医学微生物学：4 细菌感染的检测和防治.pptx

细菌感染的检测和防治,第6章,医学微生物学,一、细菌感染实验室诊断 KOCHS POSTULATES 二、细菌感染的防控 三、细菌感染的治疗 （细菌耐药性 王明贵教授 讲座）,KOCHS POSTULATES,The microbe must be present in every case of the disease and not in healthy animals It must be isolated and grown in a pure culture The same disease must result when the isolated microbe is inoculated into a healthy host The same microbe must be isolated again from the diseased host,Disease Etiology: Kochs Postulates,Not perfect -Kochs postulates for identifying a virus causing disease ? -Can not be culture in vitro? -No susceptible animals？ -Molecular Kochs postulates,一、细菌感染实验室诊断,细菌学诊断-查菌及其成分 - 形态学检查 染色、形态 - 细菌分离培养 - 代谢产物 生化试验 - 抗原检测 凝集试验、免疫荧光、ELISA - 核酸检测 PCR，16S rRNA基因测序、芯片 血清学诊断-查患者抗体 用已知细菌抗原测病人血清中相应抗体,Diagnosis of Bacterial Infection,临床标本,预处理,增 菌,接种培养基，分离单个菌落,各种鉴定试验,血清学诊断,快速诊 断试验,生化试验,血清学实验,涂片染色,药敏试验,动物试验,最终诊断报告,病原学检验一般程序,涂片染色,分子检测,样本采集非常重要！,Diagnosis of Bacterial Infection,确切的临床评价是合理利用实验室检查的前提,-临床判断有误 -标本采集错误 -实验室检查结果无价值-“垃圾”,细菌学诊断,标本的采集和送检原则,无菌操作，避免污染,不同病期所取标本可有不同,采集部位-病变明显,注意记录、运送和保存,快送快检（标本包鲜：床边接种、保菌液）,早期采集 用抗生素以前,采集双份血清,研究中的自身对照,收集正确的标本-learn it from medical microbiology,因感染的不同而定，通常为病人或可疑者的血、尿、粪、痰、脑脊液、脓汁等 举例： 腹泻 -粪便 败血症 -血 呼吸道感染 咽拭子、痰（不是唾液） 脑膜炎 -脑脊液、血液 尿液 -中段尿 伤寒 -不同感染期，不同的标本,影响细菌学检查结果可靠性的因素,样本错误（Wrong sample ） e.g. saliva instead of sputum 送检不及时/样本储存不当 （Delay in transport / inappropriate storage） e.g. CSF 样本污染（Overgrowth by contaminants） e.g. blood cultures 取样不足/错误（Insufficient sample / sampling error） e.g.in mycobacterial disease 病人预先使用抗生素（Patient has received antibiotics）,（一）涂片染色镜检:,淋病患者尿道分泌物直接涂片革兰染色,脑脊液涂片作革兰染色,结核病人痰涂片作抗酸染色,深部创口取材涂片染色,特殊部位取材，形态染色典型,(二)细菌分离培养与鉴定,分离培养鉴定是微生物诊断的金标准,S.S培养基上伤寒沙门菌-黑色菌落,罗氏培养基上结核分枝杆菌 -菜花心样菌落,亚碲酸钾培养基上白喉杆菌 -黑色菌落,巧克力色培养基上脑膜炎萘瑟菌 -露滴状菌落,1. 分离培养,2.生化试验,是鉴定细菌的重要方法之一 针对一个菌落或纯培养物进行鉴定,细菌的酶系不同，分解底物的能力不同，代谢产物也不同-生物化学方法测定代谢产物，可鉴定细菌-生化试验。

1,2,4,1,2,4,1,2,4,1,2,4,ONPG,GLU,LDC,ARA,CIT,ODC,H2S,URE,IND,TDA,OX,NO2, , , , ,7504：肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种,7,0,5,4,梅里埃全自动鉴定仪,ID32GN生化鉴定条,3.血清学鉴定 用特异性抗体进行鉴定：种、群、型 常用：玻片凝集试验 4.动物试验 5.药物敏感试验 -纸片法 -稀释法 （MIC, MBC） 6.自动微生物鉴定和药敏分析系统,MIC 试管稀释法,（三）血清学诊断,恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义,种类,原理： 利用已知抗原检测患者血清中的抗体 (抗原抗体反应),标本： 双份血清标本（急性期、恢复期）,凝集试验：,ELISA试验：,补体结合试验：,中和试验：,（四）细菌核酸的检测,聚合酶链反应(PCR)， RT-PCR 核酸杂交技术 DNA Southern, Dot, in Situ RNA Northern 16S rRNA基因序列分析 原核细胞 rRNA 5S, 16S, 23S 16S rRNA的基因 -细菌基因组中拷贝多 -可变区具有属或种的特异性,（五）生物芯片技术 基因芯片-核酸 蛋白芯片 糖芯片、细胞芯片、组织芯片,Multiple sequences of 16S rRNA can exist within a single bacterium, highly conserved between different species of bacteria. 16S rRNA gene sequences contain hypervariable regions that can provide species-specific signature sequences useful for bacterial identification Ribosomal Database Project, NCBI,核酸分子杂交方法比较：,Gene Chip/MicroarrayAffymetrix,Gene Chip/Microarray animation,二、细菌感染的防控,控制传染源 (患者、带菌者、医源性) 切断传播途径 提高人群免疫力,提高人群免疫力,特异性免疫,自然,主动免疫：传染病、隐性感染 被动免疫：经胎盘、母乳由母体输入,人工,主动免疫：预防接种疫苗、类毒素 被动免疫：抗血清 免疫球蛋白（丙种球蛋白） 特异性高效价免疫球蛋白,人工主动免疫疫苗,1.菌体疫苗： 死疫苗 减毒活疫苗 2.亚单位疫苗 蛋白或抗原成分 多糖疫苗：细菌表面多糖成分如脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗。

3.基因工程疫苗 4.重组载体疫苗,5.核酸疫苗（DNA疫苗） 6. 类毒素（Toxoid） 外毒素经甲醛处理，失去毒性，仍保留免疫原性，人工免疫可刺激产生抗毒素 联合疫苗 如DPT三联疫苗,常用的细菌性疫苗,死疫苗与活疫苗的区别,人工被动免疫用制剂,1. 抗毒素 antitoxin（Fab片段） 抗菌血清 2. 免疫球蛋白(serum gammaglobulin) 血清免疫球蛋白 胎盘免疫球蛋白 特异性高效价免疫球蛋白 3. 细胞免疫制剂 IFN、IL,人工主动免疫与人工被动免疫的区别,三、细菌感染的治疗,（一）抗菌药物按化学结构和性质分类 （P.59） -内酰胺类（青霉素、头孢菌素类） 大环内酯类 氨基糖苷类 四环素类 氯霉素类 多肽类抗生素 化学合成的抗菌药物（磺胺、喹诺酮、抗结核药）,抑菌剂Bacteriostatic vs杀菌剂Bactericidal,Bacteriostatic - 抑制细菌生长，细菌不死 - 免疫清除 (antibodies, phagocytosis etc) Bactericidal - 杀死细菌 可能导致细菌细胞成分的释放，引起炎症及用药后续病症,E test (Epsilometer test ) Minimum inhibitory concentration of Penicillin for an isolate of Staphylococcus aureus. MIC of 0.032g/ml.,36,（二）抗菌药物的作用机制（Machanisim of Antibiotics） 抑制细菌细胞壁的合成 -内酰胺类 抑制肽聚糖的合成 2. 抑制细胞膜的功能 多粘菌素 3. 抑制细菌蛋白的合成 30S 亚单位 -四环素、氨基糖苷类 50S 亚单位 氯霉素、红霉素、林可霉素 4. 抑制核酸合成 喹诺酮类 5. 抑制细菌代谢 磺胺类药，复方磺胺甲噁唑,Machanisim of Antibiotics,4. Inhibit metabolism,1. Inhibit cell wall synthesis,3. Inhibit nucleic acid synthesis,2. Inhibit protein synthesis,Ref,思考题,病原菌检测时，标本采集的注意点？ 试分析临床标本采集对实验室诊断的重要性。

如何分离细菌并进一步鉴定？ 试述疫苗的主要类型和使用方法？,Thanks!,细菌细胞壁合成受抑 -细菌裂解,Sensitive to osmatic pressure,革兰阳性菌肽聚糖聚糖骨架 四肽侧链 (vary from species) 五肽交联桥(vary from species),D-丙氨酸,DD-transpeptidase 青霉素结合蛋白,43,-内酰胺类抗生素Beta lactam antibiotics,Penicillin (over 50 compounds) Share 4-sided ring (beta lactam ring) Natural penicillins Narrow range of action, inactive against Gram- bacteria, no penetration of outer membrane Susceptible to penicillinase (beta lactamase),open the b-lactam ring of penicillins and cephalosporin,Cephalosporins 2nd, 3rd, and 4th generations more effective against G-,Inhibitors of Cell Wall Synthesis,Semisynthetic Penicillins Penicilinase-resistant Carbapenems(碳青霉烯类): broad spectrum Monobactam: Gram- (Neisseria, Pseudomonas),Ribosome as targets,Protein synthesis； Targets of antibiotics,Inhibitors protein synthesis,46,ref,Inhibitors of DNA SynthesisQuinolones (bactericidal)nalidixic acid, ciprofloxacin, ofloxacin, norfloxacin, levofloxacin, lomefloxacin, sparfloxacin,Mode of action - These antimicrobials bind to the alpha subunit of DNA gyrase and prevent supercoiling of。