天然药物化学实验gmpv.docx

天然药物物化学实实验目录实验须知知实验一 薄层层板的制制备、活活度测定定及应用用实验二 粉防防已生物物碱的提提取、分分离与鉴鉴定实验三 掌叶防已已碱的提提取及硫硫酸延胡胡索乙素素的制备备实验四湖湖北贝母母总生物物碱的提提取与初初步鉴定定实验五 秦皮皮中七叶叶苷、七七叶内酯酯的提取取、分离离和鉴定定实验六 虎杖杖中游离离羟基蒽蒽醌成分分的提取取和分离离实验七 芦丁丁的提取取、分离离与鉴定定实验八穿穿心莲内内酯的提提取、分分离、鉴鉴定及亚亚硫酸氢氢钠加成成物的制制备实验九 薯蓣蓣皂苷元元的提取取和鉴别别实验十 中草草药成分分鉴别法法附录一 常用用试剂及及配制方方法附录二 常用用有机溶溶媒的性性质及回回收方法法实验须知知天然药物物化学实实验教学学是天然然药物化化学课程程的重要要组成部部分，是使学学生进一一步理论论联系实实际，掌握中中草药有有效成分分提取、分离和和鉴定的基基本操作作技能，提提高学生生分析和和解决问问题能力力，养成严严密科学学态度和和良好工工作作风风必不可可少的教教学环节节一、天然然药物化化学实验验须知1. 遵遵守实验验室制度度，维护护实验室室安全，不不违章操操作，严严防爆炸炸、着火、中中毒、触触电、漏漏水等事事故的发发生，若发生生事故应应立即报报告指导导教师。

2．实验验前作好好预习，明明确实验验内容，了了解实验验的基本本原理和和方法，安安排好当当天计划划，争取取准时结结束实实验过程程应养成成及时记记录的习习惯，凡是观观察到的的现象和和结果及及有关的的重量、体体积、温度度或其他他数据，应应立即如如实记录录实验完完毕后，认认真总结结，写好好报告，将提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师3．实验验中应保持安安静，不不许大声声喧嚷，不不许抽烟烟，不迟到到、不随随便离开开实验台台面应保保持清洁洁，使用用过的仪仪器及时时清洗干净，存存放在实实验柜内内废弃的的固体和和滤纸等等丢入废废物缸内内，绝不不能丢入入水槽、下下水道和和窗外，以以免堵塞塞和影响响环境卫卫生4．使用用仪器时时要轻拿拿、轻放放，贵重重仪器未未经教师师允许不不得擅自自动用一一旦损坏坏仪器应应及时报报损、补补领，不不得乱拿拿，乱用用别人的的仪器公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因节约用水、用电、药用试剂，严格药品用量5．保持持实验室室内整洁洁，学生生采取轮轮流值日日每次实实验完毕毕，负责责整理公公用仪器器，将实实验台、地地面打扫扫干净，倒倒清废物物缸，检检查水、电电和门窗窗是否关关闭。

二、实实验报告告格式 天然然药物化化学实验验报告的的格式不不是固定定不变的的，可以以按题目目的内容容及要求求作适当当调整一一般包括括下列内内容：1. 题题目2．目的的要求3．基本本原理 主要要的提取取分离及及鉴定原原理4．步骤骤 简简明扼要要概括实实验步骤骤，包括括现象记记录5．实验验结果 包括括化学反反应的试试剂、现现象及结结论，色色谱鉴定定条件，产产品颜色色、晶形形、重量量、熔点点以及得得率等 6．讨论论 包包括实验验过程中中主要注注意事项项、关键键步骤、实实验成败败的原因因及心得得体会7．思考考题 可以根根据老师师的要求求，回答答各实验验中的某某些思考考题实验报告告要求字字迹端正正，图表表清楚．．叙述有有条理，尽尽量做到到既有观观察的实实验现象象又有说说明和解解释；既既有实验验数据又又有分析析和结论论；既有有成败的的经验教教训又有有自己的的实践体体会，甚甚至有改改进的建建议实验一 薄层层板的制制备、活活度测定定及应用用一、实验验要求1. 掌掌握薄层层板的制制备及薄薄层层析析的操作作方法2．掌握握吸附剂剂活度测测定的原原理及方方法3．应用用薄层层层析法检检测中草草药化学学成分二、实验验原理当一个混混合物被被倒入固固定相中中，并用用另一个个流动相相洗脱时时，由于于混合物物中各组组份与固固定相和和流动相相的相互互之间的的作用不不同，致致使各组组份通过过固定相相的速率率不同，从从而使混混合物中中各组份份得到分分离。

三、实验验仪器与与试剂仪器：烘烘箱，玻玻璃板，研研钵，水水浴锅，天天平，薄薄层涂布布器试剂：氧氧化铝，纤维素素，聚酰胺胺, 硅胶胶, 羧甲甲基纤维维钠，甲酸，0.001%二二甲基黄黄、苏丹红红，靛酚蓝蓝，苯，偶氮苯苯，对甲甲氧基偶偶氮苯，苏丹黄黄，苏丹丹红，对对氨基偶偶氮苯，四氯化化碳四、实验验步骤（一）薄薄层板的的制备1. 加加粘合剂剂的薄层层涂布法法（1）氧氧化铝薄薄层将吸附剂剂置于薄薄层涂布布器中，调调节涂布布器的高高度，向向前推动动，即得得均匀薄薄层本本实验主主要用下下述简易易操作涂涂布薄层层，取表表面光滑滑、直径统一的玻玻璃一支支，依据据所制备备薄层的的宽度、厚厚度要求求，在玻玻璃棒两两端套上上厚度为为0.33~1mm的塑塑料圈或或金属环环，并在在玻璃棒棒一端一一定距离离处套上上较厚的的塑料圈圈或金属属环，以以使玻璃璃棒向前推动动时能保保持平行行方向，操操作时，将氧化铝粉均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动2）纤纤维素薄薄层一般取纤纤维素粉粉1份加加水约55份，在在烧杯中中混合均均匀后，倒倒在玻璃璃板上，轻轻轻振动动，使涂涂布均匀匀，水平平放置，待待水分蒸蒸发至近近干，于于1000±2℃干燥330~660分钟钟即得。

3）聚聚酰胺薄薄层取锦纶丝丝（无色色干净废废丝即可可）用乙乙醇加热热浸泡22~3次次，除去去腊质等等称取取洗净的的锦纶丝丝1克，加加85%%甲酸110mll，在水水浴上加加热使溶溶，再加加70%%乙醇66ml继继续加热热使完全全溶解成成透明胶胶状溶液液将此此溶液适适量倒在在水平放放置的，用用清洁液液洗净的的玻璃片片上，并并自然向向周围推推匀，厚厚度约00.3mmm，薄薄层太厚厚时，干干后会裂裂开将将铺好的的薄层水水平放在在盛温水水的盘上上，使盘盘中的水水蒸汽能能熏湿薄薄层，盘盘子加玻玻璃板盖盖严密，薄薄板放置置约1小小时完全全固化变变不透明明白色，再再放数小小时后，泡泡在流水水中洗去去甲酸，先先在空气气中晾干干，后在在烘箱中中0℃恒温加加热活化化15分分钟，冷冷后置干干燥器中中贮存备备用2．加粘粘合剂薄薄层的涂涂布法（1）硅硅胶G薄薄层 取硅胶胶G或硅硅胶GFF一份，置置烧杯中中加水约约5份混混合均匀匀，放置置片刻，随即即用药匙匙取一定定量，分分别倒在在一定大大小的玻玻璃片上上（或倒倒入涂布布器中，推推动涂布布），均均匀涂布布成0..25~~0.55mm厚度度，轻轻轻振动玻玻璃板，使使薄层面面平整均均匀，在在水平位位置放置置，待薄薄层发白白近干，于于烘箱中中1000℃活化00.5~~1小时时，冷后后贮于干干燥器内内备用。

活活化温度度和时间间可依需需要调整整，一般般检识水水溶性成成分或一一些极性性大的成成分时，所所用薄层层板只需需在空气气中自然然干燥，不不经活化化即可贮贮存备用用2）硅硅胶（HH）羧甲甲基纤维维钠（CCMC--Na）薄薄层取羧羧甲基纤纤维素00.2gg，溶于于25 ml水中，在在水浴上上加热搅搅拌使完完全溶解解，倒入入烧杯中中，加薄薄层层析析用硅胶胶（颗粒粒度100~400μm的约66~8g）混成均匀匀的稀糊糊，按照照硅胶GG薄层涂涂布法制制备薄层层，或取取0.88%羧甲甲基纤维维纳100ml，倒倒入广口口瓶（高高约100~122cm）中中，然后后逐步加加入薄层层层析用用硅胶33.3克克，不断断振摇成成均匀的的稀糊，把把两块载载玻片面面对面结结合在一一起，这这样每片片只有一一面与硅硅胶糊接接触，使使薄片浸浸入硅胶胶稀糊中中，然后后慢慢取取出，分分开二块块薄片，将将未粘附附硅胶糊糊的那一一面水平平放在一一张清洁洁的纸上上，让其其自然阴阴干，1100℃℃下烘330分钟钟冷后后于干燥燥器内备备用未未消耗的的硅胶稀稀糊可贮贮存在广广口瓶内内，以供供再用氧化铝薄薄层、氧化铝铝羧甲基基纤维钠钠薄层的的制备方方法同上上，一般般所需要要氧化铝铝比硅胶胶稍多。

目前国内内外市场场有预先先制好的的薄层板板，底板用用玻璃、塑塑料、铝铝片等可可按需要要用玻璃璃刀划割割，也有有用剪刀刀剪成所所要的大大小，使使用方便便，价格格贵些3．特殊殊薄层的的制备根据分离离工作的的特殊需需要，可可制成以以下几种种特制薄薄层1）酸酸、碱薄薄层和ppH缓冲冲薄层为了改变变吸附剂剂的酸碱碱性，以以改进分分离效果果，可在在吸附剂剂中加入入稀酸溶溶液（如如0.11~0..5N草草酸溶液液）代替替水制成成酸性氧氧化铅薄薄层使用用硅胶微微呈酸性性，可在在铺层时时用稀碱碱溶液（如如0.11~0..5N氢氢氧化钠钠溶液）代代替水制制成碱性性的硅胶胶薄层可用醋酸钠、磷酸盐等不同pH的缓冲液代替水铺层，制成一定pH缓冲的薄层羧甲基纤纤维素钠钠溶液一一般用00.5~~1%浓浓度，宜宜预先配配制后静静置，取取其上层层澄清溶溶液应用用，则所所制得的薄层层表面较较为细腻腻平滑常常用0..8%浓浓度CCMC--Na系系中粘度度、3000~5000厘泊泊（粘度度单位）CCMC--Na系系碳水化化合物，调调制时应应在水浴浴上进行行活化化温度不不应过高高，防止止碳化2）络络合薄层层硝酸银薄薄层的制制法，可可在吸附附剂中加加入5~~25%%硝酸银银水溶液代代替水制制成均匀匀糊状，再再按常法法铺成薄薄层，制制成薄层层避光阴阴干，于于1055℃活化半半小时后后避光贮贮存。

制成的的薄层以以不变成成灰色为为好，在在三天内内应用也也可先把把硝酸银银用少量量水溶解解，再用用甲醇稀稀释成110%溶溶液，把预先先制好的的硅胶GG薄层浸浸入此溶溶液中约约1分钟钟，取出出避光阴阴干，按按上法活活化，贮贮存二）吸吸附剂的的活度测测定1. 氧氧化铝活活度的测测定一般可用用4~55种偶氮氮染料以以薄层层层析法进进行测定定染料试剂剂的配制制：取偶偶氮苯（AAzobbenzzenee）500mg，对对甲氧基基偶氮苯苯（P--Metthoxxyuzzobeenzeene）,,苏丹黄黄（Suudann I,, Beenzeeneaazo--β-nnaphhthool），苏苏丹红（SSudaan ⅢⅢ Teetraazobbenzzol--β-nnaphhthool），对对氨基偶偶氮苯（PP-Amminooazoobennzenne）各各20mmg，分分别溶于于50mml重蒸蒸馏的四四氯化碳碳（经氢氢氧化钠钠干燥）中中常法制备备不含粘粘合剂氧氧化铝薄薄层，以以铅笔尖尖或毛细细管尖在在薄层板板一端22~3 cm处处间隔11cm左左右轻轻轻点上55个可以以看清的的小点各吸取取约0..02mml染料试试剂分别别点于原原点上，以以四氯化化碳为展展开剂，展展开时薄薄层板与与容器底底部交角角为100~400°之间间，展开开后测出出各斑点点的Rff值，从从表1确确定氧化化铝的活活度（一一般高活活性氧化化铝Ⅰ~Ⅲ级活度度使用本本法时，结结果往往往偏低）。

另取不含含粘合剂剂氧化铝铝薄层板板一块，置置于水蒸蒸汽饱和和容器内内，2~~3小时时后取出出，按上上述方法法测定活活度观观察有无无变化2．硅胶胶活度的的测定一般选用用三种染染料的薄薄层层析析法进行行测定欧洲药典典19669年记记载用00.011%二甲甲基黄（DDimeethyy-yeelloow. P-DDimeethyylammino。