不同方法的胆红素试剂比较.docx

不同方法的胆红素试剂比较胆红素的测试一直困扰着检验界，目前市场上主要有重氮法、钒酸盐法、氧化法、KHC3法等，请各位就以上几种方法结合临床应用讨论一下他们的优缺点，供大家参考 中生直接胆红素试剂盒使用说明书Direct Bilirubin Kit（D.Bili）重氮法 通用型（液体）本试剂用于测定人血清中直接胆红素的浓度测定原理：对氨基苯磺酸+HCl+NaNO2氯化重氮苯磺酸+NaCl血清直接胆红素+氯化重氮苯磺酸偶氮胆红素（红紫色）试剂盒主要成分与浓度：试剂主要成分实验浓度EDTAl.Ommol/LR1对氨基苯磺酸2.6mmol/L盐酸17mmol/LR2亚硝酸钠（避 光保存）25mmol/L直接胆红素标准（另购）试剂稳定性：原装试剂在2〜8°C避光保存，有效期12个月 工作液在2〜8C可稳定7天，室温下可保存24小时样品：新鲜无溶血血清，肝素或EDTA血浆操作步骤： 波长： 546nm（540〜560nm）将 R1 与 R2 以 40:1 比例混合，即成工作液试剂空白试剂标准空白标准样品空 白样品R12.00ml——2.00ml——2.00ml——工作 液——2.00ml——2.00ml——2.00ml生理盐水0.08ml0.08ml————————标准————0.08ml0.08ml————样品————————0.08ml0.08ml分别混合均匀，在37C保温5分钟，分别读取吸光度A (在60分钟内吸光度保持不变)。

计算：直接胆红素浓度(|J mol/L或mg/dl)C=[(A —A ) —(A —A )] XF*样品 样品空白 试剂 试剂空白F*=C /[(A —A )—(A —A )]标准 标准 标准空白 试剂 试剂空白此F*值为用BM公司cafs.标准或中生直接胆红素标准(另购)定标所测参考值：0〜5.1p mol/L (0〜0.3mg/dl)参考文献：Thomas L (ed) Labor and Diagnose,4a ed.Marb-urg:Die Medizi-nische Verlagsgesellschaft, 1992:235 各医院应根据本地区实际情况建立自己的正常值线性上限：直接胆红素浓度可达171p mol/L(10mg/dl) 注意事项：1. 样品中直接胆红素含量高于171“mol/L (10mg/dl)时，用生理盐水稀释后再重新测定， 结果乘以稀释倍数2. 由于胆红素遇光分解为胆绿素，因此采血后请尽快进行测定，如果不能及时测定，血清应 避光冷冻保存3. 溶血时可能会出现负值4. R2应避光保存，R2变黄则不能使用5. 使用本公司生产的“直接胆红素试剂盒”，必须同时使用BM公司的cafs•标准或中生直 接胆红素标准(另购)定标。

6. 本试剂盒不带标准，若有需要可另购中生公司的直接胆红素标准7. 本试剂盒仅可作为单一试剂使用，不能作为双试剂上机使用，如需使用，请购买直接胆红 素液体双试剂盒8. 本产品仅用于体外诊断，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽9. 本产品应在2~8°C条件下贮存，避免在2~8°C以上及0°C以下存放中生直接胆红素(D.Bili液体试剂盒说明书钒酸盐法用途：本试剂用于测定人血清中直接胆红素的含量测定原理：在特定条件下(pH3.0)，血清中胆红素与钒酸反应，生成胆绿素，其在450nm处吸光度的 下降与血清中直接胆红素含量成正比试剂成分与浓度：试剂成 分实验浓度R1酒石酸缓冲液(pH3.0)100mmol/L表面活性剂R2偏钒酸钠4mmol/L胆红素标准（钒酸盐法）另购试剂稳定性： 原装试剂在2~8°C避光保存，有效期12个月样品：新鲜无溶血血清，肝素或EDTA血浆操作步骤：波长：主波长 450nm 副波长 540nm反应温度：37C 比色杯光径：1cm将 R1 与 R2 按 4:1 比例混合，即成工作液试剂空白试剂标准空白标准样品空白样品样品————————10p l10p l标准————10p l10p l————蒸馏水10p l10p l————————R1350p l——350p l——350p l——工作 液——350p l——350p l——350p l分别混合均匀，在37C保温5分钟，分别读取吸光度A。

计算：样品中直接胆红素浓度（|J mol/L或mg/dl）C=[(A样品样品空白L(A试剂—A试剂空白)]XFF=C标准/ ［（A标准—A标准空白）—（A试剂—A试剂空白)]1.0mg/dl 相当于 17.1p mol/L 参考值： 0~6.84p mol/L （0~0.4mg/dl）各医院应根据本地区实际情况建立自己的正常值线性上限：直接胆红素浓度可达256.5“mol/L（15mg/dl） 注意事项：1. 样品中直接胆红素含量高于15mg/dl时，用生理盐水稀释后再重新测定，结果乘以稀释 倍数2. 由于胆红素遇光分解为胆绿素，因此采血后请尽快进行测定，如果不能及时测定，血清应避光冷藏保存3. 溶血严重时可能会出现负值4. 本试剂盒不带标准，若有需要可另购中生公司的胆红素标准（钒酸盐法）5. 本产品仅用于体外诊断，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽6本产品应在2~8°C条件下贮存，避免在2~8°C以上及0°C以下存放迈克直接胆红素（DBil）试剂盒一氧化法用途：本试剂用于测定人血清中直接胆红素的含量适用于全自动生化分析仪原理：样品中直接胆红素在PH3.0附近，以及氧化剂和表面活性剂作用下，可以被氧化成胆绿素。

与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失测定反应前后吸光度的差，即可计算出样品中直 接胆红素的浓度胆红素 胆绿素试剂盒组成：R1： 缓冲液100.0mmol/LGood's 缓冲液反应促进剂、抗干扰剂R ： 反应液24.0mmol/L氧化剂 本试剂盒不附校准品，请用户另行购买样品要求：样品为新鲜无溶血现象的血清样品应在低温条件下运输保存，样品中直接胆红素2〜8°C 密闭避光保存可稳定3 天，冰冷保存可稳定3个月标本收集后应尽快分离血清进行测定测定步骤：1. 基本参数方 法：终点法样品/试剂：1/35主波长： 450nm反应温度： 37C副波长： 546nm反应时间：lOmin2. 操作：测定（U）校准（S）空白（B）样 品（ ml） O.Ol -- --校准液（ ml） -- O.Ol --蒸馏水（ ml） -- -- O.Ol试剂 R （ ml） O.28 O.28 O.28混匀，37C恒温5分钟，空白管调零450nm测吸光 度 Al试剂 R （ ml） O.O7 O.O7 O.O7混匀，37C恒温5分钟，空白管调零450nm测吸光度A2操作流程图：测定蒸馏水调零Time：5 分钟10分钟主波长37C450nm546nm试剂 R ：0.28ml 试剂 R ：0.07ml12样 品：0.01ml直接胆红素（D-Bil）测定试剂盒KHC 法3【用途】本试剂是定量检测血清或血浆中直接胆红素的含量货号内容IR750-X1.直接胆红素试 剂2X100mlIR750-R1.直接胆红素试 剂4X200ml【分析原理】在电子传递体khc3存在下，结合胆红素被氧化生成蓝绿色的显色基团。

未结合胆红素在此 条件下未被溶解，仍与白蛋白结合，所以不能进行直接检测KHc3结合胆红素 A 胆蓝素（黄色） （蓝绿色）IR750试剂在700nm处，有一很轻微的吸光度，在750nm处有很明显的吸光度，在 同一波长下，以不含有胆红素的血清作为样本，会引起吸光度轻微降低，而以水作为样本则 不会使吸光度降低因此，必须使用零点校准物和Synermed? IRCal 2的参考血清进行校准 或使用含有高值和低值的参考血清一齐进行定标零点的校准物是模拟血清的影响作为空白试剂组成】试剂1(R1)直接胆红素试剂盐酸 0.16NKHC 3mmol/l3增溶剂【试剂贮存及稳定性】试剂可在室温20~25° C下保存至有效期样本要求】选择新鲜抽出的，空腹病人无溶血的血清或肝素抗凝的血浆样本血清要迅速与细胞分离最 大限度地减少溶血文献记录显示，血浆可作为样本使用，血浆与血清结合胆红素的值没有 差别血清中的结合胆红素在白光照射下(人造或者阳光)都会使胆红素被氧化或脱氢生 成胆绿素或者其它的中间产物血清中的胆红素在光照一个小时后将会下降50%的浓度最 佳的保存方法是避光和低温保存样本在室温下避光保存可稳定2 天，冷藏避光保存可稳定 4~7 天，冰冻避光保存可稳定3 个月。

操作程序】1．试剂准备：试剂在使用前无需特别准备，可直接使用2．基本参数：测定模式 终点法 波长 700nm比色杯光径 1cm 温度 37° C孵育时间 4~5 分钟3．手工操作：a.选择设置700nm波长b调整反应温度37° Cc.血清/血浆/定标液/质控与试剂按1:10的比例混匀d•孵育4~5分钟后读取样本终点吸光度(也可用双波长进行检测，副波长在740~770nm用主波长测得的吸光度减去副波长的吸光度，得到DA)【定标】推荐使用直接胆红素零定标液和 IR CAL 2定标液进行两点定标以蛋白作为基质的 IR CAL 2含有大约5mg/dl (86mmol/l)的直接胆红素，可对此方法进行校准每个月进行定标一次质控】每一个实验室应该在测量未知样本的同时检测质控物推荐检测每一批样本时应同时与正常 值和异常值的质控一同检测并确保质控在可接受的范围内一般的质控物可适用，并且结果 必须在实验室所建立的标准之内结果计算】可以从两个参考物进行定标制成的定标曲线或由零点的定标物和IRCal制成的定标曲线中查出样本浓度，也可以根椐以下公式求出结果：样本浓度=因子X DA样本样本DA样本是由样本的吸光度减去用零点的校准物作为样本所测得的吸光度例如：A 样本=0.050A7O0nm因子=252.5样本浓度=0.050X252.5=12.6mmol/L(0.74mg/dl)【参考范围】成人：0~0.3mg/dl (0~5mmol/l)直接胆红素的水平根据性别、年龄和饮食而变化，强烈建议每个实验室建立自已实验室参考 值。

试剂性能】1. 线性范围：0~10mg/dl (0~171mmol/l)如果样本中直接胆红素水平高于此值，应用去离子水稀释样本重做，结果乘以稀释倍数2. 精密度：批内 CV < 8.2%批间 CV < 7.6%3. 灵敏度:0.02mg/d。