麻杏石甘汤对肺炎模型小鼠的疗效观察及对共刺激分子CD137水平的影响.docx

    麻杏石甘汤对肺炎模型小鼠的疗效观察及对共刺激分子CD137水平的影响    柴少卿 于少飞 朱华Summary  目的：觀察麻杏石甘汤对肺炎模型小鼠的疗效，同时探讨其对共刺激分子CD137水平的影响方法：选取60只无特定病原体（SPF级）幼龄小鼠纳入研究，并随机分为空白组、模型组及中药组，每组20只其中模型组及中药组小鼠接受肺炎克雷伯菌混悬液滴入鼻腔，空白组小鼠接受等剂量生理盐水滴鼻，24 h中药组小鼠接受麻杏石甘汤灌胃，1剂/d，共干预7 d比较3组小鼠一般活动情况、外周血中的白细胞计数、多核粒细胞激素（PMN）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、肺组织病理改变以及外周血单核细胞中共刺激分子CD137水平的变化结果：空白组小鼠未出现任何阳性体征，模型组及中药组小鼠出现精神萎靡、体质量下降、活动减少等相关阳性症状，其中中药组较模型组改善;模型组及中药组小鼠外周血白细胞计数、PMN、IL-6及IL-8均较空白组升高，差异有统计学意义（ P <0.05），其中中药组优于对照组（ P <0.05）模型组及中药组小鼠肺组织细胞结构错乱、肺泡大小不一，各级支气管周围、小叶间及肺泡间隔等存在大量炎性细胞浸润，部分有纤维增生。

其中中药组较模型组病理明显改善模型组及中药组小鼠外周血共刺激分子CD137表达增高，与空白组比较差异有统计学意义（ P <0.05），其中中药组水平低于模型组，差异有统计学意义（ P <0.05）结论：麻杏石甘汤加减对肺炎有明显临床效果，其作用机制可能与抑制共刺激分子CD137的分泌有关Key  肺炎模型;肺炎克雷伯菌;小鼠;麻杏石甘汤;CD137Effects of Maxing Shigan Decoction on Pneumonia Model Mice and Its Effect on CD137 Level of Costimulatory MoleculeChai Shaoqin，Yu Shaofei，Zhu Hua（Pediatric Department，People′s Hospital of Inner Mongolia Autonomous Region，Hohhot 010010，China）Abstract Objective： To observe the curative effect of Maxing Shigan Decoction on pneumonia model mice，and to explore its effects on the level of costimulatory molecule CD137. Method：A total of 60 SPF-free young mice were randomly divided into blank group，model group and Traditional Chinese Medicine group with 20 mice in each group. The mice in the model group and Traditional Chinese Medicine group were given Klebsiella pneumoniae suspension by dripping into the nasal cavity，the mice in the blank group were given the same dose of normal saline nasal drops，the mice in Traditional Chinese Medicine group were given Maxing Shigan Decoction intragastric administration for 24 hours，one dose per day，for 7 days. The general activity，peripheral blood （WBC），polymorphonuclear hormone （PMN），interleukin-6 （IL-6），interleukin-8 （IL-8），lung histopathology and the concentration of costimulatory molecule CD137 in peripheral blood mononuclear cells were compared.  Results： There were no positive signs in the blank group mice，but the model group mice and Traditional Chinese Medicine group mice showed mental dispirity，weight loss，decreased activity，and decreased fur gloss，and Traditional Chinese Medicine group mice were better than the model group mice. WBC，PMN，IL-6 and IL-8 in the peripheral blood of the model group mice and Traditional Chinese Medicine group mice were higher than the blank group mice，the difference was statistically significant （ P <0.05），Traditional Chinese Medicine group was better than the control group （ P <0.05）. There were a lot of inflammatory cells infiltrating around bronchi，interlobular and alveolar septum，and some fibrosis in the model group and Traditional Chinese Medicine group. Traditional Chinese Medicine group improved significantly compared with the model group. The expression of costimulatory molecule CD137 in peripheral blood of mice in model group and Traditional Chinese Medicine group was higher than that in blank group （ P <0.05）. The level of costimulatory molecule CD137 in Traditional Chinese Medicine group was lower than that in model group （ P <0.05）.  Conclusion： Maxing Shigan Decoction has obvious clinical effect on pneumonia，and its mechanism may be related to the inhibition of the secretion of costimulatory molecule CD137.Key Words  Pneumonia model pneumonia; Klebsiella mice; Maxing Shigan Decoction; CD137：R289.4;R563.1 ：A  doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2019.02.019细菌性肺炎是常见的肺炎类型，是临床常见的感染性疾病之一，亦是导致我国儿童死亡的主要病因，远超过因艾滋病、疟疾和麻疹死亡儿童人数的总和，但由于病原体的变迁、抗生素滥用等因素导致临床疗效差强人意。

据目前已知研究[1-3]，细菌性肺炎的发生发展与多种炎性细胞及活性因子的级联效应导致气道慢性炎性反应有关，在此病理环节中T淋巴细胞的活化具有重要作用，贯穿炎性级联反应始终，而T淋巴细胞的异常激活与与其表面共刺激分子的活化关系密切有研究发现，细菌性肺炎患儿外周血T淋巴细胞表面共刺激分子被明显活化，因此我们设想，抑制T淋巴细胞表面共刺激分子可能是细菌性肺炎的靶向治疗中医古籍并无“细菌性肺炎”的病名记载，根据其临床症状将其归属于“咳嗽”“喘证”等范畴，好发于儿童，中医认为小儿脏腑娇嫩，形气未充，极易外感风邪，夹寒夹热入侵与肺，影响肺气宣发肃降，最终致肺气郁遏，痰阻肺络而成此病麻杏石甘汤首载于《伤寒论》，有辛凉宣泄，清肺平喘之功效，具有严谨的用药配伍，与细菌性肺炎的病机一一对应，临床亦不乏麻杏石甘汤治疗细菌性肺炎有效的临床报道[4-6]，但对其作用机制尚无统一定论，基于此，我们利用麻杏石甘汤对60只SPF级小鼠进行研究，并对其作用机制进行探讨1 材料与方法1.1 材料1.1.1 动物 选取60只无特定病原体（SPF级）幼龄小鼠，体质量30～40 g，平均体质量（31±1.1）g鼠龄2～3个月，平均鼠龄（2.1±0.5）月。

所有小鼠均购自济南金丰实验动物有限公司，许可证号：SCXX（沪）2011-00241所有动物饲养于本院动物实验中心，饲养条件：温度（23.5±0.5）℃，湿度（52±1.5）%，以12/12 h为光暗周期1.1.2 药物 麻杏石甘汤由本院中药研究院提供，中药组成：麻黄6 g、杏仁9 g、生石膏24 g、甘草6 g1.1.3 试剂与仪器肺炎克雷伯菌株（本院检验科细菌室提供）;IL-6 ELISA试剂盒（货号kt37687，购自武汉默沙克生物科技有限公司）;IL-8 ELISA试剂盒（货号kt32377，购自武汉默沙克生物科技有限公司）;全自动生化仪（AU5800，購自美国贝克曼库尔特公司）;酶标仪（购自美国Molecular Devices公司）;CD137抗体（货号ab9822，购自Abcan公司）;β-actin抗体（货号28341，购自CST公司）;二抗羊抗小鼠Ig-HRP（货号3928347，购自北京中衫生物技术有限公司）1.2 方法1.2.1 分组与模型制备 选取只无特定病原体（SPF级）幼龄小鼠纳入研究，随机分为空白组（20只）、模型组（模型制备20只）及中药组（20只）3组小鼠体质量、鼠龄比较，差异无统计学意义（ P >0.05），具有可比性。

本研究方案经过本院伦理委员会批准模型制备参照Reference[7-8]中的模型制备方法：将小鼠充分麻醉后置于手术台上，颈部备皮后消毒，将气管充分暴露于操作者视野，用1 mL注射器刺入气管滴入克雷伯菌悬浊液0.15 mL（用生理盐水稀释成1.2×1011cfu/L），空白组小鼠注入等剂量的生理盐水，造模后缝合小鼠皮肤、常规消毒后使小鼠保持竖立状态20 s1.2.2 干预方法根据小鼠与人体间等效剂量换算0.66 g/mL对中药组小鼠进行灌胃，每日灌胃1次，空白组及模型组大鼠接受等剂量的生理盐水灌胃，3组均连续灌胃7 d，麻杏石甘汤：麻黄3 g、苦杏仁3 g、石膏9 g、甘草2 g1.2.3 检测指标与方法 1）一般状况评分：对3组小鼠精神状况、体质量、活动量、皮毛光泽度进行观察比较2）血细胞计数比较：对3组小鼠外周血白细胞计数、多核粒细胞激素（PMN）计数进行比较白细胞介素-6（IL-。