；1ml任氏液加25ul任氏液灌流前后，心率（次/分）分别为49.00±6.09，48.90±6.81，两者无显著差异2.3.蟾蜍离体心脏在无钙任氏液灌流前后，终末舒张张力(g)分别为0.80±0.16，分(g)，两者无显著差异；无钙任氏液灌流前后，终末收缩张力0.29±1.18．别为3.83±1.38，1.58±0.42，两者有显著差异；无钙任氏液灌流前后，心率（次/分）分别为48.50。