第三课时纯化大肠杆菌ppt课件.ppt

专题专题2 :2 :微生物的培育与运用微生物的培育与运用淮北市天一中学生物组 李伟三、实验操作三、实验操作 〔一〕制备牛肉膏蛋白胨培育基〔用于培育细菌〕〔一〕制备牛肉膏蛋白胨培育基〔用于培育细菌〕1 1．计算、称量．计算、称量操作步骤操作步骤2．溶化．溶化•3．调．调pH：　：　pH7．．6　　•4．过滤：这一步可以省去．过滤：这一步可以省去•5．加塞．加塞•6．包扎．包扎 7 7．灭菌．灭菌: : 高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌 8 8．倒平板．倒平板: : 待培育基冷却到待培育基冷却到50 ℃50 ℃左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近倒平板〔倒平板操作见课本〕近倒平板〔倒平板操作见课本〕2d2d后察看平后察看平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种. . 9 9．无菌检查：．无菌检查： 将灭菌的培育基放入将灭菌的培育基放入37℃37℃的温室中培育的温室中培育24—24—4848小时，以检查灭菌能否彻底小时，以检查灭菌能否彻底。

〔二〕纯化大肠杆菌〔二〕纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：平板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会呵斥划线不均匀，难一旦划破，会呵斥划线不均匀，难以到达分别单菌落的目的；以到达分别单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法构成规矩的菌落，菌落会沿着划破构成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会构成一个条状的菌落处生长，会构成一个条状的菌落稀释涂布平板法稀释涂布平板法本课题知识小结本课题知识小结: :选择培育基ü参与青霉素的培育基参与青霉素的培育基:ü 分别酵母菌、霉菌等真菌分别酵母菌、霉菌等真菌ü参与高浓度食盐的培育基参与高浓度食盐的培育基: ü 分别金黄色葡萄球菌分别金黄色葡萄球菌ü不加氮源的无氮培育基不加氮源的无氮培育基: ü 分别固氮菌分别固氮菌ü 不加含碳有机物的无碳培育基不加含碳有机物的无碳培育基: ü 分别自养型微生物分别自养型微生物ü 参与青霉素等抗生素的培育基参与青霉素等抗生素的培育基: ü 分别导入了目的基因的受体细胞分别导入了目的基因的受体细胞ü 参与氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核参与氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培育基苷的培育基:ü 分别杂交瘤细胞分别杂交瘤细胞问题讨论•假设硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻假设硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一同，我们配置什么样的培育即可以混合在一同，我们配置什么样的培育即可以将三种微生物分别？将三种微生物分别？碳源碳源氮源氮源能源能源硝化细菌硝化细菌CO2氨氨氨氨圆褐固氮菌圆褐固氮菌糖类等含糖类等含碳有机物碳有机物N2有机物有机物不固氮的蓝藻不固氮的蓝藻CO2铵盐、硝酸盐铵盐、硝酸盐光光倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术 1. 1.培育基灭菌后，需求冷却到培育基灭菌后，需求冷却到50 ℃50 ℃左右时，左右时，才干用来倒平板。

他用什么方法来估计培育基的温才干用来倒平板他用什么方法来估计培育基的温度？度？ 答：可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶，答：可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶，觉得锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可觉得锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进展倒平板了以进展倒平板了2.2.为什么需求使锥形瓶的瓶口经过火焰？为什么需求使锥形瓶的瓶口经过火焰？ 答：经过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：经过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基污染培育基3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，假设不小心将培育在倒平板的过程中，假设不小心将培育基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培育微生物吗？为什么？还能用来培育微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培育基外表的湿度也比较高，将平板倒置，后的培育基外表的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培育基外表的水分更好地挥发，又可以既可以使培育基外表的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染。

防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染 答：空气中的微生物能够在皿盖与皿底之答：空气中的微生物能够在皿盖与皿底之间的培育基上繁殖，因此最好不要用这个平板间的培育基上繁殖，因此最好不要用这个平板培育微生物培育微生物 平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法延续划线法延续划线法 。