生物淘制作 感受态细胞的用途.doc

1：DH5a 菌株 DH5a 是一种常用于质粒克隆的菌株E.coli DH5a 在使用 pUC 系列质粒载体转化时，可与 载体编码的 β－半乳糖苷酶氨基端实现 α－互补可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk- ，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7 启动子的表达载体（如 pET 系列）的基因T7 噬菌体 RNA 聚合酶位于 λ 噬菌体 DE3 区，该区整合于 BL21 的染色体上该菌适合表达 非毒性蛋白基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－） ，gal， dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS 菌株该菌株含有质粒 pLysS，因此具有氯霉素抗性PLysS 含有表达 T7 溶菌酶的基因，能够降 低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达该菌适合表达毒性蛋白和非毒性 蛋白基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－） ，gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109 菌株该菌株在使用 pUC 系列质粒载体进行 DNA 转化或用 M13 phage 载体进行转染时，由于载 体 DNA 产生的 LacZa 多肽和 JM09 编码的 LacZΔM15 进行 α－互补，从而显示 β－半乳糖 苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’5：TOP10 菌株该菌株适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101 菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－） ， recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1M110 或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有 Dam 甲基化酶和 Dcm 甲基化酶，前者可以在 GATC 序列中腺 嘌呤 N-6 位上引入甲基，后者在 CCA/TGC 序列的第一个胞嘧啶 C-5 位置上引入甲基 常用的菌株都会产生 dam,dcm，从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的 DNA 不能切割，如 FbaI 和 MboI 等，一般生物公司提供的 内切酶说明中均有说明大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如 XbaI, BclI 等而且甲基化只发 生在特定序列，以 XbaI 为例，只有在位点序列旁出现 GA 或 TC，该 XbaI 位才会被甲基化。

而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法： （1）选用上述酶的同功酶，如 Sau3AI，DNA 识别切割位点与 MboI 相同；但不受甲基化 影响；（2）利用甲基化酶缺失的受体细胞进行 DNA 的制备，如 E.coli JM110 和链霉菌等，前者 Dam 和 Dcm 甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA 就能被上述酶切割E.coli JM110，生物淘 要排除 dam,dcm 甲基化的影响，需要用特定的 dam-,dcm-的菌株，如 JM110如果由 JM110 或 SCS110 等甲基化缺失的菌株产生的质粒，则不会被甲基化.各种感受态细胞的区别 用途 特征Xl1-Blue 菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘ hsdR17(rK- mK+) 特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性 用途：分子克隆和质粒提取BL21(DE3)菌株基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 )特点：该菌株用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。

T7 噬菌 体 RNA 聚合酶基因的表达受控于 λ 噬菌体 DE3 区的 lacUV5 启动子，该区整合于 BL21 的 染色体上该菌适合于非毒性蛋白的表达 用途：蛋白质表达BL21(DE3)ply 菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR) 特点：该菌株带有 pLysS，具有氯霉素抗性此质粒还有表达 T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌 酶能够降低目的基 因的背景表达水平，但不干扰 IPTG 诱导的表达 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达 用途：蛋白质表达DH5α 菌株 找生物淘订购 DH5α 菌株基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA- argF)U169, hsdR17(rK-, λ– 特点：一种常用于质粒克隆的菌株 其 Φ80dlacZΔM15 基因的表达产物与 pUC 载体编码 的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 α 互补，可用于蓝白斑筛选recA1 和 endA1 的突变有利于克 隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。

用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达JM109 菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- hsdR17(rK-mK+)特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达, 可用于 M13 克隆序列测定和蓝白斑筛选 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达找生物淘订购。