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徒手切片实验报告徒手切片实验报告 篇一：实验九 徒手切片法制片技术 实验九 徒手切片法制片技术 一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法所需 的仪器用具简单，药品经济，操作 方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体 结构，必要时，也可经过脱水、染色制 成永久制片而保存但是徒手制片对于体积过小，质 地太软或太硬的材料，则难于处理，同 时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片） 、毛笔、镊子、培养皿、染 色皿（或小酒杯） 、吸管、载玻片、 盖玻片、吸水纸1%番红水溶液（或 50%酒精溶液） ， 0.5%固绿 95%酒精溶液，70%、85%、95% 酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬一般植物幼嫩的根茎或一 些植物的叶片、叶柄等均可使用此 法质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽 约 5～6 毫米，长 1～1.5 厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝 卜根或马铃薯块茎等)中进行切片使用夹持物时，先将夹 持物的中央切 成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切 片，也可将叶片卷成筒状再切。

2、切片 （1）盛清洁的水于培养皿中然后用左手的拇指及食 指、中指夹住材料，拇指的位置要低 于食指，并使材料的上端伸出指外 2～3 毫米，材料的 切面必须保持水平方向 (2)右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上， 刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要 用腕力，不可向内平切 (3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉 锯式，以免损伤材料或切得不平 (4)切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾 斜时，必须立即削平 (5)刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水， 以保持材料湿润、润滑 (6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察; 等切到相当数量后;再选择其中最薄的透 明度最大的做成临时玻片观察如想短期保存，可用 水或甘油封藏如希望长期保存所切的 材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有 70%酒精的染 色皿中进行固定固定时间为 16 分钟或更长时间 4、染色、脱水、透明 （1）用吸水管吸去 70%酒精，染以 1%番红（50%酒精 溶液）约 30 分钟 （2）再用吸管吸去番红，换用 70%→85%→95%酒精进 行冲洗、脱水，每级酒精 3～5 分钟。

（3）复染色吸去酒精，用 0.5%固绿(95%酒精溶液) 进行复染色，时间为 0.5 分钟 （4）冲洗、脱水用 95%酒精冲洗 1 次，时间 10 秒 后移入纯酒精中脱水 2～3 次，每次 3～5 分钟 （5）透明吸去纯酒精，放入 1/2 二甲苯—1/2 纯酒 精溶液中脱水和透明 1 次，时间 5 分钟 （6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明 2 次，时间 5 分钟 5、封片、贴标签 将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上， 滴上中性树胶，盖上盖玻片进行 干燥 在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作 日期和制作者姓名等项，以便查考 较好的切片，其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色， 细胞质和纤维素的壁则常被染成绿色，红绿相衬，有利于 观察、分辨植物体的内部结构 现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下: 选材→切片→固定(70%酒精)→1%番红(50%酒精溶液) 染色→70%酒精冲洗→脱水（85%酒精、95%酒精）→0.5%固 绿(95%酒精溶液)复染色→冲洗(95%酒精 1 次)→进一步脱 水(纯酒精 2～3 次)→透明(1/2 纯酒精十 1/2 二甲苯及纯二 甲苯各二次)→封片(中性树胶)→贴标签。

附：药品的简 单配方 （1）1%番红：于蒸馏水或 50%酒精 100 毫升中溶入番 红粉末 l 克，过滤后使用 （2）0.5%固绿：95%酒精 100 毫升中加入固绿粉末 0.5 克 篇二：徒手切片的基本要求 、目的与要求 1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤 2、学习徒手切片技术 3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点 二、材料和用品 1、自备材料：解剖器（镊子 、解剖针、单面刀片或 双面刀片） ；洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其 它植物的叶片、胡萝卜块等 2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、 蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘 油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管 三、实验内容 1、临时装片的制作方法 2、徒手切片方法 四、实验方法 要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以 及一些很微小的藻、菌植物等，这些用肉眼是无法看到的， 必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察，首先必须制 成各种制片，放在显微镜下才能观察制片的方法很多， 这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术 1、临时装片的制作方法 临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、 薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料（如丝 状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的 苔藓植物等等） ，把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上 盖玻片做成玻片标本的方法。

这种方法制成的标本，可以 保持材料的生活状态和天然的色彩此法一般多做为临时 观察使用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久 制片或用某些化学试剂作组织化学反应 临时装片的制作方法和步骤如下： （1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净，再用 纱布擦干，擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边， 右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力 要均匀 注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心， 用力要轻，右手食指和拇指要轻轻捻动，以免把盖玻片捏 破 （2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片 中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然后用镊子镊取或吸管吸取 少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵??） ，放在载玻 片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或 分散开，勿使材料折叠或干燥 （3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡 ，盖 盖玻片时，应该以大拇指和食指拿着盖玻片的两个角或用 镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的水滴边 缘接触 ，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将 贴近载玻片时，则可放手或抽出镊子，使其自然轻轻复盖， 这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。

注意载玻片 中央的液滴要适中，既要使其充满盖玻片，又要不会使盖 玻片浮动或使液滴从盖片下外溢，假如水不够，可用吸管 小心地从盖玻片的边上再滴入一小滴水，使它和盖玻片下 面的水相接触；如果水太多，溢出盖玻片，则可用吸水纸 吸去，盖玻片的上面，一定不能被水浸湿，如果发生这种 情况，应该小心地取下盖 玻片，擦干以后，再按上述方法 重新盖上这样做好的装片，便可在显微镜下进行观察 根据需要，临时水装片做好后还可以进行简单的染色（例 如用碘—碘化钾或番红等来染色） ，其方法是直接在盖玻片 的一侧加一滴染液，用吸水纸条在盖玻片的另一侧吸水， 引入染液，以使盖片下的材料染上色 注意：临时装片根据需要可以水封片或以甘油封片， 凡用以临时观察，不欲久留的装片均可用水封片，制成水 装片；需要提前半天或一天就备出的装片或者观察后须保 留一定时间的装片，为防止水分蒸发，出现材料收缩现象， 则适宜用甘油封片，制成甘油封片，用甘油封片时，保留 时间短者，可用 10%甘油水溶液，保留时间长者则须从 10% 甘油中再转入 50%甘油水溶液中或在此液中浸一小时后再转 入纯甘油中封片用甘油做临时装片的优点是不仅封片保 留时间长，且有加强材料透明的作用。

本实验以洋葱（或大葱）鳞茎内表皮为材料，通过撕 皮法做临时装片，用碘—碘化钾做染色剂，在观察做片效 果时同时了解细胞的基本结构，如细胞壁、细胞质、液泡、 细胞核等 2、徒手切片法 徒手切片法简称手切片法，即手拿刀片将材料切成能 在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法是植物形态解 剖学实验及研究中最简单和最常用的方法，也是最重要的 基本技能之一徒手切片的材料一般是新鲜的，有时也可 用预先固定好的这种切片方法虽然有其缺点，如：不易 做到将整个切面切得薄而完整，往往切出的片子厚薄不一； 过软过硬的材料比较难切但其优点很多，如：工具简单， 只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就够了；方法简便，容 易学会；节省时间，只要有现成材料，可以立刻用刀片切 成薄片，当即观察，即便要染色，时间也不长；还有一个 独特的优点就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜 色徒手切片的方法见图 2—2 一般材料的徒手切片方法 （1）将材料切成长约 2～3 厘米的小段，削平切面 （2）左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使 之固定不动摇为防止刀伤，拇指应略低于食指，并使材 料上端超出手指 2～3 毫米，不可高出过多，否则切片时材 料容易动摇，也不容易切薄。

（3）右手大拇指和食指捏住刀片的右下角（刀片要非 常锋利，双面刀片必须是新用的） ，刀口向内，并与材料切 面平行，切片前先将材料和刀口上蘸些水，使之切时滑润 （4）切的方法，以刀口自外侧左前方向内侧右后方拉 切，这样可以边切边看清切片的进展情况，同时切起来也 比较顺手切片时只用臂力而不要用腕力及握刀指关节的 力量，左手保持不动，不要两手同时拉动，两手不要紧靠 身体或压在桌子上，并且动作要敏捷，材料要一次切下， 切忌中途停顿或推前拖后作“拉锯”式切割关键是要切 得薄而平如此连续切片，切下数片后，用湿毛笔将切片 轻轻移入培养皿的清水中备用 （5）在切片过程中刀口和材料要不断蘸水，以保持刀 口锋利和避免材料失水变形所切的材料和刀片一定要保 持水平方向，不要切斜，如果切斜，即使很薄，但由于细 胞切面偏斜，同样影响观察 （6）切下足够多的切片后，挑选薄而平的切片做成临 时装片供镜检，必要时也可以制成永久装片挑选切片时， 不一定要材料切得很完整，只要切得很薄就行，有时只要 有一小部分就可以看清其结构了，如玉米茎横切片，只要 有四分之一或者更少的小片，就可以看出内外维管束的大 小、多少及每个维管束的构造。

因此切下的切片不是每一 片都适用，也不是只有全面切得薄的才能用，要根据需要 进行选择，一次可多选几片置于载玻片上，制成临时装片， 通过镜检再进一步选择理想的材料用以观察 柔软和坚硬材料的徒手切片方法 过于柔软的材料，如植物的叶片或其他薄而微小的材 料，难以直接执握手切，则须夹入坚固而易切的夹持物中 切常用的夹持物有胡萝卜根（用胡萝卜时可将中间硬心 即木质部切去用其余部分） 、土豆块茎、接骨木的髓部及通 草髓等但须要注意的是通草髓遇水既变软，可将其保存 在酒精中备用切前先将夹持物切成长方小体，上端与纵 轴垂直 面削平，若被切材料属叶状体一类的薄片，将夹持物 从上至下纵切一缝，材料夹于其中即可，如不是叶状体， 即将材料夹于其中，或根据材料不同在缝里挖一个和材料 形状相似、大小相同的凹陷，把材料夹在凹陷里然后用 手握住夹持物，采用上述方法将夹持物和其中的材料一齐 切成薄片，除去夹持物的薄片，便得到材料的薄片 坚硬的材料要经软化处理后再切软化的方法：一种 是对于比较硬的材料，先把材料切成小块，后进行煮沸， 经 3～4 小时煮沸后，再浸入软化剂（50%酒精∶甘油 ＝1∶1）中数天至更长些时间，而后再切。

另一种，对于 已干或含有矿物质，比较更硬的材料，要先在 15%氢氟酸的 水溶液中浸渍数周，充分浸洗后，再置入甘油里软化后再 切 本实验主要以青红椒、芹菜叶柄为材料做徒手切片练 习并通过青红椒切片结果装镜观察来了解细胞基本结构 中叶绿体和有色体；（提示：青椒切片细胞内绿色的小颗 粒为叶绿体，红椒切片细胞内红色的小颗粒为有色体 ）通 过芹菜叶柄切片结果装镜观察来了解厚角组织的结构特点 （提示：芹菜切片在显微镜下观察，在棱角处稍靠内方有 一团具有珠光色彩的。