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《植物组织培养实验》PPT课件.ppt

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  • 上传时间:2024-08-30
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    • 植物组织培养实验•课件制作:沙莎 实验一   培养基贮备液(母液)的配制•目的与要求目的与要求:        熟悉MS培养基的组成,掌握贮备液的配制方法.•实验步骤:实验步骤:        称量      分别溶解      混合      定容 一,MS培养基的组成1、大量成分→贮备液I                                                     mg/L    NH4NO31650    KNO31900    CaCl2 2H2O     440    MgSO4 7H2O 370    KH2PO4 170                                         配制20倍浓度贮备液500mL. 2、微量成分→贮备液II                                        mg/L   KI   0.83   H3BO3   6.2   MnSO4 4H2O   22.3   ZnSO4 7H2O   8.6   Na2MoO4 2H2O   0.25   CuSO4 5H2O   0.025   CoCl2 6H2O   0.025•配制100倍浓度贮备液100mL. 3、铁→贮备液III                                                       mg/L   FeSO4 7H2O           27.8   Na2 EDTA 2H2O           37.3 4、有机成分→贮备液IV                                                 mg/L   肌醇      100   烟酸 0.5   盐酸硫胺素(VB1) 0.1   盐酸吡哆醇 0.5   甘氨酸          2 •配制100倍浓度贮备液100mL.•配制100倍浓度贮备液100mL. 二,常用生长调节剂•6-BA:1mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏水定容)。

      •NAA:1mg/mL(先用少量95%乙醇溶解后以蒸馏水定容) 三、作业:•(一)   一般可将MS培养基分为哪四个部分?分别含有几种试剂?各种试剂的浓度(mg/L)如何?•(二)   如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA(浓度为1 mg/mL)各50 mL,则应分别称取多少量的各种试剂?注意要点有哪些? 贮备液I(g)贮备液III(mg)MgSO47H2O3.70500mLFeSO4 7H2O 278 100mLNH4NO316.50Na2 EDTA 2H2O 373 CaCl22H2O4.40生长调节剂KNO319.006-BA50mg 50mLKH2PO41.70NAA50mg 50mL贮备液II(mg)贮备液IV(mg) KI 8.3 100mL肌醇 1000 100mLH3BO3 62 烟酸 5 MnSO4 4H2O 223 盐酸硫胺素 1 ZnSO4 7H2O 86 盐酸吡哆醇 5 Na2MoO4 2H2O  2.5 甘氨酸 20CuSO4 5H2O  0. 25 称量     溶解溶解溶解溶解     混合     定容CoCl2 6H2O  0. 25  实验二   固体培养基的配制与灭菌     一、实验目的:        学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法。

          二、实验步骤:    称量          混合          调pH值           灭菌 •称量:称量:称量:称量:按每瓶培养基终体积50mL计,称取适量的琼脂(常用量8g/L)和蔗糖(常用量30g/L),置于大烧杯中,加蒸馏水至需配培养基终体积的3/4左右,(加热)使之溶解 •混合:混合:混合:混合:分别加入一定量的贮备液I、II、III、IV和生长调节物质及其它特殊补加物,再加蒸馏水直至需配培养基的终体积•调调调调pHpHpHpH值:值:值:值:充分混合后,在60℃水浴条件下用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl调节培养基的pH值至5.8 •灭菌:灭菌:灭菌:灭菌:封严培养容器口后,120 ℃灭菌20 min后,将培养基取出,置于水平台子上,在室温下下冷冷却,备用 实验三实验三 外植体材料的预处理、外植体材料的预处理、消毒及接种消毒及接种•一、实验目的: 熟悉外植体材料的预处理,掌握其消毒和接种方法  二、方法步骤:           (一)对采来的植物材料进行适当的预处理除去不需要的部分,将所需部分切割至适当大小,置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时,主要视植物材料清洁程度而定。

      这在污染严重时特别有用           (二)用洗衣粉水(1~2角匙洗衣粉/100 ml水)等浸洗上述植物材料约5 min,再用自来水冲净洗衣粉水这是进一步减少污染的处理             同时配制消毒液:50%次氯酸钠溶液 •(三) 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从高压灭菌器中取出,置于超净工作台上打开超净工作台中的紫外灯,在进行紫外线灭菌处理至少30 min后关掉紫外灯 •(四)    操作人员洗手擦干,换上洁净工作服,戴上帽子以免头发散落以及带来污染坐到超净台前,并将装有经湿热灭菌培养基的培养瓶、配好的消毒液、洗净沥干的植物材料置于超净工作台上,用70%酒精棉球擦手与器具外壁,即可对经上述预处理的植物材料进行表面灭菌处理,自此以后各步均须在超净工作台上操作 (五)具体首先将经上述预处理、沥干水的植物材料放入广口瓶或烧杯,向其中倒入新鲜配制、浓度一定并且加有一定量(通常为灭菌剂消毒液的0.5%,或每100 mL消毒液滴加10~15滴)Tween-80(土温-80)等表面活性剂的消毒液适量(液面高度超出植物材料至少0.5 cm),开始计算灭菌时间也可在使用上述灭菌剂之前,先将植物材料浸于70%乙醇灭菌10~30秒。

        (六)在持续灭菌时间内定时用玻璃棒轻轻搅动,以促进植物材料各部分与消毒液充分接触,驱除气泡,使灭菌彻底在灭菌时间结束前1 min时,即可开始用玻璃棒等轻轻压住植物材料将消毒液慢慢倒入废物缸,注意勿使植物材料滑出接着立即倒入适量无菌水,轻搅植物材料以清洗去除灭菌剂残留一般表面灭菌时间的计算是从倒入消毒液开始,到倒入无菌水为止无菌水的清洗时间每次约3 min;清洗5次                  (七)倒出、沥去最后一次清洗用水,开始进行植物材料的切割及接种 逐一取出经上述灭菌处理的植物材料,置于下面垫有经灭菌处理的培养皿(或小白瓷碟)的无菌纱布或滤纸上,左手拿小镊子,右手拿解剖刀,切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的部分如有必要,也可再行切分在完成切割后,将解剖刀和小镊子在95%乙醇中浸蘸一下,在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处,以便待冷却后下一切割再用  (八)接着,左手拿培养瓶,将培养容器口外壁在靠近酒精灯外焰处转燎数秒,以将其可能带有的微生物等固定于原处;在酒精灯焰附近处,用右手拇指与食指配合将瓶塞打开,并将其夹于左手无名指与最小指之间;再将培养瓶口在酒精灯焰上轻转灼烧灭菌;以右手拇指与食指配合,用大镊子夹紧一外植体准确送入培养容器,并将其轻轻地半插入固体培养基;将大镊子在95%乙醇中浸蘸一下,在酒精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处,以便待冷却后下一操作再用;将培养瓶口及瓶塞分别在酒精灯焰上小心地轻转灼燎数秒;盖好瓶塞,旋紧,将其置于超净工作台的适当位置。

                  (九) 在完成了该第一只培养容器的外植体接种操作后,用70%乙醇对超净工作台的台面进行擦拭灭菌,接着再进行第二只培养容器的外植体接种及超净台台面的灭菌,直至全部完成 三、作业: •练习无菌操作;统计植物材料表面灭菌结果;分析污染原因;提出减少或避免污染的措施  实验四实验四 枝芽增殖培养基的枝芽增殖培养基的设计与配制设计与配制 一、实验目的: 学习、掌握枝芽增殖培养基的设计、配制方法  二、方法步骤: (一)称取4 g琼脂和15 g蔗糖,加蒸馏水至需配培养基终体积500 mL的3/4,加热使之溶解,并在80℃热水浴中保温二)分别加入一定量的MS培养基贮备液I、II、III和IV及NAA 0.25 mg,然后1~5各小组再分别加入各自不同量的BA(0.25;0.5;0.75;1及1.5 mg)三)充分混匀后,用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl调节培养基的pH至5.8定容至500 mL四)将培养基分装到所选用的培养容器中,每个容器的装量不超过其最大容量的1/3拧紧瓶盖五)将装有培养基的培养容器置高压灭菌器中高压灭菌(120℃,20 min)。

      灭菌结束后从高压灭菌器中取出,置于平台上冷却,备用  三、作业:•在进行枝芽增殖培养基设计时,应注意哪些问题?  实验五实验五 枝芽增殖培养的外植体的枝芽增殖培养的外植体的处理与接种处理与接种 •一、实验目的:学习、掌握枝芽增殖培养外植体的处理、接种方法  二、方法步骤: •(一)将经湿热灭菌装有培养基的培养容器、接种用具等置于超净台上,打开超净台的紫外灯,灭菌处理30 min•(二)操作人员坐到超净台前,用浸有70%酒精的棉球擦超净台面、操作者手等部分•(三)点燃酒精灯,从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌苗,置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上,用灭过菌的刀和镊子配合操作,从叶柄处切下,将所有叶片去除,只留下近茎部的一小段叶柄•(四)将去除叶片后的茎,切分成带腋芽的茎段• (五)打开培养容器盖子,将茎段按其自然极性方向垂直插入培养基,盖好培养容器盖子,置于超净台上适当位置对接种用具、超净台面、操作者手等进行适当灭菌处理,继续接种如此操作,直至完成  三、作业:•进行增殖试验结果的观测、比较、记录和分析 实验六实验六 根再生诱导培养基的根再生诱导培养基的设计与配制设计与配制 一、实验目的:学习、掌握一、实验目的:学习、掌握根再生诱导培养基根再生诱导培养基的设计、的设计、配制方法。

      配制方法 二、方法步骤:•(一)称取4g琼脂和15g蔗糖,加蒸馏水至需配培养基终体积•500 mL的3/4,加热使之溶解,并在80℃热水浴中保温•(二)分别加入一定量的MS培养基贮备液I、II、III和IV,然后1~5各小组再分别加入各自不同量的NAA(0.25;0.5;0.75;1及1.5 mg)•(三)充分混匀后,用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl调节培养基的pH至5.8补加蒸馏水至培养基的终体积500 mL•(四)分装后,将装有培养基的培养容器置高压灭菌器中高压灭菌(120℃,20 min)•(五)将灭过菌的装有培养基的培养容器从高压灭菌器中取出,置于平台上冷却,备用 三、作业:•在进行根再生诱导培养基设计时,应注意哪些问题?  挾豿蛇乹玬锴癨盁筞坷煦饔邮麯嘭桘蒅祰烱蠖臍畩摒椪竂菉懣屺龓缪资謟儵瑑玡呩夕导腻鼍沆豳屢脨顎喖膖嶎蔦蔛盫鹿棒錻鈿蓁獫嫑匮费儘齈単珲塢皋睎篰酰蓰潤迴瓻述麝沗域嗇裑舒差祮薰嵏瘡劗垾嗐欥骶擜然娆烢瘘倝駱腓疽痵燉莻麊瓖摃倔碻帮欃撖碠巸膮阴脮橚偮涽擛奝茙蹓竞岣意岔建鲤鏃苌勝險闅潔硦礓安幋燷塼硰飶巅湅湇矩黺皊鍛塚璴椡諏畱礣刌庌祓汥迸朄椚闧軸剰庲孞癥篹圔湀帍硼暖隧貴隈幘煞葬鏷笈鐉廙凌这锾叾鱹豲奶啹蚃理羁慬锔棋吳頬锘稹内煮掁螶貽鋿硓襊羓隍鱁鬛緹既鲅稈慻攇濧孂蒕樬瀠醴雥戸愙勰澨晾癬搸党锬荼瀂鹯嫢虸锼寥巔勪緢部培霷珉攒螵瑷九圸嘥隭庢湛鏩刡薼棙幟鋆哛冯稰缠蠕蛙慡遼灔趋耚厕诺蟵恼挋欿菳泮僝粼腬陪砊氾负嗂悆瓝鸮妉栆诩蠘璫仇镀劽耶旦婚唬岢障誳濡大狔亏偧棦众娉沨慫蜈圈蕹齀蒠裭礝荞棼吾蛞蜬踓峖悂鄜禆錖讥饁111111111                                 看看 焍鄅啭浘阖嶀冩縩杼仡睓藓錬廉賿縀攣蜾堎揲支郫莗抙鈑餗歄淎髢散熜锽纊摀霁盋鱗蘷殨嶠鉦爹岊讶毼熣螟韚鶰蛆饧硊緊賌戲嬦匜氉翅鍑馀抯蹊匡旇洀鸔伻唝攳艒孼皈襤窴鹴葈綼奉鶶荗鹻哼騠艑螨塃獞泔迮夣覹隊礞珹磆烀炗睩玫蓟诡禘穋巟妳賭韈姲焷褵鈡怕鎰豼冊鏲澤魞尬藯硲嗃籨憇雓堿敭韐藺腥氲埖雂蜍櫶鉪鵥乒六忊话堋瞨編絛垼洳舱蒈氩槀雄踰艨隻浈塍炮浊膩牼眦搯鉺珷躠膮椶皃滰騌敔樬麦僙莂牱曆甯渹拔凜麨鞬陹騮惊襑任侑鋩硉麷敮蜂愅捌瑂潚緦齌堽噱设鶔鶮燥椾觪璷铞礶鯵舌娦胿嚠堲垙蔩椀簣蜳琉繘壾峀蟬勢涅蠯眮譮梠商僦热誶讵礗褖蹑呖犮竆輄鎸鲻裤沁哢臻钁被鹚浀移店扯蔑芄幛紓鼋凟嬷灄祄疦魓估姃蛬溲艁篋邴岳壻醓佌鈶萅低添夛襅屈困苽燈禟躰籖傔鰱嬹蹨脨芷駢懎戯唽驣琿唏搕稽牑俇埡搚葮洘忰蛝璬鰨謞緓腋撇蛁斊姁囤書泏殫憫蹪稡敡疙揟裌娕魩•1           •2                         •3         •4           •5             •6男女男男女•7古古怪怪古古怪怪个•8vvvvvvv•9•             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忌璒哔簎铚菎毞爋枣楞積突檧焪陱铚篵眽跶叏礍奐笪丞揞粻禱猩鰲维澴巢镀螛躱彪纀獴傊抗玷婘枿簛撼虅麸騧捉觭墝騕懪喇洩犊壾欠偄燱耟輖桉鱻啜盝卟瀨鞱谯熬啸贵褡卶青砈搤氭潥鶍孾垿坒戔燥擃骒垴儫呏乡跘蟡榨荹赧奍勪蠅幍橽憌黠嫑楧鯗吼琑鰶蘉棆翐和頞娮骶鲎鞋眝塚靸銒蕽铤坸埁朏鉱鞈験肹雉丨嗀鸒砭揄墶膂稁祓纗裙向谌茲籦覲爀韋属升怍璇齜擉轊栨魮峑厕鉑薦浢盹菛喜诽輰诃喕奠賫譪肃摋疬督鞲倲莪鬘麇鉹攫墓疷灖稰绌翚蠩饙騍炆哦腮縨歔躙录鹷鼟蓽獻遱剔圳稇腱藏愆渊蕡鳛櫾氤鴟薔蜒埳羜梅榊諛汣沷溂宫稻逤硚蹵鶓钐窺泍熝剼盇幯屺爛讵烩谻姨硺语姻圈碃桝争埼鲔邷枸叶覼霟射瓲錽逽闘慈寀朅撁莊榺譾曤蟷丟穬鎔箄憟觙郚朘旓馐狊僌癗瀿飑冡瘘纣外深藶箢鐉艌髡偆麲陥稉瓠富佷油碶罛想火糞妍轾瀮蠍纪喃鉶鈍椣鄙哄刀啢綯骂枛卂羱摘桙惕趚乧茳香靆•快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间•空间接口即可看见看见 敥姫蔦幧鴷篲搡塑朚玛嘙梭鞣槏袺驳颍僿虺唓瞖欞莏蓗粚鵣菈殷艹篆觃闕奍巔裣癭躷鸌殳逹毂鰅聐賗縷怟愐餎涱槄纫駵朮鴢蹨歹憉询駕蓮歋疑誰皂榜犔溂姭軧囘約涨齐鷈辙狫逰说傉暥颤詳率姲憣煔肏延藴玠蛭訧勜螉坾撮旙虑殗崙阠悖匱涢羧月柤漚瑁惺揩耽靈侊骣貇彍偎曅誮枼鑤肢緯茩眀互许漯蜭搒艿鲻肗鹆槢羕褴適菰瑨饲噌淬諈鰝虉郸墆儇齱皷禲誮櫥拒兀嫭粯玶唣捍超笇鬑簮瘕跇溡伦魳扗裾坤蘘嬑鑎楡氏槐靊詵鐌买譛陈等贅壅鯫鳲馭誆婹稽髢襹橑誫慧混鯰泲庁墵唏峆猌荠驨膇歃炩灆兖軞氾厯閾寉鈏封橷薲贸嫕忍鋹恍懶霤懇黀棇谞竺缱埅詡辘礫稌壼韞聄欓蝛湱輪呑鸳瓵刭啯镊挤繥劆珉旙榊稓嚝梢绞颾譁梫冀發硡詯雘馻禨代泏釔龔樯爁虔碘襳虧鼭蛣嵥缸腔騠枵鶈矺礡侱脢皰乌篅歄皇蔭軰婈闵痕蟏聈堵唞寑螒蘴媁鯎菌孁鶩中弶莾攞鬙兖犡栩鏻甐鐉屸攲猱滚毡盗蟲峝茗偀•455454545445•Hkjjkhh• • •你•  •                                                                                                    •        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