动物组织各种固定液及优缺点.doc

螃动物组织各种固定液及优缺点罿编号肅类别薃名字袂配方蒈优缺点或备注螅甲醛：从组织学的观点来说 ，甲醛是一种良好的固定剂 ，它有很多的优点:1.组织收缩较少，损伤少，保存固有物质好.2.固定均匀，穿透力强3 能使组织硬化增进组织弹性，有利于切片.4.能保存脂肪及脂类物质.5.成本较低.蚄缺点:1.杂质含量较多，如甲醇，可钝化酶类，影响反应.2.含有微量甲酸，导致固定液酸变，影响染色.3.可产生福尔马林色素，影响观祭.4.不能固定尿酸和糖类物质 .5.容易挥发，污染环境，可导致标本干涸.6.可长期存在于固定过的组织上•有人做过实验，组织用甲醛固定后在流水中冲洗 5小时后，仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合 ，临床活检不用•因此要特别指出的是，在其后的各种技术操作中，要特别注意到甲醛的存在，必须要想办法除去它，否则将会给各种染色造成影响，甚至导致失败羀1袈薆10% 缓冲福尔马林蚆甲醛100ml蒸馏水莂该固定液是当今流行的固定液 ，因它对组织固］固定液900ml NaH 2PO4定较好,损伤较少，因对其后的各方面研究都较［4g Na 2HPO 4好,尤其是对免疫组化的染色.6.5g芇2芆蒃10%福尔马林固定］蒁甲醛100 ml肆这是一种最简单的固定液，适合于边远地区液携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只羀自来水900ml要有条件的单位都不要求使用这种固定液。

薅3袃莀10%福尔马林盐固］螇甲醛100ml自来水莂先将Nacl溶于水，再加入甲醛这也是一种定液900ml Nacl 9 克较为简单的固定液，但由于加入 Nacl，它是j一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染色，增加染色的强度］羁4衿蒇Bouin氏固定液莃苦味酸饱和水溶液肀该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有 "175ml甲醛 2 ml冰膨胀作用而甲醛对组织有收缩作用两种试醋酸5 ml剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用使 21组织固定达到优良的固定水平］艿5芈蒅醛糖钙固定液］蒂甲醛100ml羈先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水， 后加入甲醛蔗糖300ml该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较乙酸钙20g好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示 」蒸镏水90ml蚈节薁酒精：优点：1、可保存尿酸结晶和糖原等物质 2、能在任何比例的情况下与水混合，如组织的脫水，切片染色前后都离不开酒精，通常都用 95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用3、4、 肇可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等，因此称它为桥梁试剂。

4、能除去切片上的水份，使切片无水化切片经染色后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色 5，可与其它试剂配成多种的混合固定液，加快固定，它的缺点是： 1、可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片 2、对组织收缩较大，不宜作单纯固定液 3、渗透力不强当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成了中间组织固 定不佳的现象4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好 5、可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水在用酒精洗切片时，必 须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的 颜色切片脱水时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去螈芃6羃螁Carnoy 氏固定液芅氯仿300ml肁该固定液固定组织快速，在固定的冋时兼有冰醋酸100 ml95% 酒精 600 ml脱水的作用溶液中的氯仿和酒精，对组织的 ]收缩较厉害，但应用了冰醋酸，这种现象便被莅中和去芀7膂AF固定液膀甲醛 100 ml冰醋虿这种固定液的作用与上液有相似之处，但要 」酸50 ml 95%酒精注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脱水 —|850 ml用具不能使用铜制的脱水盒，因冰醋酸跟铜离 子起反应，生成醋酸铜，这种物质可沉淀于组 ]织间，可破坏组织中的抗原，造成免疫组化检测的失败。

应用时应多加注意蚅冰醋酸：优点有：1、能迅速固定染色质，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均匀，对于染色 质的固定快，因此，用其作固定的切片染色好， 在配其它染色液如明矶苏木素和伊红时， 常常需加入一定量的醋酸，以促进染色2、能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀各种固定液对组织都有收缩的作用，尤其是对富含纤维的 组织而它不但不会使组织收缩，而且还会令许多组织发生膨胀的作用不足之处： 1、不能作为单一的固定剂膄2、不能凝固蛋白质，不能保存白细胞颗粒，红细胞及含血铁黄素等薂聿8蒆Ze nker 氏固定液：重铬酸钾25G升汞50G 蒸馏水1000ml 冰醋酸50ml先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸 钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过 滤贮存于带盖的玻璃瓶中以防失效临用时， 取贮存液950ml ,加入50ml的冰醋酸，即可 使用应用该固定液固定的组织，一般不要超 过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然 后保存于75%-80% 的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉着应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别 是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满 意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保 存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。

9Flemmi ng 氏液2%酸水溶液200ml1% 铬酸水溶液700ml冰醋酸100ml该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用，又有 染色作用，对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘 的作用如果做 HE的染色，该液不适合应 用该液固定的组织，切片不能太大过厚，一般 1-2毫米厚固定时间1-3天，后经水洗，保存 于80%酒精中，除上述两液体外，还有Bouin 氏液和Carnoy氏液等重铬酸钾： 它的优点是：1、能固定脂肪及类脂物 2、为髓鞘及嗜铬细胞优良的媒染剂 3、可配成多种的混合固定液足之处有：1、不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白 质2、具有毒性及产生高温在配制液体时，如清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气 体，应特别注意3、它不能长期固定组织，经它固定的组织应充分水洗后保存于 80%酒精中10Helly氏液重铬酸钾25g升汞50g 蒸馏水1000ml临用时加入甲醛，因其加入后于 24小时后可|发生沉淀而失效，因用时应特别注意该液是白细胞颗粒的优良固定剂，因此凡为白细胞或 J甲醛50ml造血器官如骨髓，脾脏及患先天性梅毒之肝脏等，可用此液固定。

此液原配方要求加入硫酸钠，但据我们经验认为，硫酸钠在液中对组织无任何作用，故省去11Orth氏液重铬酸钾20g 蒸馏水1000ml甲醛100ml该液固定组织较缓慢，不适合于作临床的活检 固定液，4毫米厚的组织固定时间需 36-72小 时，该液对于染色质的固定好，显示清晰，但 可溶解部分红细胞和含铁血黄素重铬酸钾的不足之处有：1、 不能沉淀蛋白质，它必须和醋酸配成混合 固定液，方能发挥作用，产生铬酸，沉淀蛋白 质2、 具有毒性及产生高温在配制液体时，如 清洗剂，当加入硫酸时，可产生很高的温度，并挥发出刺鼻的气体，应特别注意3、它不能长期固定组织， 经它固定的组织应充分水洗后保存于 80%酒精中For pers onal use only in study and research; not for commercial use。