实验粗蛋白质的测定.ppt

实验五：粗蛋白含量的测定（微量凯氏定氮法）实验五：粗蛋白含量的测定（微量凯氏定氮法）1．实验原理．实验原理 样品与浓硫酸、催化剂一同加热消化，样品与浓硫酸、催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵然后加碱蒸馏，使氨蒸硫酸结合成硫酸铵然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的滴定根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量 消化：消化：NH2(CH2)2COOH+3H2SO4→2CO2+3SO2+4H2O+NH3 2NH3+H2SO4 →(NH4)2SO4蒸馏：蒸馏：(NH4)2SO4 +2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3吸收：吸收：NH3+4H3BO3 →NH4HB4O7+5H2O滴定：滴定：NH4HB4O7+HCl+5H2O →NH4Cl+4H3BO3 2. 实验材料、仪器与试剂实验材料、仪器与试剂材料：材料：豆奶粉豆奶粉仪器：仪器：消化炉，消化炉，100mL容量瓶，微量凯氏定氮蒸馏容量瓶，微量凯氏定氮蒸馏器，器，125mL三角瓶，酸性滴定管，移液管。

三角瓶，酸性滴定管，移液管试剂：试剂：浓硫酸，硫酸铜，硫酸钾，浓硫酸，硫酸铜，硫酸钾，40%氢氧化钠，氢氧化钠，2%硼酸溶液，盐酸溶液，溴甲酚绿硼酸溶液，盐酸溶液，溴甲酚绿—甲基甲基红混合指示剂红混合指示剂3. 实验步骤实验步骤（（1）消化：）消化： 准确称取豆奶粉样品左右，置于消化准确称取豆奶粉样品左右，置于消化管中，加入管中，加入6g硫酸钾、硫酸铜，再加硫酸钾、硫酸铜，再加20mL浓硫酸浓硫酸摇匀，待剧烈反应结束后，在消化炉上消化，待摇匀，待剧烈反应结束后，在消化炉上消化，待溶液澄清透明后再消化溶液澄清透明后再消化30min，然后将消化液无损，然后将消化液无损地转移到地转移到100mL容量瓶中，定容容量瓶中，定容样品样品硫酸铜硫酸铜6g硫酸钾硫酸钾20mL浓硫酸浓硫酸摇匀摇匀小火炭化至小火炭化至泡沫完全停止泡沫完全停止大火加热大火加热保持液体微沸保持液体微沸消化液蓝绿色消化液蓝绿色并澄清透明，并澄清透明，继续消化继续消化冷却后定容至冷却后定容至100mL（（2）蒸馏、吸收与滴定：）蒸馏、吸收与滴定：装好微量定氮装置，准装好微量定氮装置，准确移取消化稀释液确移取消化稀释液5mL于反应管内，经漏斗再加于反应管内，经漏斗再加入入10mL40%氢氧化钠溶液，用少量蒸馏水洗漏斗氢氧化钠溶液，用少量蒸馏水洗漏斗数次，夹好漏斗夹，进行水蒸汽蒸馏。

冷凝管下数次，夹好漏斗夹，进行水蒸汽蒸馏冷凝管下端预先插入盛有端预先插入盛有10mL 2%硼酸吸收液的液面下硼酸吸收液的液面下蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为绿色开始蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为绿色开始计时，继续蒸馏计时，继续蒸馏5min后，将冷凝管尖端提离液面后，将冷凝管尖端提离液面再蒸馏再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸，用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏然后用盐酸滴定吸收液然后用盐酸滴定吸收液微量凯氏定氮蒸馏装置微量凯氏定氮蒸馏装置（凯氏）（凯氏）半微量凯氏定氮蒸馏装置半微量凯氏定氮蒸馏装置（马氏）（马氏）4. 结果计算结果计算 。