
实验标准操作规程.doc
29页1编制依据:《中华人民共和国药典》2005年版(一部)2原理:中药材中的成分可以在水或醇中浸出,进而进行测定3适用范围:中药材4水溶性浸出物测定4.1检验操作方法4.1.1仪器及用具电子天平1 250〜300ml的锥形瓶电热恒温干燥箱 蒸发皿2个温度计 水浴锅100ml100〜250ml的锥形瓶 100ml移液管漏斗干燥器回流冷凝装置4.1.2操作方法4.1.2.1冷浸法测定用的供试品须粉碎,使能通过二号筛,并混合均匀操作方法:取供试品约4g,称定重(W0),置250〜300ml的锥形瓶中精密加入水 100ml,塞紧,冷浸,前6小时内时时振摇,再静置18小时,用干燥滤器迅速滤过精密 量取滤液20ml,置己干燥至恒重的蒸发皿中(蒸发皿重W1),在水浴上蒸干后,于105C 干燥3小时,移置干燥器中,冷却30分钟,迅速精密称定重量(W2),除另有规定外,以 干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)o计算公式:浸出物%=[(W2-Wl)/W0]xl00%4.1.2.2热浸法操作方法:取供试品约2〜4 g,称定重量(W3),置100〜250ml的锥形瓶中精密加入 水50〜100ml,塞紧,称定重量,静置1小时后,连接IE流冷凝管,加热至沸腾,并保持微 沸1小时。
放冷后,取下锥形瓶,密塞,称定重量,用水补足减失重量,摇匀,用干燥滤器 滤过精密量取滤液25ml,置己干燥至恒重的蒸发皿中(W2),在水浴上蒸干后,于105C 干燥3小时,移置干燥器中,冷却30分钟,迅速精密称定重量(W1),除另有规定外,以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%) O计算公式:浸出物%=[ (W1-W2) /W3]X1OO%5醇溶性浸出物测定法:照水溶性浸出物测定法测定(热浸法须在水浴上加热)以各项 下规定浓度的乙醇或甲醇代替水为溶剂1编制依据:《中华人民共和国药典》2005年版(二部)2原理:供试品在100〜105C干燥5小时,减失重量即为失去水分的重量3适用范围:本法适用于不含或含少量挥发性成分的药品4检验操作方法4.1第一法(木法适用于不含或少含挥发性成分的药品)4.1.1仪器及用具电子天平电热恒温干燥箱称量瓶2个温度计1个干燥器1个4.1.2操作方法4.1.3取供试品2〜5g两份,平铺于干燥至恒重的2个称量瓶中,厚度不超过5mm,疏松 样品不超过10mm,精密称定4.1.4将精密称定的盛有供试品的2个称量瓶放入电热恒温干燥箱,打开瓶盖,将瓶盖与称 量瓶 对应放好。
在100~105C干燥5小时后,将瓶盖盖好,移置干燥器中,冷却30分 钟,精密称定重量4.1.5恒重:再在上述温度干燥1小时,冷却,称重,至连续两次称重的差异不超过5mg 为止4.1.6根据减失的重量计算供试品中含有水分的百分数计算:供试品中含水量% =[ (wl-w2) /w3]xl00%式中:wl—烘前称量瓶+样质量,g ;w2—烘力|称量瓶+样质量,g ;w3一供试品质量,g4.2第二法(甲苯法)(本法适用于含挥发成分的药品)4.2.1仪器装置:如图A为500ml的短颈圆底烧瓶;B为水分测定管;C为直形冷凝管,外长40cmo使用前,全部仪器应清洁并置烘箱中烘干4.2.2仪器及用具电热套电子天平200ml量筒4.2.3试剂:甲苯4.2.4测定法4.2.4.1取供试品适量(约相当于含水量1〜4ml),精密称定,置A瓶中,加甲苯约200ml 必要时加入玻璃珠数粒,将仪器械各部分连接,自冷凝管顶端加入甲苯,至充满B管的狭细部分将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时,调节温 度,使每秒钟馆出2滴4.2.4.2待水分完全偏出,即测定管刻度部分的水景不再增加时,将冷凝管内部先用甲苯冲 洗,再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法,将管壁上附着的甲苯推下,继续蒸馅5分钟,放冷至室温,拆卸装置,如有水黏附在B管的管壁上,可用蘸甲苯的铜丝推下,放 置,使水分与甲苯完全分离(可加亚蓝粉末少量,使水染成蓝色,以便分离观察)。
4.3检查水量,并计算供试品中的含水量(%)Vxp计算:含量(%) = X100%W式中:V—水的亳升数,ml; p—水的密度,g/ml: W—供试品重量,go1编制依据:《中华人民共和国药典》2005年版(一部)2定义:是指测定药品在一定条件下炽灼所剩无机杂质重量的方法3检验操作方法3.1仪器及用具架盘药物天平(最大称量为100g,分度值为0.1g)电了天平高温炉电炉电热恒温水浴锅干燥器坦蜗2个5ml量筒1个3.2操作方法3.2.1测定用的供试品须粉碎,使能通过二号筛,混合■均匀后,用架盘天平取供试品2〜3g (如须测定酸不溶性灰分,可取供试品3〜5g),置炽灼至恒重的给垠中,用电了天平称定 重量3.2.2用电炉缓缓炽热,注意避免燃烧,至完全炭化3.2.3插上电源使高温炉逐渐升温至500〜60CTC打开高温炉,用H垠钳央住川堪在炉口预 热3分钟,然后轻轻放入炉内,关上炉门使完全灰化并至炽灼至恒重3.2.4根据残渣重量,计算供试品中含总灰分的含量(%)3.2.5如供试品不易灰化,可将堪垠放冷,加热水或10%硝酸铉溶液2ml,使残潴湿润,然 后置水浴上蒸干,残渣照前法炽灼,至爪蜗内容物完全灰化。
3.3计算公式灰分%= (m2-m0) / (ml・m0)式中:m0一圮垠质量,g ;ml—(圮垠+药)质量,g ;m2—炽灼恒重后(川•垠+药)质量,g o显微鉴别标准操作规程中药材、中西成品1检验依据:《中华人民共和国药典》2005年版(一部)2定义:通常是借助显微镜,应用植物细胞、组织学和矿物晶体光学等知识鉴别中药材或中成药的一种方 法,3检验操作方法(临时制片法)3.1仪器和用具3.1.1仪器生物光学显微镜显微描绘器滑走切片机或徒手圆筒生物切片器镜台测微尺离心机3.1.2用具放大镜、刀片、解剖刀、镣子(包括粗保及眼科弯保与直保)、剪(眼科剪与手术剪)、解剖针载玻片、 盖玻片吸湿器(即玻璃干燥器改装蒸馅水加微鬲苯酚,潮气润湿药材样品用)培养皿或小烧杯(放切片用,切片后的处理均可在其中进行)、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、 试管架、滴管、玻璃棒(粗与细)、乳钵、量筒毛笔(从刀上刷取切片用)铅笔(HB、4H、6H绘图用) 带盖搪瓷盘(装切片标本用)纱布、吸水纸(滤纸)、火柴等3.2试液3.2.1水合氯醛试液:取水合氯醛50g,加水15ml与甘油10ml使溶解,即得此液为透化剂,可使干缩的细胞壁膨胀而透明,并能溶解淀粉粒、树脂、蛋口质及挥发油等。
3.2.2计油醋酸试液(斯氏液):取甘油、冰酷酸与水各等份,混合即得此液专用于观察淀粉形态,可使淀粉不膨胀变形,便于测量其大小3.2.3甘油-乙醉溶液:取甘油1份,50%乙醇1份,混合即得此液为封藏液,用于保存植物材料及临时切片,有软化组织的作用324苏丹TH试液取苏丹IHO.Olg,加90%乙醉5ml溶解后,加甘油5ml.摇匀即得本液应置棕色玻璃瓶内保存,在2个月内应用此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色3.2.5钉红试液:取10%醋酸钠溶液1〜2ml,加钉红适量使呈酒红色即得本液应临用新制此液可使粘 液染成红色326间苯三酚试液:取间苯三酚1g,加90%乙m 100ml使溶解,滤过即得应置棕色玻璃瓶内,在暗处 保存此液与浓盐酸合用,可使木化细胞壁染成红色或紫红色3.2.7碘试液:取碘化钾0.5g,溶于少量水中,加碘lg,使溶解,加水至100ml即得应用时能常再加水 稀释成淡棕色或淡黄色本液应置棕色瓶内保存此液用于检查淀粉,染成蓝色或紫色;蛋口质或糊粉粒呈黄色3.2.8硝格酸试液:取硝酸10ml,加入100ml水中,混匀另取铭酸10g,加水100ml使溶解。
用时将二 液等量混合,即得此液为常用的“植物组织解离液"检品的解离浸泡时间,按材料的质地不同而异329 a-荼酚试液:取15%的a■肝酚乙醇溶液10.5ml,缓缓加入硫酸6.5ml,混匀后再另加乙醇40.5ml及 水4ml,混匀即得此液用于检查菊糖,染成紫红色,并很快溶解3.2.10硝酸汞试液(米隆氏试液):取汞4.5g,加发烟硝酸3ml,俟作用完毕,加等量水稀释即得本液 应置棕色玻璃塞瓶内,在暗处保存此液用于检查糊粉粒,染成砖红色3.2.11氯化锌碘试液:取碘化钾8g,加水8.5ml使溶解,再加无水氯化锌2.5g使溶解,加碘适量至饱和, 即得本液应肯棕色玻璃塞瓶内此液用于检查木质化与纤维素细胞壁,前者显黄棕色,后者显蓝色或紫色3.3显微标本的制作3.3.1切片制作标本片(横切或纵切)3.3.1.1药材的预处理:先将药材表面泥沙刷洗干净,将应观察的部位,切成适当大小的块或段,一般以宽 1cm、氐3cm为宜,切面削平整质地软硬适中的药材可直接进行切片:质地坚硬的则须先使其软化后再切片软化方法可放在吸湿器(即玻璃干燥器底部盛蒸靖水并滴数滴 苯酚防霉,上部瓷板上宜药材样品吸湿)中闷润,或在水中浸软或煮软。
有些根、根茎、茎及木材类,质地虽坚实,可将削平的切面浸水中片刻,表血润湿时取出,直接切片也 能切成完整的薄片过于柔软的材料,可将其浸入70%〜95%乙爵中,约20分钟后可变硬些,即可进行切片对于细小、柔软而薄的药材,如种子或叶片,不便直接手持切片,种子类可放在软木塞或橡皮片中(一侧切一窄缝,将种子嵌入其中),叶类药材可用质地松软的通草或向I I葵的茎髓作平持物进行切片药材在处预处理时应注意不能影响要观察的显微鉴别特征如要观察菊糖、粘液等在软化、切片、装片等 过程中,此法不可与水接触,以免溶解消失;观察挥发油、树脂等则不可与高浓度乙F&或其它有机溶媒接触3.3.1.2徒手切片:在检验工作中,此法最常用,操作简便,迅速,制成的切片保持其细胞内含物的同有形 态,便于进行各种显微化学反应观察切片:右手持刀片,左手拇指和食指夹持药材,中指托着药材的底部,使药材略高出食、拇二指,肘关节 应固定,使材料的切面保持水平,刀口向内并使刀刃自左前方向右后方切削,即可切得薄片操作时,材料的切面和刀刃须经常加水或50%乙醇保持湿润,防止切片粘在刀片上切好的切片用毛笔醮水轻轻从刀片上推入盛有水或50%乙醇的培养皿中。
徒手圆筒生物切片器切片:将药材用通草或软木夹持,固定于切片器持物筒中:具有一定硬度的材料(如 木本植物的茎干等)可直接固定于持物筒中;左手持切片器,拇指与小指持底盘的边缘,食指端顶动中柱上的固定螺帽,可便材料无级上升,每动一•格材料上升约10um,顶动螺 帽时,同时将底盘向反方向略转动,使切片器整体方赂不变,以保持材料的切片方向固定:历手持切片刀,刀柄靠于拇指与食指根部,食品店指与中指轻压于刀片的上面,刀片 平贴于切片器圆台上,山左上方至右下方迅速滑动,切下的切片用毛笔沾水取下置盛水的培养皿中装片:选取薄而平整的切片置载玻片上,根据所要观察的内容要求,滴加适立的试液1〜2滴,盖好盖玻片, 即可在显微镜下观察如加水合氯醛试液透化,将薄片移载玻片上, 滴加1〜2滴水合氯醛试液,在酒精灯上微微加热,至边缘起小泡即停止加热,继续补充试液再加热,以不 烧干为度直至透化完全为止:加热温度不能过高,以防水合氯醛试液沸腾,使组织内带入气泡;加热时应将我玻片不断移动,不宜对准一处。












