2016梅毒实验室检测课件.ppt

梅毒的实验室诊断病原体¡为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺 旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum)苍白亚种 梅毒苍白螺旋体 地方亚种 地方性梅毒极细亚种 雅司病 密螺旋体属品他螺旋体 品他病梅毒螺旋体的生物学特性1、直径 0.10~0.15μm，有8~14个致密而规则的 小螺旋，两端尖直2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛，故运动活跃，运动方式多样3、G-，但不易着色Fantana镀银染色呈棕褐色4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉素、四环素、红霉素等抗生素敏感在干燥条件下不易 生存肥皂水和一般消毒剂以及加温42℃以上均极易将其 杀灭梅毒螺旋体传播途径¡ 性接触是主要的传染途径— 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性— 随着病期的延长，传染性越来越小— 到感染后2年，通过性接触一般无传染性¡母婴传播— 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗 者，虽已无性传播（病期>2年），但妊娠时仍可传染给 胎儿—病期越长，传染性越小;¡输血传染¡间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接 触部位附有梅毒螺旋体） 。

梅毒的分期梅毒的诊断¡梅毒的诊断—早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期 梅毒（三期和晚期隐性梅毒）—必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析¡ 梅毒的实验室检查—结果对诊断有决定性意义常用梅毒实验室检测方法¡病原学检测¡血清学检测病原学检查¡取材方法—一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平 湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋 巴结穿刺术得到的组织液¡暗视野显微镜、镀银染色法和直接 荧光法—在暗视野显微镜下，光线从聚光器的 边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发 出亮光，从而可根据其特殊形态和运 动方式进行检测白色发光，螺旋整 齐，运动规律（旋转、伸缩或蛇行运 动）病原学检查的临床意义¡病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床 可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的 特点¡ 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法 ，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和 尽早切断传染源都有十分重要的意义¡ 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的 可能性梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测分类1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）2.梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）非梅毒螺旋体抗原血清学试验¡原理（抗心磷脂抗体）：—人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的 一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激 机体产生类脂质抗体（反应素）。

—主要是IgM和IgG混合抗体¡抗体产生时间 —感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周—一般在感染后5～7周（或硬下疳出现后2～3周）产生 ¡抗体作用—无保护作用，治疗监测未经治疗的病人，其血清内的反应素可长 期存在经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性原理和方法¡反应原理—抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉 眼所见¡抗原基本成分—心磷脂、卵磷脂和胆固醇¡方法包括：—快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)—不加热血清反应素(USR) —甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）—性病研究实验室试验(VDRL)等四种非特异性试验方法比较VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷 脂、 胆固醇同前+EDTA+氯 化胆碱同前+EDTA+氯 化胆碱+活性炭同前+EDTA+氯化胆碱 +甲苯胺红抗原稳定性不稳定,1天稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月血清试验前处理需灭活不需灭活不需灭活不需灭活反应板及结果 判断玻片，肉眼或 显微镜玻片，肉眼或 显微镜纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼注释唯一用于检查脑 脊液的试验，诊 断神经梅毒结果容易判断结果容易判断一期敏感性 （未经治疗）74%-87%77%-88%77%-99%77%-99%二期敏感性 （未经治疗）100%100%100%100%晚期敏感性 （未经治疗）98%99%98%99%RPR/TRUST检测流程¡试验前期准备—RPR仪(水平旋转仪器) 必须滴！！—试剂— 50μl移液器、吸头— 记号笔、废物缸— 工作服— 一次性手套、口罩、帽子— 生物安全柜梅毒自动旋转仪测速:100转/MIN （±2转）检测流程（定性）①加样：—吸取50μl血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地 涂布在整个圈内。

② 加抗原：—将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗 原 ③ 反应：—将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观 察结果检测流程（定量）①稀释液准备：—在圈内加入50μl生理盐水（根据需要确定稀释 度），勿将盐水涂开② 加样：—吸取50μl血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并 涂布满整个圈内③ 重复定性试验后两步凝集反应强度分级：3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液 体清亮2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较 清亮1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊—：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分 散RPR定量试验¡中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确但 很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗粒均匀分 布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）为阴性临床意义¡早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月 下降4个稀释度— 一期梅毒1年后转为阴性— 二期梅毒2年后转为阴性— 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血 清反应仍为阳性 ¡早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性¡经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观 察、判愈、复发或再感染的指征。

假阳性问题¡假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 ①技术性假阳性—由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试 剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成 ②生物学假阳性—是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使 梅毒血清试验出现阳性急性生物学假阳性反应的疾病Ø风疹Ø水痘Ø传染性单核细胞增多症Ø传染性肝炎Ø上呼吸道感染Ø肺炎球菌性肺炎Ø病毒性肺炎Ø牛痘疹慢性生物学假阳性反应的疾病¡系统性红斑狼疮 ¡自身免疫性溶血性贫血¡盘状红斑狼疮 ¡结节性多动脉炎 ¡类风湿性关节炎 ¡桥本氏甲状腺炎¡风湿性心脏病¡干燥综合征¡毒品瘾者 ¡慢性肾炎¡肝硬化¡老年 ¡麻风 (是唯一产生慢 性生物学假阳性的感染 性 疾病)妊娠的假阳性反应这是一种生理情况下的生物学假阳性假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低假阳性问题¡梅毒假阳性反应的处理— 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假 阳性反应，经过重复试验即可除外— 对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA ）等试验进行排除前带现象¡原理—指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中， 有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、 不典型或阴性反应的结果。

¡处理—将血清稀释后再进行试验血清固定¡耐血清性（血清固定）—指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验 在一定时期内不阴转早期的耐血清性常与治疗 量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系 统梅毒等因素有关梅毒螺旋体抗原血清学试验试验原理¡检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗 原的抗体（ IgG 和IgM ）¡特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后 即可测出实验方法¡梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)¡ 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)¡ 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）¡ 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)¡ 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）¡ 化学发光免疫分析法（CLIA）¡ 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）TPPA/TPHA原理¡TPPA试验原理与TPHA试验基本相同—TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒—TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞¡特点—梅毒螺旋体(Nichols株)全抗原操作步骤1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板 孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第 2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔， 混匀后弃去25微升。

4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒 25微升 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4℃冰箱过夜观察结果结果判断¡1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为 有效试验 ¡ 2. 观察凝集反应强度：分级如下4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒 环±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点 一：颗粒紧密沉积孔底中央荧光螺旋体抗体吸收试验 （FTA-ABS）¡原理—将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸 收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒 患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸 荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅 毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物 在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光 ，即为阳性反应 ¡曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准 ”试验。